海人藻酸（kainate, KA）受体在中枢神经系统中广泛分布，通过调节外周和中枢感觉神经元之间的兴奋性信号参与疼痛处理。近年研究发现，多个与KA受体功能相关的蛋白在KA受体功能调节机制中发挥重要作用，从而参与伤害性疼痛信号的传递。文章通过综述KA受体特点、KA受体在疼痛通路中的表达与分布以及KA受体功能调节机制，包括与之互相作用的多种蛋白，深入探讨KA受体在神经突触可塑性和痛觉敏化中的作用。

目的:研究内源性大麻素2-花生四烯酰甘油(2-AG)对海人藻酸(KA)损伤的A型钾通道的调制作用及其分子机制.方法:用KA处理原代培养的大鼠尾状核(CN)神经元,建立神经兴奋性毒性细胞模型;通过全细胞膜片钳记录,观察KA介导的兴奋性毒性及2-AG的神经保护作用过程中CN神经元上A型钾通道电学功能的改变.结果:在培养的大鼠尾状核神经元上,膜片钳实验显示KA明显降低CN神经元A型钾通道电流(IA)密度并改变通道电学功能:失活曲线斜率(k)和失活后恢复时间常数(τ)均显著增大.细胞孵育液中直接加入内源性大麻素2-AG或单酰甘油脂肪酶抑制剂URB602使2-AG水解减少而间接升高细胞内2-AG水平,均可通过大麻素受体1(CB1R)抑制KA诱导的IA密度降低,有效拮抗KA所致A型钾通道τ值和k值的增大,加快A型钾通道失活后恢复过程.结论:A型钾通道电学特性的改变可能是KA造成CN神经元兴奋性毒性损伤的机制之一.2-AG可通过CB1R途径调节A型钾通道功能,从而起到神经保护作用.

目的 探讨瞬时感受器电位辣椒素受体4型(TRPV4)在小鼠癫痫持续状态(SE)中的作用及其可能的机制.方法 本实验利用腹腔注射海人藻酸(KA)建立小鼠SE模型,随机分为Control组、KA 组、HC-067047 5 mg·kg-1 组、HC-067047 10 mg·kg-1 组、HC-067047 20 mg·kg-1 组及 Vehicle 组;依据Racine行为分级法记录小鼠癫痫发作程度,同时记录小鼠达到SE的潜伏期、各组小鼠SE发生率及小鼠存活率;利用Western-blot和Real-Time PCR检测海马组织中TRPV4表达水平;应用ELISA试剂盒检测海马组织中MDA、SOD和GSH含量.结果 观察到SE后6 h小鼠海马区TRPV4的表达水平升高(P＜0.05),在24 h达到高峰;预先应用TRPV4拮抗剂HC-067047延长了诱发小鼠SE的潜伏期(P＜0.05),减少SE的发病率(P＜0.05),增加小鼠的存活率(P＜0.05);此外,证实了 SE可以引起海马区MDA含量增加,SOD、GSH活性降低(P＜0.05),而HC-067047预处理可以降低MDA含量,增加SOD、GSH活性(P＜0.05).结果 TRPV4可能通过增加海马区氧化应激损伤参与小鼠癫痫持续状态.

目的 探讨新型喹唑啉酮类化合物9050对不同亚型GABAA受体功能的影响,并与其结构类似物甲喹酮(MTQ)比较;评价其对睡眠障碍、癫痫等潜在适应症的影响.方法 在爪蟾卵母细胞上表达不同亚型GABAA受体,应用双电极电压钳技术评价 9050的作用特点;连续3dsc给予利血平1 mg·kg-1构建小鼠抑郁致睡眠障碍模型,通过脑电/肌电记录评价9050药效;构建小鼠海人藻酸癫痫模型,评价9050的抗惊厥活性.结果 ① 在EC8 GABA存在下,9050对α1β2γ2,α2β2γ2,α4β2δ和α6β2δ受体有变构调节作用,其中,与突触外受体相比,9050对突触内受体,尤其是对α1β2γ2受体亲和力更强,效价更高,EC50为0.3 μmol·L-1;与突触内受体相比,9050对突触外受体,尤其是α6β2δ受体调节效能更高,最大调节效能可达400%以上;② 在没有GABA存在下,9050均可直接激动突触内和突触外受体,产生抑制性突触后电流;③ 在抑郁致睡眠障碍模型中,9050可提高睡眠稳定性,增加睡眠深度,降低睡眠碎片化;④在海人藻酸癫痫模型中,9050可延长阵发性痉挛和强直性痉挛潜伏期,降低惊厥发生次数和平均发作等级.结论 9050兼有对突触内外受体直接激动作用和变构调节作用,且具有改善抑郁致睡眠障碍和抑制海人藻酸诱导癫痫发作的潜力.

目的 探究抗精神药物5-HT2A受体及多巴胺D2受体拮抗剂奥氮平(olanzapine)对海马、额叶联合皮质及视觉皮质场电位功率谱变化,揭示奥氮平对大脑节律性脑电波的影响.方法 利用脑皮质脑电(ECoG)记录小鼠皮质不同脑区的节律性脑电波,采用卡巴胆碱及海人藻酸诱发海马CA3区的gamma节律脑电波,观察奥氮平对其影响.结果 与对照组相比较,奥氮平(0.1和0.3 mg·kg-1)未明显影响小鼠额叶联合皮质及视觉皮质的gamma波及theta波功率谱(n=5),奥氮平(0.6 mg·kg-1)降低了小鼠额叶联合皮质gamma波功率谱(n=9,P＜0.01),增强了视觉皮质的theta波功率谱(n=9,P＜0.05).与对照组相比较,奥氮平(5 μmol·L-1)降低了由卡巴胆碱及海人藻酸诱发海马CA3区的gamma波功率谱(n=3,P＜0.05).结论 5-HT2A受体及多巴胺 D2受体拮抗剂奥氮平可能通过影响海马、额叶联合皮质gamma波及视觉皮质的theta波参与对抗精神疾病.

目的 探究GluK2受体小泛素化修饰蛋白(SUMO) 2/3化在猪模型深低温停循环(DHCA)脑损伤中的作用机制.方法 将18只中华小型猪随机分为体外循环组(CPB组)、DHCA组和选择性脑灌注(SACP)组,每组6只.建立猪DHCA和SACP模型,术后2h处死猪留取海马区脑组织标本.蛋白质印迹法检测海马区脑组织中SUMO2/3化水平、GluK2、p-MLK3、MLK3、p-JNK3、JNK3表达;免疫共沉淀检测GluK2 SUMO2/3化的程度以及GluK2和MLK3蛋白之间的相互作用.TUNEL法检测海马区脑组织凋亡情况;免疫组织化学染色检测Bax、Bcl-2和Caspase-3表达.结果 DHCA组海马区脑组织中SUMO2/3和GluK2表达[(1.438±0.011)、(1.965 ±0.107)]较SACP组[(1.220±0.039)、(1.372±0.196),均P＜0.05]和CPB组[(0.443 ±0.025)、(0.986 ±0.181),均P＜0.01]明显增加.DHCA组海马区脑组织中GluK2-SUMO2/3和GluK2-MLK3表达较其他2组明显增加(均P＜0.01).DHCA组p-MLK3/MLK3和p-JNK3/JNK3表达较其他2组明显增加(均P＜0.05).TUNEL检测发现DHCA组海马区神经元凋亡最明显,凋亡率为64.8％,较CPB组(15.8％)和SACP组(47.0％)明显增加(均P＜0.001).免疫组织化学结果显示DHCA组海马区脑组织中Bax和Caspase-3表达较CPB组和SACP组明显增加,而Bcl-2表达较其他2组明显减少.结论 DHCA脑损伤时可能通过激活GluK2受体发生SUMO2/3化,增加GluK2受体和下游MLK3蛋白的相互作用,激活MLK3发生磷酸化,进一步激活下游的JNK3启动凋亡信号.

目的 探讨海人藻酸(KA)诱导大鼠海马CA1区硫氧还蛋白(Trx)巯基去亚硝基化的机制.方法采用KA侧脑室注射建立SD大鼠癫痫模型后随机分为七组,每组6只.KA组不用药,作为模型对照组;MK801组于注射KA前100min腹腔注射N-甲基-D-天冬氨酸受体抑制剂MK801 3mg/kg;NS102组于注射KA前20min侧脑室注射KA受体抑制剂NS102 2 mmol/μl;GYKI组于注射KA前20min侧脑室注射α-氨基-3-羟基-5-甲基-4-异恶唑丙酸受体抑制剂GYKI10μmol/μl;金诺芬组于注射KA前40min经侧脑室注射Trx还原酶抑制剂金诺芬1 nmol/μl;两个溶剂对照组于注射KA前分别注射等量生理盐水或DMSO组.另设假手术组.运用免疫印迹法分析各组Trx巯基亚硝基化水平.选取KA诱导Trx巯基去亚硝基化的最佳浓度和作用时间.结果 与KA 0μg/μl组相比,KA 0.06μg/μl组Trx巯基亚硝基化水平最低(P＜0.05).与KA0h组相比,KA6h组Trx巯基亚硝基化水平最低(P＜0.05).选取KA 0.06μg/μl作用6h为最佳剂量以及作用时间,与KA组相比,NS102和金诺芬可以抑制Trx巯基去亚硝基化(P＜0.O5),而 GYKI组儿在K801组和溶剂对照组之间的Trx巯基亚硝基化水平差异无统计学意义(P＞0.05).结论 在KA浓度为0.06μg/μl,作用时间为6h时,KA诱导大鼠海马CA1区Trx巯基去亚硝基化程度最强;KA受体抑制剂NS102和Trx还原酶抑制剂金诺芬能够抑制KA诱导的大鼠海马CA1区Trx巯基去亚硝基化.

目的:研究阶梯减压技术对于兔急性脑损伤后脑组织的保护作用及其对脑缺血再灌注损伤(CIRI)的影响.方法:建立兔急性加速性脑损伤模型,实验兔随机分为假手术组、阶梯减压组、快速减压组,观察术后24 h后兔脑组织中海人藻酸受体亚基5(GluR5)和海人藻酸受体亚基6(GluR6)的表达水平、脑组织微观病理变化.结果:术后24h,阶梯减压组GluR5的表达明显高于快速减压组,GluR6的表达明显低于快速减压组;脑组织HE染色阶梯减压组明显轻于快速减压组;阶梯减压组术中急性脑膨出的发生率)明显低于快速减压组.结论:阶梯减压技术治疗兔急性脑损伤能有效减轻CIRI,降低术中急性脑膨出发生率,实现明显的脑保护作用.

目的:探讨腺苷激酶(ADK)在幼鼠癫痫形成中的作用和相关机制.方法:海人藻酸(KA)诱导幼鼠痫性发作(SE),检测静止期(SE后14d)和慢性自发性癫痫(SRS)形成期(SE后42d)ADK的表达;部分幼鼠腹腔注射腺苷受体拮抗剂ABT-702,分为对照组(NC)、致痫组(SE)和SE后ABT-702干预组(SE+ABT-702).观察SRS在各组的差异,检测SRS形成期各组ADK,腺苷A1受体(A1R)和A2αR蛋白表达差异;尼氏染色观察海马神经元丢失和促炎性因子IL-18和IL-1β的表达在各组的差异.结果:KA诱导SE发作后,静止期及SRS形成期海马区ADK表达均增加;ABT-702抑制SRS慢性期ADK的活化,降低SRS发生率,抑制抑制海马神经元丢失;SE组ADK活化激活A2αR,诱导促炎性因子IL-18和IL-1β,ABT-702抑制A2αR及促炎性因子IL-18和IL-1β的活化.结论:SE诱导ADK持续活化,癫痫形成期腺苷A2α受体被激活,诱导海马神经元丢失和促炎性因子IL-18和IL-1β释放,在幼鼠慢性癫痫形成发挥重要作用.