目的:研究内源性大麻素2-花生四烯酰甘油(2-AG)对海人藻酸(KA)损伤的A型钾通道的调制作用及其分子机制.方法:用KA处理原代培养的大鼠尾状核(CN)神经元,建立神经兴奋性毒性细胞模型;通过全细胞膜片钳记录,观察KA介导的兴奋性毒性及2-AG的神经保护作用过程中CN神经元上A型钾通道电学功能的改变.结果:在培养的大鼠尾状核神经元上,膜片钳实验显示KA明显降低CN神经元A型钾通道电流(IA)密度并改变通道电学功能:失活曲线斜率(k)和失活后恢复时间常数(τ)均显著增大.细胞孵育液中直接加入内源性大麻素2-AG或单酰甘油脂肪酶抑制剂URB602使2-AG水解减少而间接升高细胞内2-AG水平,均可通过大麻素受体1(CB1R)抑制KA诱导的IA密度降低,有效拮抗KA所致A型钾通道τ值和k值的增大,加快A型钾通道失活后恢复过程.结论:A型钾通道电学特性的改变可能是KA造成CN神经元兴奋性毒性损伤的机制之一.2-AG可通过CB1R途径调节A型钾通道功能,从而起到神经保护作用.

目的:探讨内源性大麻素2-花生四烯酰甘油(2-AG)对脂多糖(LPS)损伤的大鼠尾核神经元L型电压门控钙通道(L-VGCC)电流的调制作用及其分子机制.方法:原代培养新生大鼠尾核神经元,分为对照组、LPS组、2-AG组、2-AG+LPS组、SR141716A(CB1受体反向激动剂)+2-AG+LPS组和AM630(CB2受体反向激动剂)+2-AG+LPS组,应用全细胞膜片钳记录2-AG对LPS损伤的大鼠尾核神经元L-VGCC电流的影响;采用Hoechst染色法观察2-AG对LPS诱导的尾核神经元损伤的影响,并用试剂盒测定尾核神经元caspase-3的活性.结果:(1)LPS能增强L-VGCC电流密度,且未影响L-VGCC激活及失活的电学特征;(2)2-AG能抑制LPS增强L-VGCC电流密度的作用;(3)LPS增强L-VGCC电流密度并非是通过CB1和CB2受体起作用的;(4)2-AG本身对尾核神经元L-VGCC电流密度、激活及失活等电流特性均不产生影响;(5)LPS诱导的尾核神经元caspase-3活性增强可被2-AG抑制,CB1受体反向激动剂SR141716A可取消2-AG的这种效应;(6)LPS可诱导尾核神经元表现出典型的凋亡特征,2-AG可使LPS诱导的核固缩细胞数目显著减少.结论:内源性大麻素2-AG可通过调节尾核神经元L-VGCC电流起抗炎作用和保护神经元的效应.

目的 探讨艾灸"足三里"和干姜提取液对正常大鼠胃能量相关因子的影响,采用代谢组学技术探索其对能量代谢的作用机制及物质基础.方法 通过艾灸大鼠"足三里"穴位和灌胃干姜水提液,检测胃组织的能量相关因子、体质量、体温、血清生化指标等,评价艾灸和干姜对胃能量代谢的影响,并通过血清代谢组学探讨其作用机制.结果 艾灸足三里可显著升高胃组织Na+-K+-ATP酶、Ca2+-ATP酶、Ca2+-Mg2+-ATP酶、SDH活性.灌胃干姜提取液可显著升高Mg2+-ATP酶、Ca2+-Mg2+-ATP酶、SDH活性.两种方式显著降低大鼠体质量,且对肝肾功能没有显著的影响.艾灸足三里后发现5种差异代谢物,分别为N-乳酸酰亮氨酸、异亮氨酸、D-谷氨酰胺、2-花生四烯酸甘油磷酸胆碱、PC(20:2(11Z,14Z)/14:0).给予干姜提取液后发现5种差异代谢物,分别为黄嘌呤、视黄酯、2-花生四烯酰甘油磷酸胆碱、花生四烯酸、3-羟胆酸.结论 艾灸足三里可通过调节氨基酸代谢、脂质代谢来调控胃的能量代谢,干姜水提液通过调节视黄醇代谢、嘌呤代谢、脂质代谢来调控胃的能量代谢.

目的 基于非靶标代谢组学探索溃疡性结肠炎(UC)脾气虚证的生物学基础.方法 采用液相色谱质谱联用方法对UC脾气虚证和湿热证患者血清进行代谢组学分析.结果 UC脾气虚证存在脂质代谢紊乱,与UC湿热证患者比较,UC脾气虚证血清中1-油酰基甘油磷酸胆碱、溶血磷脂、鞘氨醇、N-棕榈酰磷酸乙醇胺、棕榈酰肉碱、O-花生四烯酰缩水甘油等代谢产物丰度降低,2-亚油酰甘油丰度升高.ROC曲线结果显示,O-花生四烯酰缩水甘油、棕榈酰胺、2-亚油酰甘油可能是诊断UC脾气虚证的潜在生物标志物.结论 代谢组学方法有望揭示UC中医证候的生物学本质,为UC中医辨证提供一定客观依据.

目的:采用粪便代谢组学方法,探索长期高盐饮食对雄性C57BL/6J小鼠血糖的作用及机制.方法:将8只8周龄的小鼠分成2组,高盐组4只,对照组4只.对照组给予普通饲料,高盐组给予8％高盐饲料,干预22周后测量空腹血糖(FPG),进行葡萄糖耐受试验(GTT)和胰岛素耐受试验(ITT),并采用尾套法监测各组小鼠尾动脉收缩压和舒张压,收集小鼠粪便样本,应用液相色谱-质谱(LC-MS)联用技术进行代谢图谱分析,数据模式识别采用主成分分析(PCA).结果:与对照组相比,高盐组小鼠体质量显著下调(P＜0.01),棕色脂肪比重显著降低(P＜0.01),FPG值显著升高(P＜0.01),GTT的曲线下面积(AUC)显著升高(P＜0.05),收缩压显著升高(P＜0.05),而舒张压及ITT的AUC差异无统计学意义(P＞0.05).代谢组学分析发现,2组小鼠粪便代谢产物主成分存在差异,可进行区分,发现并鉴定了 12种潜在的生物标志物,包括3-羟基辛烷基肉碱、2-辛烯酸、地红霉素、NBD-硬脂酰-2-花生四烯醇-sn-甘油、20-乙基-前列腺素E2、甜菊苷、双哌啶、1ysyl-蛋氨酸、去甲胆酸、三萜醇黄皮萜酵、7,8,7',8'-四脱氢黄质及磷脂酰甘油磷酸甲酯.这些代谢物主要参与氨基酸代谢、胰岛中前列腺素代谢及氧化应激炎症等过程.结论:长期高盐饮食不仅会造成小鼠血糖代谢异常,同时氨基酸代谢、胰岛中前列腺素代谢及氧化应激炎症等过程也存在调控失衡.

目的 探讨Forskolin对体外培养小鼠不同T细胞亚群的影响及对CD8+记忆T细胞的富集作用.方法 25只C57BL/6小鼠,采用密度梯度离心法分离脾脏淋巴细胞,应用CD3+T细胞分离试剂盒分选CD3+T细胞,经体外培养后分为对照组和 5、10、20 μmol/L Forskolin 组,5、10、20 μmol/L Forskolin 组分别加入 5、10、20 μmol/L Forskolin,对照组加入等体积DMSO.采用台盼蓝染色法对4组总T细胞数进行计数,应用流式细胞仪检测4组CD8+记忆T细胞比率,选择与对照组差异最大的Forskolin浓度进行后续实验.采用液相色谱-质谱联用法分析对照组和20 μmol/L Forskolin组非靶向代谢组学,应用流式细胞仪检测对照组和20 μmol/L Forskolin组CD4+T细胞、CD8+T细胞比率及增殖活跃(低CFSE荧光强度)的CD8+记忆、非记忆T细胞比率,计算增殖活跃的CD8+记忆与非记忆T细胞比值(CD8+记忆/非记忆 T 细胞).结果 对照组和 5、10、20 μmol/L Forskolin 组总 T 细胞数[(102.91±2.91)％、(69.84±6.88)％、(31.61±2.52)％、(14.02±2.12)％]依次降低(P＜0.05);5、10、20 μmol/L Forskolin 组 CD8+记忆 T 细胞比率[(23.03±12.06)％、(31.58±10.39)％、(44.35±9.10)％]依次升高(P＜0.05),对照组[(22.58±6.33)％]与5μmol/L Forskolin组比较差异无统计学意义(P＞0.05);选择与对照组差异最大的20 μmol/L Forskolin组进行后续实验.对照组与20 μmol/L Forskolin组差异代谢物有123种,主成分分析显示2组细胞代谢特征存在差异,20 μmol/L Forskolin组三羧酸循环代谢物焦磷酸硫胺素、琥珀酸酯水平均低于对照组(P＜0.05),脂肪酸代谢物十六烯酸、鞘磷脂、1-硬脂酰基-2-花生四烯酰基-sn-甘油、二十碳二烯酸水平均高于对照组(P＜0.05),糖酵解代谢物α-D-葡萄糖1-磷酸、2-脱氧-D-葡萄糖6-磷酸水平与对照组比较差异均无统计学意义(P＞0.05).20 μmol/L Forskolin组CD8+T细胞比率[(91.24±3.71)％]高于对照组[(81.14±9.22)％](t=9.297,P=0.008),CD4+T 细胞比率[(0.57±0.45)％]低于对照组[(8.33±6.58)％]](t=12.449,P=0.003).20 μmol/L Forskolin 组增殖活跃的 CD8+记忆 T 细胞比率[(37.50±1.15)％]高于CD8+非记忆T细胞[(6.46±0.75)％](t=72.779,P＜0.001),对照组增殖活跃的CD8+记忆T细胞比率[(49.73±2.40)％]低于 CD8+非记忆 T 细胞[(70.90±1.39)％](t=19.289,P＜0.001);20 μmol/L Forskolin 组增殖活跃的CD8+记忆、非记忆T细胞比率均低于对照组(t=7.956,P=0.001;t=70.692,P＜0.001),CD8+记忆/非记忆T细胞(5.84±0.50)高于对照组(0.70±0.22)(t=17.624,P＜0.001).结论 体外培养过程中Forskolin对小鼠不同T细胞亚群的增殖抑制存在差异,对CD4+T细胞的抑制强于CD8+T细胞,对CD8+非记忆T细胞的抑制强于CD8±记忆T细胞,添加Forskolin有助于CD8+记忆T细胞富集.