目的:建立消渴平合剂中多糖和蔗糖、葡萄糖、果糖的含量测定方法.方法:采用苯酚-硫酸法测定消渴平合剂中多糖的含量;采用HPLC-ELSD法测定消渴平合剂中蔗糖、葡萄糖、果糖的含量,色谱柱为agilent Carbohydrate(4.6×250mm,5μm),流动相为乙腈-水(75∶25),流速1.0mL/min,柱温25℃,蒸发光放射检测器(ELSD):氮气流速1.6L/min,蒸发管温度80℃,漂移管温度60℃.结果:苯酚-硫酸法测定多糖经方法学考察,葡萄糖在2.61～36.54μg/mL浓度范围内与吸光度呈良好的线性关系,平均回收率为100.66%;HPLC-ELSD法测定果糖、葡萄糖、蔗糖经方法学考察,蔗糖、葡萄糖、果糖分别在1.45～9.68μg、1.61～10.75μg、3.01～20.05μg的范围内呈良好的对数线性关系,蔗糖、葡萄糖、果糖的回收率分别为96.52%、97.38%、97.17%.结论:苯酚-硫酸法结合紫外分光光度法可以较为准确地测定该合剂中多糖含量;HPLC-ELSD法可同时快速准确地测定该合剂中蔗糖、葡萄糖、果糖的含量.

目的:观察消渴平合剂对db/db小鼠肾脏P38MAPK-FN信号通路表达的影响,探讨其防治糖尿病肾病的机制.方法:24只db/db小鼠,按随机数字表法分为模型组、消渴平组,厄贝沙坦组,每组各8只,另取8只db/m小鼠为正常对照组,连续给药8周后分别检测各组小鼠体质量、血肌酐、尿素氮.留取肾组织,采用Western blot检测肾脏P38MAPK、FN蛋白的表达、荧光定量PCR检测肾脏P38MAPKmRNA、FNmRNA的表达.结果:消渴平合剂可以明显降低db/db小鼠体质量及血肌酐、尿素氮水平.与正常对照组相比,模型组小鼠肾脏P38MAPK、FN的表达显著升高(P＜0.01);与模型组相比,消渴平组可明显抑制P38MAPK、FN的表达(P＜0.05).结论:消渴平合剂可明显减轻db/db小鼠肾脏损伤,其机制可能与抑制肾脏P38MAPK-FN信号通路激活有关.

目的:观察消渴平合剂对糖尿病肾病db/db小鼠肾脏足细胞裂孔隔膜蛋白Nephrin、Podocin、CD2AP表达的影响,探讨其防治糖尿病肾病的机制.方法:选取12只db/m小鼠为正常对照组,其余36只db/db小鼠随机分为模型组、消渴平组、厄贝沙坦组,每组各12只;连续给药8周后分别检测各组小鼠空腹血糖(FBG)、胱抑素C(CysC)及24 h尿蛋白(24 hUP).采用Real-time PCR、Western blot检测肾脏足细胞nephrin、podocin及CD2AP mRNA和蛋白表达变化.结果:消渴平合剂可以明显降低db/db小鼠FBG、CysC和24 hUP.与正常对照组相比,模型组小鼠肾脏足细胞nephrin、podocin及CD2AP的表达明显降低(P<0.01);与模型组相比,消渴平组nephrin、podocin及CD2AP的表达明显上调(P<0.05),与厄贝沙坦组比较无明显差异(P>0.05).结论:消渴平合剂可以降低db/db小鼠空腹血糖、胱抑素C及24 h尿蛋白,保护肾功能,其机制可能与上调肾脏足细胞nephrin、podocin和CD2AP表达有关.

目的:观察消渴平(xiaokeping,XKP)含药血清对高糖诱导的大鼠肾小球系膜细胞增殖、周期及转化生长因子(TGF-β1)表达的影响,探讨其治疗DKD的作用机理.方法:使用不同浓度的消渴平含药血清及厄贝沙坦含药血清与高糖共同培养大鼠系膜细胞,应用MTT法观察各组细胞增殖情况,流式细胞仪检测细胞周期变化,Western-blot及RT-PCR检测TGF-β1蛋白和mRNA表达情况.结果:与空白对照组相比,高糖组系膜细胞增殖明显增加(P<0.01),消渴平可呈浓度依赖性地抑制系膜细胞增殖.细胞周期检测结果显示,与高糖组相比,消渴平高剂量组可明显降低S期系膜细胞的百分比(P<0.05),Western-blot及RT-PCR检测显示消渴平可显著减少TGF-β1表达(P<0.05).结论:消渴平可明显抑制高糖诱导的大鼠系膜细胞增殖,阻滞细胞周期,降低TGF-β1表达,这可能是其防治DKD的机制之一.

目的:观察消渴平合剂对糖尿病肾病db/db小鼠肾脏NF-κB(核因子-κB)、IL-6(白介素-6)表达的影响,探讨其防治糖尿病肾病的机制.方法:选取24只db/db小鼠,随机分为模型组、厄贝沙坦治疗组、消渴平合剂治疗组,每组各8只,另取8只db/m小鼠作为正常对照组;各组小鼠分别连续给药8周后,检测各组小鼠糖化血清蛋白、三酰甘油、胆固醇、低密度脂蛋白、高密度脂蛋白的变化.留取肾组织,采用荧光定量PCR检测肾脏NF-κB p65mRNA、IL-6 mRNA的表达,Western blot检测肾脏NF-κB p65蛋白、IL-6蛋白的表达.结果:消渴平合剂可以明显降低db/db小鼠糖化血清蛋白水平,可明显降低db/db小鼠胆固醇、三酰甘油以及低密度脂蛋白水平,显著升高高密度脂蛋白水平.荧光定量PCR及Western blot结果显示,与模型组相比,消渴平治疗组显著降低NF-κB p65mRNA、IL-6 mRNA的表达(P<0.05),可明显抑制NF-κB p65蛋白、IL-6蛋白的表达(P<0.05).结论:消渴平合剂可明显降低db/db小鼠糖化血清蛋白水水平,调节血脂,其机制可能与抑制肾脏NF-κB p65、IL-6基因和蛋白的表达有关.

目的:观察消渴平(Xiaokeping,XKP)含药血清对高糖诱导的大鼠肾小球系膜细胞凋亡的影响,探讨其治疗DKD的作用机理.方法:使用不同浓度的消渴平含药血清及厄贝沙坦含药血清与高糖共同培养大鼠肾小球系膜细胞,应用TUNEL法检测细胞凋亡,荧光定量PCR检测大鼠肾小球系膜细胞中B淋巴细胞瘤基因相关X蛋白(Bax mRNA)、B淋巴细胞瘤基因-2(Bcl-2 mRNA)表达,Western-blot检测系膜细胞中活化半胱天冬酶3(cleaved caspase-3)、Bax、Bcl-2及细胞色素C(Cytochrome c,Cyt-C)的蛋白表达情况.结果:与空白对照组相比,高糖组细胞凋亡显著增加,cleaved caspase-3和Bax、Cyt-C表达显著增加(P<0.01),Bcl-2表达明显减少(P<0.01).与高糖组相比,消渴平高剂量组可显著抑制高糖诱导的系膜细胞凋亡,抑制系膜细胞cleaved caspase-3和Bax、Cyt-C表达(P<0.05),增加Bcl-2表达(P<0.05),与厄贝沙坦组相比较无明显差异(P>0.05).结论:消渴平通过抑制系膜细胞Bax表达,提高Bcl-2表达,减少细胞色素C易位,从而对高糖诱导的系膜细胞凋亡具有保护作用,这可能是其防治DKD的机制之一.

糖尿病属于中医学"消渴"范畴,中医注重整体观念、辨证论治,中药多靶点、多途径的作用特点,对于糖尿病这类多因素致病的疾病有良好疗效.消渴平合剂是我院院内制剂,由黄芪、山药、生地、麦冬、天花粉、丹参、菊花、枸杞子组成,具有益气养阴、生津润燥之功效,临床应用疗效显著.但其作用的化学物质及具体机制仍不清楚.本研究通过网络药理学对消渴平合剂的主要活性成分进行分析,并对其治疗糖尿病的潜在作用靶点进行生物信息学分析,旨在为研究消渴平合剂治疗糖尿病的机制提供研究思路,以期为临床推广使用提供依据.