目的:探讨温肺降浊方通过 Aβ25-35诱导PC12细胞损伤对线粒体自噬的影响.方法:通过重组大鼠β-NGF分化PC12细胞,Aβ25-35干预其成为阿尔茨海默病细胞模型,确定Aβ25-35造模的最佳浓度和时间点,设立温肺降浊方含药血清低(2％)、中(4％)、高(8％)浓度组.MDC染色和JC-1染色法观察自噬小体和线粒体膜电位,免疫荧光化学染色、qPCR和Western Blot检测各组细胞中PINK1、PARKIN、Ubl、Ub、p-Ub、LC3B mRNA和(或)蛋白表达.结果:β-NGF分化PC12细胞在第6天后成为海马神经元细胞形态结构,AD细胞造模条件以5 μmol/L终浓度的Aβ25-35干预48 h最佳.与正常对照组比较,模型组自噬小体显著增多,线粒体膜电位明显降低,PINK1、PAR-KIN、Ubl、Ub、p-Ub、LC3B mRNA和(或)蛋白表达显著升高(P＜0.05).与模型组比较,温肺降浊方含药血清可使模型细胞自噬小体减少,线粒体膜电位明显升高,PINK 1、PARKIN、Ubl、Ub、p-Ub、LC3B mRNA和(或)蛋白表达显著降低(P＜0.05).结论:温肺降浊方可减轻 Aβ25-35诱导的PC12细胞损伤,其机制可能与PINK1/PARKIN介导的线粒体自噬通路有关.

"时脏"理论源自《黄帝内经》,其内容蕴含中医学理论体系中"五脏一体"和"天人合一"的学术思想.近年来,随着脑卒中发病率不断上升,卒中后认知障碍(PSCI)的患病率逐渐升高.中医学认为,PSCI病位在脑,但痰、郁、虚、瘀等致病因素皆由五脏病损所致,因此,单纯从脑论治PSCI难免局限.本文基于"时脏"理论从四时五脏分别论述PSCI的病因、病机及治疗思路,春季气机失调则选用逍遥丸以疏肝解郁理气机,夏季血少神伤则选用天王补心丹以养血宁心安脑神,长夏脾虚痰阻则选用开心散以健脾醒神除瘀滞,秋季气少魄离则选用温肺降浊方以补肺降浊养神明,冬季髓减毒生则选用地黄饮子以豁痰填精益神智.从"时脏"理论论治PSCI体现出中医学整体观念与辨证论治思想,为PSCI的治疗提供新的方法与思考.

目的:观察温肺降浊方对血管性痴呆(VaD)模型大鼠细胞外调节蛋白激酶(ERK1/2)信号通路的影响,探讨其治疗 VaD可能的相关作用机制.方法:将雄性 SD大鼠随机分为假手术组和模型组(等体积 0.9％氯化钠溶液灌胃),温肺降浊方低、中、高剂量组(1.5、3、6 ml剂量灌胃).观察造模后大鼠水迷宫评分和 HE 病理变化,免疫组化、RT-qPCR和Western blot检测海马组织中ERK1/2、钙蛋白酶(Calpain)、Bcl-2 关联死亡启动子重组蛋白(Bad)、B淋巴细胞瘤-xl(Bcl-xl)蛋白和 mRNA表达情况.结果:与假手术组相比,模型组和温肺降浊方各剂量组大鼠逃避潜伏期延长、穿越平台次数缩短(P<0.05),海马组织形态稀疏、水肿及核缩小;海马组织 ERK1/2、Calpain、Bad 蛋白和 mRNA表达升高(P<0.05),Bcl-xl蛋白和 mRNA表达下降(P<0.05).与模型组比较,温肺降浊方高剂量组大鼠逃避潜伏期缩短、穿越平台次数增加(P<0.05),海马组织形态逐渐紧密、水肿减少,数量增多;海马组织ERK1/2、Calpain、Bad蛋白和 mRNA表达下降(P<0.05),Bcl-xl 蛋白和 mRNA 表达升高(P<0.05).结论:血管性痴呆可能与大鼠海马中的 ERK1/2、Calpain、Bad蛋白升高及 Bcl-xl 蛋白降低有关,温肺降浊方可以抑制 VaD大鼠海马中的 ERK1/2 通路激活,减少神经细胞凋亡,延缓疾病进展,改善血管性痴呆大鼠的学习记忆能力.

目的 通过药效、急毒实验筛选温肺降浊方的提取工艺,并以正交试验进行优化,确定温肺降浊方的最佳提取工艺.方法 对不同工艺样品进行急性毒性实验,并以血管性痴呆(VD)大鼠的学习和记忆能力的改善程度为药效指标,综合急毒与药效实验的结果,筛选出最佳工艺方案;以多个成分含量和出膏率为指标,采用正交试验筛选溶剂倍量、提取时间和提取次数的最优水平,并进行验证.结果 急毒实验结果显示所有小鼠均健康存活,未见明显毒性反应.药效实验结果表明白附片、党参、炙甘草混合水提,三七、干姜、酒大黄混合醇提为温肺降浊方的最佳提取方案;最优提取工艺为白附片先煎2h,再入党参、炙甘草加10倍水加热回流提取3次,每次l h;三七、干姜、酒大黄加6倍70％乙醇加热回流提取3次,每次1.5 h.结论 温肺降浊方能明显改善VD模型大鼠的学习和记忆能力,优选的工艺条件合理可行,为温肺降浊方的后续开发提供依据.

目的 观察温肺降浊方联合盐酸多奈哌齐片治疗血管性痴呆的临床疗效,并从氧化应激角度探讨其作用机制.方法 将60例血管性痴呆患者随机分为治疗组30例和对照组30例.对照组予盐酸多奈哌齐片口服,治疗组予盐酸多奈哌齐片和温肺降浊方口服,2组均用药2个月.观察2组患者治疗前后简易精神量表(MMSE)评分、日常生活活动量表(ADL)评分和血清超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量的变化,评价2组临床疗效,统计2组不良反应发生情况.结果 治疗后2组患者MMSE评分和血清SOD活性均明显升高(P均＜0.05),且治疗组均明显高于对照组(P均＜0.05);2组患者ADL评分和血清MDA含量均明显降低(P均＜0.05),且治疗组均明显低于对照组(P均＜0.05).治疗组临床总有效率为85.7％,对照组总有效率为72.4％,治疗组明显高于对照组(P＜0.05).2组患者用药过程中均未出现严重不良反应.结论 温肺降浊方联合盐酸多奈哌齐片治疗血管性痴呆疗效明显优于单用盐酸多奈哌齐片,其机制可能与提高血清SOD活性及降低MDA含量有关.

目的 观察温肺降浊方对血管性痴呆(VD)大鼠海马CA1区神经元凋亡及Bcl-2、Bax蛋白表达的影响,探讨温肺降浊方对VD大鼠海马神经元的保护机制.方法 取SD大鼠,采用双侧颈总动脉永久性结扎法制做VD模型大鼠,将造模成功的大鼠随机分为VD模型组,温肺降浊方低、中、高剂量组及石杉碱甲组,另设假手术组.灌胃给予相应药物治疗,连续给药30 d后,用TUNEL法检测大鼠海马CA1区神经元凋亡的情况,Western印迹检测海马组织Bcl-2、Bax蛋白的表达.结果 TUNEL结果显示,温肺降浊方各组神经元凋亡指数较模型组明显降低(P<0.01).Western印迹结果显示,温肺降浊方各组大鼠海马组织Bcl-2蛋白表达较模型组明显增加(P<0.01),Bax蛋白表达较模型组明显减少(P<0.01).结论 温肺降浊方可通过提高海马组织Bcl-2蛋白表达,降低Bax蛋白表达,减少VD模型大鼠海马CA1神经元的凋亡,保护神经元,改善VD大鼠学习记忆能力.

目的 基于ROCK2-shRNA转染技术,探讨温肺降浊方对血管性痴呆大鼠学习、记忆能力及海马组织病理形态的影响.方法 将60只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、中药组、ROCK2干扰组、阴性对照组、中药+ROCK2干扰组,每组10只.除假手术组外,其余组均采用双侧颈总动脉永久性结扎法制备血管性痴呆模型.造模成功后,ROCK2 干扰组及中药+ROCK2 干扰组将AAV9-ROCK2-shRNA注射至大鼠海马组织,ROCK2 干扰组同时给予生理盐水灌胃4周,中药+ROCK2干扰组同时给予温肺降浊方2 g/(kg·d)灌胃4周;阴性对照组同法注射空载体腺相关病毒,同时给予生理盐水灌胃4周;中药组给予温肺降浊方2 g/(kg·d)灌胃4 周,假手术组、模型组给予生理盐水灌胃4周.分别于术后1周及4周,采用Morris水迷宫测试大鼠学习、记忆能力;术后4周处死各组大鼠,电镜观察海马神经元突触超微结构,尼氏染色法观察海马组织中神经元的分布、形态及尼氏小体数量,Tunel染色检测海马神经元凋亡情况.结果 术后1周,模型组与各干预组大鼠逃避潜伏期、跨越平台次数比较差异均无统计学意义(P均>0.05);术后4周,与假手术组比较,模型组大鼠逃避潜伏期延长(P<0.05),穿越平台次数明显减少(P<0.05);与模型组比较,中药组、ROCK2干扰组及中药+ROCK2 干扰组大鼠逃避潜伏期均明显缩短(P均<0.05),跨越平台次数均明显增加(P均<0.05);与ROCK2组及中药组比较,中药+ROCK2干扰组大鼠逃避潜伏期更短(P均<0.05),穿越平台次数更多(P均<0.05).与假手术组比较,模型组大鼠神经元分布散乱,突触形态紊乱,细胞器破裂消失,尼氏小体数目明显减少(P<0.05),海马神经元细胞凋亡数明显增加(P<0.05);与模型组比较,中药组、ROCK2干扰组及中药+ROCK2干扰组大鼠神经元损伤明显改善,海马神经元突触形态及细胞器结构较完整规则,尼氏小体数量明显增加(P均<0.05),海马神经元细胞凋亡数明显减少(P均<0.05);与ROCK2组及中药组比较,中药+ROCK2干扰组大鼠神经元突触形态更规则、细胞器更完整,且尼氏小体数目明显增多(P均<0.05),海马神经元细胞凋亡数明显减少(P均<0.05);中药组与ROCK2干扰组各观察指标比较差异均无统计学意义(P均>0.05).结论 温肺降浊方能明显改善血管性痴呆大鼠的学习与记忆能力,机制可能与其能降低ROCK2表达,进而抑制RhoA/ROCK2信号通路的传导,改善海马神经元结构损伤,减少神经细胞凋亡有关.