目的:探讨激活态雪旺细胞(activated schwann cells，ASCs)干预骨髓间基质细胞(bone marrow stromal cells，BMSCs)联合异种神经移植体(acellular nerve xenograft，ANX)修复大鼠坐骨神经缺损的效果。方法:取大鼠骨髓腔内BMSCs，另取大鼠的ASCs和普通SCs，行原代培养。将两种细胞置于Transwell培养皿中培养并分成三组：BMSCs组，SCs-BMSCs组及ASCs-BMSCs组。在培养皿中培养后第2、4、6和8天，用CCK-8法检测各组BMSCs生物学活性，通过q-PCR检测各组脑源性神经营养因子(BDNF)、神经生长因子(NGF)和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)的mRNA表达水平。在无菌条件下制备10 mm坐骨神经缺损的大鼠模型，制作异种神经支架复合体(兔源胫神经)。将SD大鼠分为三组(n＝10)：ANX＋BMSCs组，ANX＋SCs-BMSCs组及ANX＋ASCs-BMSCs组。将各组细胞打入支架，复合支架培养3 d，移植到大鼠模型中。术后8周通过神经电生理检测各组患肢感觉神经传导速度(sensory nerve conduction velocity，SCV)，使用q-PCR检测神经移植体内神经营养因子(BDNF、NGF和bFGF)表达水平，另比较三组模型的下肢患侧/健侧腓肠肌细胞横截面积比恢复率。结果:CCK-8测定发现共培养系统中BMSCs组细胞增殖活性强于单细胞组，第2天和第4天，三组的活性差异无统计学意义( P>0.05)，第6天ASCs-BMSCs组增殖活性强于BMSCs组与SCs-BMSCs组，差异有统计学意义( P<0.05)，BMSCs组与SCs-BMSCs组之间差异无统计学意义( P>0.05)。通过q-PCR检测BMSCs组中BDNF、NGF及bFGF的mRNA表达最低，ASCs-BMSCs组含量最高( P<0.05)。经8周饲养后的动物实验，通过检测发现，ANX-ASCs-BMSCs组的SCV，ANX内相关神经因子表达量以及ANX-ASCs-BMSCs组的大鼠患侧/健侧腓肠肌肌细胞横截面积均最大。 结论:ASCs能够促进BMSCs的分化增殖；运用ANX-ASCs-BMSCs促进周围神经功能再生。

外周神经损伤后雪旺细胞由非激活态雪旺细胞(SCs)转变为激活态雪旺细胞(ASCs)[1].细胞增殖发生变化,但基因层面机制仍不清楚.一、材料与方法应用DNA甲基化免疫共沉淀技术(MeDIP)检测ASCs与SCs之间的甲基化差异的增殖相关基因.通过DAVID和Cytoscape软件进行基因本体(G0)功能分析和基因组百科全书(KEGG) Pathway分析.二、结果ASCs增殖速率高于SCs.ASC与SCs共检测到912个甲基化差异基因与增殖功能相关,如胎盘生长因子、纤维母细胞生长因子2、纤维母细胞生长因子9、表皮生长因子.通过KEGG通路分析示磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)-蛋白激酶B(Akt)通路、Ras信号通路、丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路等与增殖关系密切.

目的 探讨移植NRG1转染的雪旺细胞对脊髓损伤大鼠mTOR信号通路的影响.方法 体外分离培养雪旺细胞, 免疫荧光鉴定;将pcDNA3.1-NRG1重组质粒通过Fugen6转染雪旺细胞, 用免疫荧光法检测细胞转染率.参照Nystrom's压迫方法制作大鼠脊髓压迫损伤模型, 于伤后第7天移植转基因雪旺细胞, 细胞移植7周后结束实验, 每周对实验动物进行BBB评分.实验分为假手术组、脊髓损伤组与转基因雪旺细胞移植组.Western blot方法检测各组大鼠脊髓损伤部位p-mTOR蛋白的表达.结果 成功实现激活态雪旺细胞体外分离、培养和鉴定, 并成功转染雪旺细胞, 细胞转染率为62.25％.与脊髓损伤组相比, 在细胞移植后的第3周开始, 转基因雪旺细胞移植组大鼠的BBB评分显著升高 (P＜0.05) .与假手术组比较, 脊髓损伤组与转基因雪旺细胞移植组大鼠脊髓损伤部位p-mTOR的蛋白表达水平显著降低 (P＜0.05), 但转基因雪旺细胞移植组比脊髓损伤组显著升高 (P＜0.05) .结论 移植NRG1转染的雪旺细胞能够有效促进脊髓损伤大鼠神经功能的恢复, 其机制可能与激活mTOR信号通路有关.