目的 以球药隔重楼Paris fargesii根茎、茎和叶为材料,探究螺甾烷型重楼皂苷的生物合成基因.方法 采用HPLC分析6个螺甾烷型重楼皂苷含量,进一步利用Illumina HiSeq X Ten平台进行转录组测序,结合定量和转录组数据进行生信分析.结果 6个螺甾烷型重楼皂苷在球药隔重楼根茎、茎和叶中的含量具有显著差异.Illumina转录组测序共获得61 755条非冗余unigenes,其中30 263条(49.0％)被成功注释.催化生成薯蓣皂苷元的31个关键基因均被成功鉴定,且基因表达模式与皂苷的积累水平总体一致,其中IDI、8,7SI-4、CYP90G4、SMO2-2、C5-SD1、CYP51G、C14-R-2、HMGCR、CPI-5、CYP94D108、CAS、HMGCS、SMO1-3、SSR1-3、SQS、ispH和DXR等基因与重楼皂苷的积累呈显著正相关.共获得了 61条尿苷二磷酸糖基转移酶(UGT)基因,其中30条潜在参与重楼皂苷的糖基化修饰.结论 球药隔重楼根茎、茎和叶中皂苷合成基因表达模式与皂苷积累规律存在一致性,鉴定的基因可指导该类活性产物的生物合成途径解析.

目的:比较6种重楼属植物根茎中皂苷的含量及不同生长年限的重楼根茎中皂苷的含量.方法:采集6个品种、不同年限的重楼属植物根茎,采用液相色谱-串联质谱法(LC-MS/MS法)测定根茎中9种皂苷的含量.结果:重楼根茎中皂苷含量因生长年限不同而变化,总体呈先上升后下降的趋势;七叶一枝花与竹溪重楼中的皂苷总含量于第6年达到峰值,球药隔重楼和毛重楼中皂苷总含量于第7年达到峰值,长药隔重楼中皂苷含量于第4年达到峰值;不同重楼属植物中的皂苷种类及其含量存在一定的差异;重楼皂苷Ⅰ含量在七叶一枝花中最高,重楼皂苷Ⅱ含量在滇重楼中最高,重楼皂苷Ⅵ和重楼皂苷Ⅶ在球药隔重楼中的含量最高;球药隔重楼4种皂苷总含量较高.结论:重楼属植物中皂苷含量的累积与生长年限关系密切,除中国药典收载品种外,其他品种的重楼亦具有较大开发潜力.

目的 比较6种重楼属植物中不同部位的9种皂苷类成分的含量,为开发新的药用部位和新药源提供依据,以充分利用重楼资源.方法 分别提取六种重楼属植物的主根、须根、茎、叶、花梗、花萼中的重楼总皂苷,采用液相色谱-串联质谱法(LC-MS/MS法)检测分析九种重楼皂苷的含量.结果 非主根部分的样品中有15个样品的四种皂苷总含量要高于0.6％,最高可达3.49％,是药典标准的5.82倍;其中花萼和须根样品中九种皂苷含量较高.结论 重楼属植物的须根和花萼部分可考虑入药或作为提取皂苷类成分的原料;除《中国药典》收载的正品重楼外,球药隔重楼和竹溪重楼也具有较高的药用价值.

目的:分析长药隔重楼内生菌门类及不同部位真菌群落差异,为寻找促进有效组分合成的功能菌群的研究奠定基础.方法:利用高通量测序技术对陕产长药隔重楼植物内生真菌及根际土菌群基因组遂行扩增子序列测定,并对菌群多样性及不同部位内生真菌群落差异分析.结果:长药隔重楼内生真菌群落多样性Chao1指数、ACE指数、Shannon指数及Simpson指数均表现为根＞叶＞根茎.根际土壤优势真菌为担子菌门,根部优势门为球囊菌门真菌,根茎及叶的优势菌群为子囊菌门.结论:长药隔重楼根际土壤与根、根茎及叶部优势菌群多样性及群落均表现出显著性差异,该实验为挖掘重楼属内生菌对重楼代谢产物的合成调控产生影响及影响机制提供研究基础.

重楼为百合科植物云南重楼Paris polyphylla var.yunnanensis或七叶一枝花P.polyphylla var.chinensis的干燥根茎.针对现行重楼药材标准存在的问题,前期研究提出“删除重楼皂苷Ⅵ,增补重楼皂苷H,以重楼皂苷Ⅰ,Ⅱ,H和Ⅶ的总量进行限度控制”.为了考察更广范围内重楼样品中重楼皂苷H的含量以及重楼皂苷Ⅰ、重楼皂苷Ⅱ、重楼皂苷H和重楼皂苷Ⅶ的总量,该研究基于2015年版《中国药典》重楼标准定量方法的色谱条件,进行了同步测定重楼皂苷Ⅰ、重楼皂苷Ⅱ、重楼皂苷H和重楼皂苷Ⅶ含量的方法学验证,测定了69批不同来源重楼样品的含量;同时,测定了易混伪药材头顶一颗珠以及重楼属7种近缘植物根茎中5种重楼皂苷的含量.结果 表明重楼皂苷Ⅰ、重楼皂苷Ⅱ、重楼皂苷H和重楼皂苷Ⅶ分别在0.006 48～0.828,0.00652～0.834,0.00617～0.790,0.00631～0.808 g·L-1线性关系良好,平均加样回收率在100.2％ ～ 101.4％,RSD均小于3.5％.方法 学验证均符合含量测定要求.36批不同产地的七叶一枝花样品中重楼皂苷Ⅰ、重楼皂苷Ⅱ、重楼皂苷H和重楼皂苷Ⅶ的总量在0.050 9％ ～ 3.99％(不含3批未检出);33批不同产地的云南重楼样品中4种成分总量在0.115％～3.23％.同属近缘植物中,球药隔重楼和长柱重楼中甾体皂苷含量较高,狭叶重楼、金线重楼、黑籽重楼含量较低,毛重楼几乎不含皂苷.饮片易混伪品头顶一颗珠中重楼皂苷Ⅵ在0.526％～1.55％,并且不含重楼皂苷H.建议以干燥品计,含重楼皂苷Ⅰ、重楼皂苷Ⅱ、重楼皂苷H和重楼皂苷Ⅶ的总量不得少于0.80％进行限度控制,以提升商品重楼药材质量,遏制低含量的重楼属近缘种(比如毛重楼、黑籽重楼和狭叶重楼等)以及头顶一颗珠的混伪现象.

1 病例资料患者,男性,61岁,因"鼻梁部肿胀疼痛20余天"入院.20天前患者无明显诱因出现鼻梁部肿胀疼痛,伴鼻塞、头痛,无流涕,查鼻内镜:双鼻窦炎;鼻中隔膨隆.门诊按鼻窦炎治疗,后患者鼻部肿胀疼痛,鼻塞较前加重,伴头痛.入院查体:一般情况可,心、肺、腹及神经系统未见阳性体征,全身浅表淋巴结无肿大.专科检查:外鼻鼻梁部肿胀畸形,鼻中隔上方膨隆,遮挡双侧中鼻道,双下鼻甲肿大,双总鼻道见分泌物引流.入院后反复发热,热峰达40. 1°,伴头痛明显,入院第3 天患者出现性情古怪,神清冷漠,依从性差,接触被动,注意力不集中,查体不配合,夜间于床边摆放好桌椅和碗筷,诉看见好友购买食物回来,听见楼上持续挪凳子声音.入院一周后出现双眼睑浮肿,诉视物模糊,无眼球突出,眼球活动正常,鼻梁部肿痛,头痛、鼻塞、发热,热峰降为38. 5°.复查鼻内镜(图1):鼻中隔左侧见一肿物突起,质韧,遮挡左侧中鼻道,肿物上方见分泌物引流,予取分泌物送培养,细针穿刺鼻中隔左侧顶部膨隆,未见明显穿刺液,切开鼻中隔左侧顶部黏膜,见大量白色水肿样新生物,取组织送病理.鼻中隔右侧溃烂,穿孔,表面见脓性分泌物及痂皮,清理后鼻中隔右侧软骨暴露,右中鼻甲黏膜糜烂,于穿孔内缘取活检.分泌物药敏培养甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌.血常规检查:白细胞(white blood cell,WBC),17. 53 × 109/L,中性粒细胞(neutrophil,NEU):14. 36 × 109/L,C-反应蛋白(C-reactive protein,CRP):107 mg/L,红细胞沉降率( erythrocyte sed-imentation rate,ESR):49 mm/h,降钙素原( procalcitonin,PCT):0. 25 ng/mL,EB病毒抗体两项、EB病毒定量检查、肿瘤相关抗原七项、自免五项、血管炎三项结果无异常.入院第二天复查血常规:WBC,15. 83 × 109/L,NEU:13. 58 × 109/L,入院一周复查血常规:WBC,12. 56 × 109/L,NEU:9. 83 × 109/L.多部位彩超示双侧颈部多发淋巴结声像,双侧腋窝多发淋巴结声像,双侧腹股沟多发淋巴结声像;胸腹膜未见异常.影像学检查:鼻窦、鼻咽CT平扫+增强(图2 ):考虑全组副鼻窦炎,考虑鼻息肉可能,合并其他病变待排,建议活检.

目的:整理球药隔重楼的基原及主要混用种,研究其真伪鉴别依据.方法:根据资源调查和分类学鉴定,确定球药隔重楼的主要混用种;通过原植物形态观察、显微特征对比、甾体皂苷化学特征分析、ITS序列聚类分析等4种手段确定物种真实性鉴别特征.结果:亮叶重楼和具柄重楼为球药隔重楼的主要混用种.在形态学特征中,亮叶重楼因叶片光亮,革质,根茎细小而与正品区别,具柄重楼因药隔凸出部分棒状而与正品区别.在粉末显微特征中,球药隔重楼原变种无草酸钙针晶,草酸钙柱晶少见,仅亮叶重楼和具柄重楼淀粉粒脐点明显,且亮叶重楼脐点偏向一端而具柄重楼脐点居中,仅宽瓣球药隔重楼含环纹导管和网纹导管.甾体皂苷成分比较时发现,球药隔组均含重楼皂苷Ⅶ、Ⅵ、H,具柄重楼仅含Ⅶ、H,亮叶重楼均不含.球药隔重楼均符合2015年版中国药典含量标准,具柄重楼和亮叶重楼均不符合.ITS序列的NJ聚类树显示,亮叶重楼和球药隔重楼聚为一支,均与具柄重楼分歧明显.结论:综合原植物形态学特征、粉末显微特征、甾体皂苷化学特征、ITS序列聚类分析等4个层面的证据,可有效区分球药隔重楼及其混用种亮叶重楼和具柄重楼,该鉴别方法可应用于球药隔重楼的规范化种植、药材真伪鉴别和质量控制.

报道了湖南重楼属(Paris L.)一新变种:大萼球药隔重楼(Paris fargesii Franch.var.macrosepala H.X.Yin&W.X.Rao&L.Zhao),其与原变种球药隔重楼(P.fargesii Franch.var.fargesii)区别在于外轮花被片极为宽大,长6.5～11.0 cm,宽2.5～4.0 cm,叶-萼长度比常小于2.0(平均1.91),叶-萼宽度比普遍小于3.0(平均2.86),内轮花被片较短,2.0～5.3 cm,常平展于外轮花被片之上,药隔凸出部分呈扁平状,具明显裂痕,顶面观呈蝶形或双肾形.

为探讨球药隔重楼(Paris fargesii Franch.)种下分类构成,综合形态特征、物候期、植物化学、分子生物学和地理分布的证据,对球药隔重楼各类群进行对比分析.结果表明:球药隔重楼种下存在5个分类群,分别为球药隔重楼原变种(P.fargesii var.fargesii)、宽瓣球药隔重楼(P.fargesii var.latipetala)、短瓣球药隔重楼(P.far-gesii var.brevipetalata)、大萼球药隔重楼(P.fargesii var.macrosepala)和球药隔黑斑种群,它们皆在植物形态、物候期、甾体皂苷构成和ITS序列上有一定差异,并且具有各自的地理分布范围.具柄重楼(P.fargesii var.petiola-ta)的物候期和甾体皂苷成分更接近于金线重楼(P.delavayi),在ITS系统发育树中聚为一支,并且二者之间存在过渡类群,故具柄重楼应移出球药隔重楼种下,作为金线重楼变种,拉丁学名为Paris delavayi var.petiolata.推测球药隔重楼种内演化顺序为短瓣球药隔重楼→宽瓣球药隔重楼→球药隔重楼原变种→大萼球药隔重楼、球药隔黑斑种群.