目的:探讨人参皂苷Rg1调节miR-144-3p对实验性脑出血大鼠神经炎症和血脑屏障损伤的影响,以及对甲酰基肽受体2(FPR2)/p38通路的调控作用.方法:90只SD大鼠随机分为对照组、脑出血组、人参皂苷Rg1低剂量组(10 mg/kg)、人参皂苷Rg1高剂量组(40 mg/kg)、人参皂苷Rg1高剂量+ago-miR-144-3p组(40 mg/kg人参皂苷Rg1+ago-miR-144-3p),每组18只,除对照组外均通过右侧尾状核注射胶原酶Ⅱ法构建实验性脑出血大鼠模型,按照各组要求腹腔注射给药以及脑内注射给药.对大鼠神经功能损伤进行评分;干湿比重法测定大鼠脑含水量;ELISA检测大鼠脑组织匀浆TNF-α、IL-6、IL-1β水平;电镜观察脑水肿周围超微结构;伊文思蓝(EB)法测定大鼠血脑屏障通透性;qRT-PCR与Western blot测定miR-144-3p/FPR2/p38通路表达.结果:与对照组相比,脑出血组大鼠血脑屏障损伤加重,大鼠神经功能损伤评分、脑含水量、脑组织匀浆miR-144-3p、TNF-α、IL-6、IL-1β、p38 mRNA、p-p38/p38表达增加(P<0.05),FPR2 mRNA与蛋白表达降低(P<0.05);与脑出血组相比,人参皂苷Rg1低剂量组、人参皂苷Rg1高剂量组大鼠血脑屏障损伤减轻,神经功能损伤评分、脑含水量、脑组织匀浆miR-144-3p、TNF-α、IL-6、IL-1β、p38 mRNA、p-p38/p38表达降低(P<0.05),FPR2 mRNA与蛋白表达升高(P<0.05);ago-miR-144-3p可逆转人参皂苷Rg1对大鼠血脑屏障、神经炎症的保护作用(P<0.05).结论:人参皂苷Rg1可能通过调控miR-144-3p/FPR2/p38轴抑制大鼠血脑屏障损伤及神经炎症.

为探讨异丙酚在脓毒症诱导的急性肺损伤(acute lung injury,ALI)小鼠模型中的保护作用并通过体外试验观察其对甲酰基肽受体1(formyl peptide receptor 1,FPR1)激动剂诱导的人中性粒细胞活化的抑制作用,将40只小鼠随机分为4组,每组10只:1组为用50μL 10％二甲基亚砜(dimethyl sulfoxide,DMSO)处理的假手术小鼠;2组为用50 μL异丙酚(40 mg/kg)处理的假手术小鼠;3组为用50μL 10％ DMSO处理的脓毒症小鼠(该模型通过单次腹腔注射200 μL LPS构建);4组为用50 μL异丙酚(40 mg/kg)处理的脓毒症小鼠.采用免疫组织化学法检测各组小鼠肺组织中FPR1、淋巴细胞抗原6G(lymphocyte antigen 6 complex locus G,Ly6G)表达;髓过氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)测定试剂盒评估肺组织中MPO活性;ELISA检测试剂盒评估支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)中主要炎性因子水平.此外,体外条件下于培养的人中性粒细胞中分别添加DMSO或异丙酚,采用分光光度法检测中性粒细胞释放弹性蛋白酶和超氧化物的情况;Western blotting检测促分裂原活化的蛋白激酶(mitogen activated protein kinase,MAPK)信号通路蛋白的表达情况.结果 显示,脓毒症显著增加了小鼠肺部组织FPR1和Ly6G蛋白表达水平及MPO活性(均P＜0.01),而经腹腔异丙酚注射可有效减少FPR1和Ly6G蛋白表达并显著抑制MPO活性(P＜0.01).与假手术组相比,脓毒症小鼠BALF中TNF-α、IL-1β、IL-6和CXCL1表达水平显著增加(均P＜0.01),而异丙酚腹腔注射显著逆转了上述变化(均P＜0.05).体外试验结果显示,异丙酚(5～ 100 μmol/L)剂量依赖性地显著减少了N-甲酰-甲硫氨酰-亮氨酰-苯丙氨酸(N-formyl-methionyl-leucyl-phenylalanine,fMLF)诱导的中性粒细胞弹性蛋白酶和超氧化物释放(均P＜0.05).Western blotting分析显示,异丙酚显著降低了fMLF诱导的人中性粒细胞细胞外信号调节激酶(extracellular signal regulated kinase,ERK)、p38 MAPK和c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)的磷酸化水平(均P＜0.001).由此,在脓毒症诱导的小鼠ALI模型中,异丙酚腹腔注射可显著改善其肺部损伤,下调FPR1和Ly6G表达及肺组织中中性粒细胞数.进一步体外试验证实,异丙酚对fMLF诱导的中性粒细胞活化的抑制作用是通过与FPR1结合介导的,可抑制FPR1下游信号转导和炎症级联反应.

目的:明确甲酰肽受体2(FPR2)在炎症状态下对滋养细胞生物学功能的影响,分析其在绒毛膜羊膜炎中的作用,并探讨其机制.方法:收集10例绒毛膜羊膜炎患者和10例正常产妇的胎盘组织,利用免疫组化和Western blot检测胎盘组织中FPR2的定位和表达.应用脂多糖(LPS)建立人绒毛膜滋养层细胞系HTR-8/SVneo体外炎症模型,利用Western blot检测FPR2表达;应用小干扰RNA敲减FPR2基因,检测正常组、LPS处理组和LPS+FPR2敲减组细胞培养液上清中促炎因子白细胞介素6(IL-6)、IL-1β和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的水平,并通过EdU实验、流式细胞术、Transwell实验和划痕实验检测细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移;利用Western blot分析丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路中关键因子细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)、p-ERK1/2、c-Jun氨基末端激酶(JNK)、p-JNK、p38和p-p38蛋白表达.结果:绒毛膜羊膜炎患者胎盘组织中FPR2表达显著增加(P<0.01).FPR2敲减显著降低LPS诱导的HTR-8/SVneo细胞IL-6、IL-1β和TNF-α的分泌(P<0.01或P<0.05),同时减弱了LPS对HTR-8/SV?neo细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响(P<0.05或P<0.01);LPS激活了ERK1/2、JNK和p38信号通路(P<0.05或P<0.01),FRP2敲减后JNK和p38信号通路无显著变化,ERK1/2信号通路受到显著抑制(P<0.01).结论:FPR2参与了炎症状态下滋养细胞功能的调节,其作用机制可能与ERK1/2信号通路有关.