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基于转录组学研究白头翁汤正丁醇提取物经EGFR/MAPK通路对光滑念珠菌刺激下阴道上皮细胞的保护作用机制
编辑人员丨2024/7/20
基于转录组学研究白头翁汤正丁醇提取物(n-butanol extract of Pulsatilla Decoction,BEPD)含药血清通过调控表皮生长因子受体(EGFR)/丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路对光滑念珠菌刺激下阴道上皮细胞的保护作用及机制.首先构建外阴阴道念珠菌病(VVC)模型小鼠,然后将该组小鼠连同空白对照组与BEPD干预组小鼠的阴道黏膜组织进行转录组测序分析基因表达差异,同时制备BEPD含药血清与氟康唑含药血清.将人阴道上皮细胞系(A431 细胞)分为对照组、模型组、空白血清组、氟康唑含药血清组、BEPD含药血清组、EGFR激动剂组、EGFR抑制剂组.以细胞增殖与活性检测(CCK-8)法分别确定光滑念珠菌、含药血清及药物对A431 细胞的安全浓度;酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞上清液白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、粒细胞集落刺激因子(G-CSF)、趋化因子配体 20(CCL20)和乳酸脱氢酶(LDH)的水平;革兰染色观察光滑念珠菌黏附阴道上皮细胞;流式细胞术检测光滑念珠菌对A431 细胞凋亡的影响;根据转录组学结果,以免疫荧光检测细胞p-EGFR、p-ERK1/2 蛋白的表达,免疫印迹法检测细胞中p-EGFR、p-ERK1/2、p-C-Fos、p-P38、Bax、Bcl-2蛋白的表达.转录组测序显示,相对于模型组,BEPD治疗后出现 1 075 个基因上调和 927 基因下调,主要富集于包括MAPK等在内的免疫炎症相关通路.细胞学实验显示,BEPD含药血清能够降低细胞上清液中IL-1β、IL-6、GM-CSF、G-CSF、CCL20 炎症因子的水平,缓解由光滑念珠菌引起的细胞中LDH的释放,减少光滑念珠菌对A431 细胞的黏附,降低光滑念珠菌诱导的细胞凋亡,下调促凋亡相关蛋白Bax和上调抗凋亡相关蛋白Bcl-2的表达,并显著下调p-EGFR、p-ERK1/2、p-C-Fos与p-P38 的表达.该研究提示,BEPD对光滑念珠菌所致VVC的干预效应可能与其通过调节EGFR/MAPK通路保护阴道上皮细胞有关.
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编辑人员丨2024/7/20
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白头翁汤正丁醇提取物对白念珠菌定植下溃疡性结肠炎小鼠的作用机制研究
编辑人员丨2023/8/6
研究白头翁汤正丁醇提取物(BAEB)对DSS诱导+白念珠菌(CA)定植状态下的小鼠急性溃疡性结肠炎(UC)的作用机制.将小鼠随机分为正常对照组,DSS组,DSS+ CA组,BAEB高、中、低剂量组,阳性药Mesalazine组.观察小鼠一般情况,平板法检测小鼠肠道内容物真菌载荷量,HE染色观察小鼠结肠病理变化;ELISA法检测小鼠血清ASCA及结肠黏膜组织IL-6,IL-8,IL-1β,HBD-2,HBD-3的含量变化.结果表明,与DSS模型组相比,DSS+ CA组小鼠一般状况及血清ASCA无明显变化,但肠道CA载荷量、组织病理损伤程度、结肠黏膜组织IL-6,IL-8,IL-1β,HBD-2,HBD-3的蛋白水平均超过DSS组,BAEB高剂量与Mesalazine治疗能改善结肠组织病理,降低IL-6,IL-8,IL-1β,HBD-2,HBD-3的表达水平.上述结果提示,BAEB能有效改善DSS+ CA定植下的UC小鼠结肠病理及免疫性损伤,对肠道真菌过度定植相关肠炎的治疗具有重要价值.
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编辑人员丨2023/8/6
