目的:检测真核翻译起始因子4γ1(EIF4G1)在胰腺癌中的表达，并探究其促进胰腺癌细胞增殖的相关机制。方法:利用在线数据库分析EIF4G1在肿瘤中的表达量与预后意义；实时荧光定量聚合酶链式反应检测人胰腺癌细胞系的EIF4G1表达水平。慢病毒转染构建EIF4G1低表达细胞系，分别为敲减#1，敲减#2与对照；慢病毒转染构建EIF4G1过表达细胞系，为过表达与空载；细胞计数试剂盒(CCK-8)实验与克隆形成实验检测胰腺癌的增殖能力；蛋白印迹法检测EIF4G1敲减后哺乳动物雷帕霉素靶蛋白信号(mTOR)通路的变化，组间比较选择 t检验。 结果:多个数据库显示EIF4G1在胰腺癌中表达量升高，与胰腺癌的不良预后有关；低表达组PANC-1在第5天的吸光度显著低于对照组(0.85±0.03、0.92±0.05比1.35±0.04， t＝22.160、14.670， P<0.01)；低表达组PA-TU-8988T在第5天的吸光度显著低于对照组(1.00±0.05、0.99±0.04比1.99±0.07， t＝26.740、29.390， P<0.01)；低表达组PANC-1的克隆形成数目著低于对照组(91.00±7.55、107.00±7.00比147.70±21.83， t＝4.250、3.070， P<0.05)，低表达组PA-TU-8988T的克隆形成数目著低于对照组(137.00±16.09、147.30±13.50比222.70±18.50， t＝6.050、5.700， P<0.01)；过表达组MIA PaCa-2在第5天的吸光度显著高于对照组(1.55±0.14比1.21±0.10， t＝4.360， P<0.01)；过表达组BxPC-3在第5天的吸光度显著高于对照组(1.03±0.01比0.69±0.07， t＝10.840， P<0.01)；过表达组MIA PaCa-2的克隆形成数目显著高于对照组(127.30±14.57比81.33±10.26， t＝4.470， P<0.05)；过表达组BxPC-3的克隆形成数目显著高于对照组(105.70±13.58比47.00±7.55， t＝6.540， P<0.01)。低表达组PANC-1细胞的p-mTOR含量低于对照组PANC-1细胞(1.00±0.12比0.55±0.19、0.54±0.19， t＝3.480、3.450， P<0.05)；低表达组PA-TU-8988T细胞的p-mTOR含量低于对照组PA-TU-8988T细胞(1.00±0.05比0.57±0.14、0.49±0.09， t＝5.140、8.410， P<0.01)。 结论:EIF4G1在胰腺癌中上调，可能通过mTOR通路促进胰腺癌的增殖。

目的 探索miR-139-5p在多形性胶质母细胞瘤(GBM)患者中的表达水平,预测和验证miR-139-5p的靶基因.方法 利用实时定量PCR检测GBM患者和对照组脑组织中miR-139-5p的相对表达水平.选择starBase在线工具预测miR-139-5p的靶基因,通过TargetScan数据库分析miR-139-5p与靶基因的结合位点,并采用萤光素酶报告实验验证.检索miRPathDB数据库分析miR-139-5p靶基因显著富集的pathways,运用miRTargetLink工具构建miR-139-5p与其靶基因之间的交互网络.结果 相对于对照组,miR-139-5p在GBM患者脑组织中的表达水平显著下调.starBase预测工具取交集后得到8个靶基因,其中真核翻译起始因子4γ2(EIF4G2)为miR-139-5p靶基因之一.萤光素酶报告实验表明EIF4G2基因3′UTR区中含有明确的miR-139-5p结合位点.pathway富集分析发现靶基因显著富集于胰岛素样生长因子(IGF)-1信号通路、神经营养因子通路、趋化因子通路、T细胞受体通路、Ras信号通路和转化生长因子(TGF)-β信号通路等.结论 miR-139-5p在GBM患者中低表达,可能通过抑制靶基因EIF4G2表达参与肿瘤发生相关的过程.

目的:探讨miR-499a-5p在骨肉瘤(OS)中的表达及其对OS发生发展的影响.方法:通过实时荧光定量PCR(RT-qPCR)验证miR-499a-5p在OS细胞系(143B、MNNG)及正常成骨细胞(hFOB1.19)中的差异表达,并使用3种在线预测工具对miR-499a-5p的靶基因进行了预测,并取3种数据共同交集得到的靶基因作为候选靶基因.利用靶基因进行基因功能分析(GO)富集分析,并利用京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析,然后经过蛋白互作网络(PPI)分析,筛选节点最高的3个关键hub基因,并利用生存分析从这3个关键hub基因中筛选出具有预后意义的关键基因.结果:RT-qPCR结果显示,与正常的成骨细胞比较,OS细胞中miR-499a-5p表达降低(P＜0.05).通过3种在线预测工具预测miR-499a-5p的靶基因并交集获得181个靶基因.GO分析结果表明,生物过程(BP)最显著富集的是RNA聚合酶Ⅱ促子转录的正向调控,细胞组成(CC)最显著富集的是细胞核,分子功能(MF)最显著富集的是蛋白结合.在KEGG的通路富集中,最显著的是人类T细胞白血病病毒1感染信号通路,其次是轴突引导通路、催产素信号通路和T细胞激活信号通路.靶基因的蛋白互作网络分析发现节点最高的3个关键hub基因分别是异质核糖核蛋白C(HNRNPC)、真核翻译起始因子4γ2(EIF4G2)和真核翻译起始因子4A同工型2(EIF4A2).生存分析结果显示,高度表达HNRNPC的OS患者的生存率显著降低(P＜0.05).结论:miR-499a-5p可能通过调控HNRNPC基因对OS发展产生潜在的影响.

目的 探讨干扰素-γ(IFN-γ)诱导的炎症环境中,骨骼肌纤维内质网应激(ERS)与非折叠蛋白反应(UPR)的激活对肌纤维免疫行为的调控作用.方法 体外培养的C57BL/6小鼠原代成肌干细胞,经马血清分化成多核肌管后分成以下10组:1.对照组;2.IFN-γ组;3.衣霉素(TM)组;4.毒胡萝卜素(TG)组;5.IFN-γ+4-苯基丁酸(4-PBA)联合处理组;6.IFN-γ+TG+4-PBA联合处理组;7.IFN-γ+4μ8c联合处理组;8.IFN-γ+TG+4μ8c联合处理组;9.IFN-γ+GSK2606414联合处理组;10.1FN-γ+TG+GSK2606414联合处理组,并进行对应的处理.利用Real-time PCR检测相关肌细胞因子基因水平;免疫荧光观察UPR关键分子:真核翻译起始因子2α(eIF2α)、肌醇需要酶1α(IRE1α)、转录激活因子6(ATF6)在肌纤维内的表达;Western blotting检测肌细胞相关免疫分子和肌细胞因子及UPR关键分子;Luminex分析肌纤维内促炎症的肌细胞因子的蛋白水平.结果 IFN-γ诱导的炎症环境中,肌纤维H-2Kb、H2-Ea、Toll样受体3(TLR3)以及p-eIF2α、p-IRE1α表达上调;添加UPR抑制剂4-PBA的分组肌纤维H-2Kb、H2-Ea、TLR3以及肌细胞因子的表达较IFN-γ组下调,添加IRE1α特异性抑制剂4μ8c的分组上述分子表达较IFN-γ组亦下调,而添加蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)特异性抑制剂GSK2606414的分组则无明显变化.结论 IFN-γ诱导的炎症环境中,UPR-IRE1α通路激活并抑制肌纤维免疫相关分子合成,从而进一步抑制肌纤维介导的免疫反应,有利于肌再生.

目的 探讨真核翻译起始因子4γ2(EIF4G2)通过调控N-乙酰氨基半乳糖转移酶1(GALNT1)mRNA对胃癌进展的影响.方法 通过生物信息数据库分析GALNT1、EIF4G2在胃癌细胞和胃癌组织中的表达及与胃癌患者预后的关系,并分析胃癌组织中EIF4G2、GALNT1表达的相关性.采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测GALNT1 mRNA、EIF4G2 mRNA在人胃黏膜上皮细胞GES-1和人胃癌细胞(AGS细胞等)中的表达水平,并采用蛋白质印迹法(Western blot)检测GALNT1、EIF4G2蛋白表达水平.建立干扰GALNT1和过表达EIF4G2的AGS细胞株,采用CCK-8法和克隆形成实验检测细胞增殖能力,采用TUNEL实验检测细胞凋亡能力,采用划痕实验和Transwell实验分别检测细胞迁移和侵袭能力,采用Western blot检测凋亡和转移相关蛋白表达水平,采用RIP实验和RNA下拉实验检测GALNT1 mRNA与EIF4G2的结合关系.结果 胃癌组织和胃癌细胞中的GALNT1、EIF4G2水平分别高于正常组织和人胃黏膜上皮细胞,差异有统计学意义(P＜0.001),且与胃癌患者预后差相关;胃癌组织中,EIF4G2表达与GALNT1表达呈正相关.敲低GALNT1后,AGS细胞活力降低,克隆形成数、迁移和侵袭细胞数减少,凋亡细胞数增加,Bcl-2、MMP2、MMP9蛋白表达降低,Bax、cleaved-caspase3、cleaved-caspase9蛋白表达增加,差异有统计学意义(P＜0.001).EIF4G2可与GALNT1 mRNA结合,促进GALNT1 mRNA、GALNT1蛋白表达及GALNT1 mRNA稳定性,差异有统计学意义(P＜0.001).共转染sh-GALNT1-1与oe-EIF4G2可逆转sh-GALNT1-1对AGS细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的作用,差异有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01或P＜0.001).结论 EIF4G2可通过稳定GALNT1 mRNA促进胃癌细胞增殖、迁移、侵袭并抑制细胞凋亡,其或可成为胃癌临床诊疗的新靶点.