目的 探究微RNA(miRNA)对肺癌的影响及具体机制,为后续抗癌生物制剂制作提供理论依据.方法 肺癌组织和正常肺组织测序寻找表达差异的miRNA;搜寻肿瘤基因组谱(TCGA)数据库中肺癌患者数据验证miRNA和肺癌的关系;利用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)、细胞侵袭迁移试验(Transwell)、细胞流式术分别检测干预miRNA后的细胞活力、侵袭力、抗凋亡能力.生信分析miRNA的靶基因并验证其功能.结果 肺癌组织和正常肺组织测序发现miR-139-5p在肺癌组织中表达降低;搜寻TCGA中的肺癌患者数据验证miR-139-5p的作用,发现miR-139-5p可能是个抑癌因子.行CCK-8、Transwell、细胞流式术发现miR-139-5p可以抑制肺癌细胞活力、侵袭力、抗凋亡能力.机制研究发现肺癌细胞的发展和自噬(auto-phagy)相关,且miR-139-5p可以直接靶向抑制自噬基因unc-51样激酶1(ULK1)而抑制肺癌发生自噬.下调ULK1基因可以使肺癌细胞活力、侵袭力、抗凋亡能力下降;而上调ULK1基因使肺癌细胞活力、侵袭力、抗凋亡能力提高.结论 MiR-139-5p通过靶向抑制ULK1而减弱非小细胞肺癌发生自噬,进而减弱自噬的致癌效应.

目的:探讨微小RNA-139-5p（miR-139-5p）在食管鳞状细胞癌（ESCC）发生发展中的作用及其对ESCC细胞增殖和侵袭的影响和分子机制。方法:收集2017年2月至2018年3月在郑州大学第一附属医院胸外科手术获得的75例ESCC组织和癌旁正常食管组织标本。实验分2组：ESCC（ n=75）和正常食管组织（ n=75）。采用GEO数据集和实时荧光定量PCR（qRT-PCR）检测ESCC组织和细胞中miR-139-5p的表达。将miR-139-5p抑制剂、miR-139-5p模拟物、阴性对照、对照siRNA、T盒转录因子1（TBX1） siRNA、pcDNA3.1和pcDNA3.1-TBX1转染ESCC Eca109和TE1细胞，用qRT-PCR检测转染后ESCC细胞中miR-139-5p和TBX1的表达水平，分别用细胞计数试剂盒8（CCK-8）和Transwell小室检测ESCC细胞的增殖和侵袭。双荧光素酶报告实验分析miR-139-5p与TBX1的相互作用，qRT-PCR、Western印迹法和免疫组织化学检测TBX1在ESCC组织中的表达，Western印迹法检测转染后E-钙黏蛋白、N-钙黏蛋白和波形蛋白的表达。 结果:ESCC组织中miR-139-5p水平明显低于正常组织（1.17±0.43比5.16±3.62， P<0.001）。Log-rank检验发现，高miR-139-5p表达水平的ESCC患者（ n=43）生存率显著高于低miR-139-5p水平的ESCC患者生存率（ n=32）（67.44%比25.00%， P=0.005）。ESCC细胞中miR-139-5p的表达水平均显著低于正常食管上皮细胞Het-1A（均 P<0.001）。miR-139-5p高表达的Eca109和TE1细胞的增殖和侵袭能力明显低于阴性对照（NC）转染的Eca109和TE1细胞（均 P<0.05）。双荧光素酶报告实验表明，miR-139-5p能结合致TBX1的3′-非翻译区。miR-139-5p模拟物或抑制剂分别抑制或促进Eca109和TE1细胞TBX1蛋白表达（均 P<0.05）。TBX1下调显著抑制Eca109和TE1细胞的增殖和侵袭，而TBX1的过表达显著促进Eca109和TE1细胞的增殖和侵袭（均 P<0.05）。此外，pcDNA3.1-TBX1能部分逆转miR-139-5p介导的细胞侵袭能力的抑制（均 P<0.05），而TBX1 siRNA能部分逆转miR-139-5p抑制剂介导的侵袭能力的增强（均 P<0.05）。 结论:miR-139-5p通过靶向TBX1抑制ESCC细胞的增殖和侵袭。

目的:通过生物信息学方法挖掘与卵巢上皮性癌（卵巢癌）耐药相关的可作为竞争性内源RNA（ceRNA）的长链非编码RNA（lncRNA），并进行临床验证。方法:（1）挖掘与卵巢癌相关的lncRNA并构建ceRNA调控网络：综合应用文本挖掘、数据预测和网络构建等生物信息学方法，建立与卵巢癌耐药相关的潜在ceRNA调控网络，即lncRNA-微小RNA（miRNA）-mRNA调控网络。（2）临床验证：收集2008年6月至2016年10月在广西医科大学附属肿瘤医院行肿瘤细胞减灭术的卵巢癌患者共95例，其中铂类药物耐药患者54例（耐药组），铂类药物敏感患者41例（敏感组），采用实时荧光定量PCR技术检测两组卵巢癌组织中lncRNA的表达，分析lncRNA表达对卵巢癌患者预后的影响，并分析lncRNA表达对卵巢癌耐药的诊断效能。结果:（1）文本挖掘初步筛选出25个与卵巢癌发生、发展相关的差异表达lncRNA；亚细胞定位分析发现，有8个lncRNA存在于细胞质中；通过进一步数据挖掘、共线文献分析，预测其中的两个lncRNA分子［即生长阻滞特异性转录因子5（GAS5）和HOXC基因座转录因子（HOTAIR）］可作为关键ceRNA分子；构建ceRNA调控网络，GAS5与miRNA（即miR139-5p、miR-24-3p）及mRNA［即乳腺癌易感基因1（BRCA1）、肿瘤蛋白p53（TP53）、表皮生长因子受体（EGFR）、B细胞淋巴瘤2基因（BCL-2）、细胞癌基因（FOS）、H-Ras蛋白（HRAS）］组成ceRNA调控网络，HOTAIR与miRNA（即miR-30a-5p）及mRNA［即磷酸肌醇3激酶调控亚基2（PIK3R2）、TP53、丝蛋白（VIM）］组成ceRNA调控网络。（2）实时荧光定量PCR技术检测显示，与敏感组（设为1.0）比较，耐药组卵巢癌组织中GAS5的表达水平为2.1±1.6，HOTAIR的表达水平为3.5±1.9，两组分别比较，差异均有统计学意义（ P=0.011， P<0.01）；Cox回归模型多因素分析显示，GAS5、HOTAIR表达为影响卵巢癌患者无病进展生存率和总生存率的独立危险因素（ P<0.05）。GAS5与HOTAIR联合检测诊断卵巢癌的受试者工作特征（ROC）曲线下面积（AUC）为0.871，显著高于GAS5单独检测和HOTAIR单独检测（AUC分别为0.678、0.863），分别比较，差异均有统计学意义（ P均<0.05）。 结论:GAS5与HOTAIR高表达与卵巢癌耐药密切相关，可作为卵巢癌化疗反应的潜在预测指标；GAS5与HOTAIR联合检测对卵巢癌患者具有一定的诊断效能。这种利用ceRNA调控网络预测关键分子的方法，为卵巢癌的诊断和治疗提供了新的思路。

目的:探索SOX13基因来源的环状RNA hsa_circ_0004777的特征分析及功能预测。方法:探究了hsa_circ_0004777的基本特征，包括验证反向剪接位点，RNase R消化实验，细胞内RNA的胞质胞核分布，蛋白翻译潜能的预测。此外，使用生物信息学方法，预测hsa_circ_0004777结合的微小RNA（microRNA，miRNA）以及miRNA的靶基因，并且构建了circRNA-miRNA-mRNA的网络图。再对预测到的miRNA的靶基因进行基因本体论（gene ontology，GO）功能富集分析和信号通路富集分析。结果:hsa_circ_0004777的形成是由SOX13基因第4号外显子反向剪接至第2号外显子，hsa_circ_0004777能抵抗RNase R处理，主要分布在细胞质。生信预测hsa_circ_0004777通过作为hsa-miR-1225-3p、hsa-miR-637、hsa-miR-139-5p、hsa-miR-145-5p、hsa-miR-384、hsa-miR-660-5p、hsa-miR-942-5p、hsa-miR-331-3p这8个miRNA的海绵来发挥作用；hsa_circ_0004777潜在结合的8个miRNA的靶基因在对聚合酶Ⅱ启动子转录的正调控、DNA模板、骨骼肌细胞分化等生物过程显著富集。结论:成功探索了SOX13基因来源的环状RNA hsa_circ_0004777的特征，并且从circRNA-miRNA-mRNA网络图中预测了它的功能，为进一步研究hsa_circ_0004777奠定了基础，也为更深入研究SOX13提供了思路。

目的 分析脑脊液miR-139-5p水平对脑胶质瘤患者术后复发的预测价值.方法 将55例脑胶质瘤患者纳入研究,同时将20例颅脑损伤患者作为对照组,术后2周行腰椎穿刺术收集脑脊液样本,采用PCR检测脑脊液miR-139-5p水平.胶质瘤患者术后随访6个月,根据复发情况分为复发组及未复发组.结果 胶质瘤患者脑脊液miR-139-5p相对表达量为(0.76±0.20),显著低于对照组(1.00±0.16)(P＜0.001).根据随访情况将胶质瘤患者分为复发组(n=10)及未复发组(n=45),两组患者在平均年龄、性别分布及肿瘤位置方面无显著差异(P＞0.05);两组患者在肿瘤直径、WHO分期、手术是否完全切除及miR-139-5p水平方面存在显著差异(P＜0.05).肿瘤直径大、WHO分期晚、手术未能完全切除病灶及miR-139-5p水平低的脑胶质瘤患者较肿瘤直径小、WHO分期早、手术完全切除病灶及miR-139-5p水平高的患者术后更易出现复发.MiR-139-5p水平与肿瘤直径及WHO分期显著相关.ROC曲线分析显示,脑脊液miR-139-5p水平对胶质瘤患者术后复发具有较高的预测价值,其预测术后复发的曲线下面积(AUC)为0.898,95％CI为0.8039～0.9916.结论 脑胶质瘤患者脑脊液miR-139-5p水平可能通过调控胶质瘤的进展影响患者预后.脑脊液miR-139-5p水平对患者术后复发具有一定的预测价值.

目的:研究子宫内膜癌组织微小核糖核酸(miR)-139-5p、miR-379-5p表达水平与侵袭相关基因和预后的关系.方法:选取2018年12月-2019年12月于西安交通大学第二附属医院行手术治疗的105例子宫内膜癌患者.收集术后癌组织与癌旁组织标本,实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)法检测癌组织与癌旁组织miR-139-5p、miR-379-5p及侵袭基因[高迁徙率蛋白1(HMGB1)、分泌型蛋白Dikkopf-1(DKK1)]的表达水平.Pearson法分析癌组织miR-139-5p、miR-379-5p表达水平与侵袭基因表达水平的相关性.根据癌组织miR-139-5p、miR-379-5p不同表达水平将患者分为miR-139-5p高表达组(n=62)与低表达组(n=43)、miR-379-5p高表达组(n=69)与低表达组(n=36),分析miR-139-5p、miR-379-5p高低表达与患者临床病理特征关系.随访3年,统计患者死亡情况.采用Kaplan-Meier法分析miR-139-5p、miR-379-5p表达水平与子宫内膜癌患者预后的关系.结果:癌组织中的miR-139-5p、miR-379-5p表达水平低于癌旁组织(P＜0.05).癌组织中DKK1表达量低于癌旁组织,HMGB1表达量高于癌旁组织(P＜0.05).miR-139-5p、miR-379-5p表达水平与DKK1表达量呈正相关,与HMBG1表达量呈负相关(P＜0.05).miR-139-5p、miR-379-5p高、低表达组在国际妇产科联盟(FIGO)分期、淋巴结转移、脉管浸润、肌层浸润方面比较,差异有统计学意义(P＜0.05).105例患者随访3年,期间失访3例、死亡21例,3年生存率为79.41％(81/102).miR-139-5p低表达组3年总生存率为61.90％(26/42),低于 miR-139-5p 高表达组的 91.67％(55/60);miR-379-5p 低表达组 3 年总生存率为 62.86％(22/35),低于miR-379-5p高表达组的88.06％(59/67).结论:子宫内膜癌组织中miR-139-5p、miR-379-5p表达水平下调,可能与侵袭基因表达量异常以及患者的预后不良有关.

目的 探讨miR-139-5p靶向调节Notch1表达对前列腺癌(PCa)细胞上皮间质转化(EMT)和转移能力的影响.方法 收集福建医科大学附属泉州第一医院泌尿外科手术切除的PCa组织标本,购买PCa细胞系,分别以良性前列腺增生(BPH)标本和人前列腺上皮细胞系为对照.采用qRT-PCR实验和Western-blot实验分别检测组织和细胞中miR-139-5p和Notch1的表达;采用双荧光素酶报告实验验证miR-139-5p与Notch1的靶向关系;采用Western-blot实验检测细胞EMT标志物E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)和Vimentin蛋白水平;采用Transwell实验检测细胞迁移能力;采用裸鼠尾静脉注射肿瘤细胞的方式建模,评估肺部肿瘤转移灶的情况.结果 在组织学和细胞水平上,与BPH组织比较,前列腺癌miR-139-5p低表达,而Notch1高表达,差别有统计学意义(P＜0.05).与对照组比较,高表达miR-139-5p的PC-3细胞E-cadherin表达升高,N-cadherin和Vimentin表达降低;Transwell迁移实验每视野穿膜细胞数更少;裸鼠肺转移模型中平均肺转移瘤病灶数目更少,差别有统计学意义(P＜0.05).miR-139-5p mimics转染同时过表达Notch1,与单纯miR-139-5p mimics转染比较,E-cadherin水平降低,而N-cadherin和Vimentin水平升高,Transwell迁移实验中穿膜细胞数也增加,差别有统计学意义(P＜0.05).过表达miR-139-5p降低PC-3细胞Notch1的mRNA和蛋白表达水平.双荧光素酶报告实验结果显示,野生型Notch1的PC-3细胞中,转染miR-139-5p mimics组细胞荧光活性显著低于miR-NC处理组,差别有统计学意义(P＜0.05).结论 miR-139-5p在PCa中低表达,可通过上调其表达靶向抑制Notch1,从而抑制PCa细胞EMT和远处转移.

目的 分析血清微小核糖核酸(micro RNA,miR)-139-5p,组蛋白去乙酰化酶 4(histone deacetylase 4,HDAC4)和胶质纤维酸性蛋白(glialfibrillary acidic protein,GFAP)与新生儿缺氧缺血性脑病(hypoxic-ischemic encephalopathy,HIE)脑损伤严重程度的关系.方法 选取 2017 年 1 月～2022 年 3 月广元市中心医院分娩的HIE新生儿 72 例为研究对象(研究组);同期健康的足月新生儿 75 例为对照组.实时荧光定量PCR检测血清中miR-139-5p,HDAC4 表达水平.酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清GFAP水平.Logistic回归分析影响HIE患儿重度脑损伤发生的因素.结果 与对照组相比,研究组血清GFAP(1.30±0.37ng/L vs 0.50±0.15ng/L),HDAC4 相对表达水平(2.05±0.39 vs 1.02±0.21)升高,miR-139-5p相对表达水平(0.63±0.14 vs 1.01±0.22)和NBNA评分(33.20±1.43分 vs 39.85±2.23分)降低,差异具有统计学意义(t=17.304,20.046,12.436,21.424,均P＜0.05);与轻中度组相比,重度组血清GFAP(1.61±0.47ng/L vs 1.16±0.33ng/L),HDAC4(2.43±0.37 vs 1.87±0.40)相对表达水平升高,miR-139-5p相对表达水平(0.38±0.10 vs 0.74±0.16)和NBNA评分(30.52±1.54分 vs 34.46±1.38 分)降低,差异具有统计学意义(t=4.690,5.669,9.900,10.884,均P＜0.05).Logistic回归分析显示,miR-139-5p低表达,HDAC4高表达,低NBNA评分,低出生后 1 min内Apgar评分是影响HIE患儿重度脑损伤发生的危险因素(Wald χ2=5.772～6.969,OR=1.519～1.709,均P＜0.05).Pearson分析显示,血清miR-139-5p表达水平与GFAP,HDAC4 呈负相关(r=-0.416,-0.579,均P＜0.05),血清HDAC4表达水平与GFAP呈正相关(r= 0.437,P＜0.05).Spearman分析显示,血清miR-139-5p表达水平与NBNA评分、出生后1 min内Apgar评分、出生后5 min内Apgar评分呈正相关(r= 0.398,0.367,0.348,均P＜0.05);血清HDAC4 表达水平与NBNA评分、出生后 1 min内Apgar评分、出生后 5 min内Apgar评分呈负相关(r=-0.364,-0.345,-0.332,均P＜0.05).结论 HIE患儿血清中miR-139-5p表达降低,HDAC4 表达升高,miR-139-5p,HDAC4与HIE患儿脑损伤严重程度有关.

目的 研究不同葡萄糖浓度培养条件下,二甲双胍(Met)对人胰腺癌细胞系 PANC-1 增殖的影响,并确定miR-139-5p是否参与此过程.方法 采用梯度浓度的二甲双胍(0、5、10、20 mmol/L)分别在 25 mmol/L葡萄糖[高糖(HG)组]或 5 mmol/L葡萄糖[正常糖(NG)组]培养条件下处理PANC-1 细胞.培养 48h后,检测细胞的增殖、凋亡、迁移及细胞周期.通过RT-qPCR检测miR-139-5p的表达情况,同时将miR-139-5p模拟物转染到PANC-1 细胞中以明确其作用.结果 无论是在HG,还是NG培养条件下,二甲双胍均可抑制PANC-1 细胞的增殖、促进细胞凋亡(P＜0.05),并诱导细胞周期阻滞在S期和G2/M期(P＜0.05).在NG培养条件下,二甲双胍的抗增殖和促凋亡作用更显著(P＜0.05).此外,仅在 NG 培养条件下,二甲双胍使 miR-139-5p 的表达上调(P＜0.001),且miR-139-5p模拟物可以抑制该培养条件下无二甲双胍干预下PANC-1细胞的增殖(P＜0.05),并增强5 mmol/L二甲双胍的抗增殖作用和 10 mmol/L二甲双胍的促凋亡作用(P＜0.05).结论 在正常糖培养条件下,二甲双胍对PANC-1细胞增殖的抑制、对细胞凋亡的诱导以及细胞周期阻滞作用均较高糖培养条件下更为显著.这些作用部分可能与上调miR-139-5p有关.

目的:探讨lncRNA FUT8-AS1调控miR-139-5p对糖尿病(DM)合并脑梗死(CI)大鼠血管的影响.方法:将雄性Wistar大鼠随机分为对照组、DM+CI组、Vector组、shFUT8-AS1组、miR-139-5p Agomir组、pcDNA-FUT8-AS1组和pcDNA-FUT8-AS1+miR-139-5p Agomir组.采用TTC染色检测CI面积,免疫组化染色检测血管内皮生长因子(VEGF)和FMS样酪氨酸激酶(FLT-1)蛋白表达,并检测内皮依赖性微血管密度(MVD).实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测FUT8-AS1、VEGF、FLT-1 mRNA表达.Western blotting检测VEGF蛋白表达.双荧光素酶实验检测FUT8-AS1与miR-139-5p的靶向关系.结果:与对照组比较,DM+CI组CI面积显著增加,脑组织FUT8-AS1、FLT-1mRNA表达上调,VEGF mRNA及蛋白表达上调,miR-139-5p表达下调(均P＜0.05).与Vector组相比,pcDNA-FUT8-AS1组FLT-1和VEGF mRNA及蛋白表达上调,MVD增加(均P＜0.05);shFUT8-AS1组和miR-139-5p Agomir组FLT-1和VEGF mRNA及蛋白表达下调,MVD减少(均P＜0.05).与pcDNA-FUT8-AS1组相比,pcDNA-FUT8-AS1+miR-139-5p Agomir组FLT-1和VEGF mRNA及蛋白表达下调,MVD减少(均P＜0.05).结论:过表达FUT8-AS1通过靶向miR-139-5p上调VEGF和FLT-1表达,促进DM合并CI大鼠血管生成.