目的:探讨瞬时感受器电位离子通道香草素受体4(TRPV4)在睾丸缺血再灌注损伤(IRI)中对GC-1细胞增殖和凋亡的作用及其机制。方法:建立睾丸GC-1细胞缺氧复氧模型，采用蛋白质印迹法(Western blot)检测不同复氧损伤时间点TRPV4的表达变化；分别采用噻唑蓝(MTT)实验、流式细胞术检测转染TRPV4对GC-1细胞增殖和凋亡的影响；采用Western blot法检测睾丸组织中转染TRPV4对GC-1细胞中半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase)-3和细胞色素C(Cyt-C)表达的影响，组间比较采用 t检验，多组间比较采用单因素方差分析。 结果:对照组及缺氧复氧组(0、6、12、24、48和72 h)TRPV4的蛋白表达水平分别为0.19±0.02、0.35±0.03、0.42±0.04、0.46±0.04、0.62±0.05、0.54±0.05、0.45±0.04。缺氧复氧组TRPV4表达显著高于未缺氧GC-1细胞的对照组，并在复氧24 h达到峰值( F＝6.898， P<0.05)，差异有统计学意义；缺氧复氧组中细胞增殖水平明显低于对照组(52.32±4.58比100.00±7.63， t＝-9.280， P<0.05)，差异有统计学意义，细胞凋亡水平高于对照组(15.60±1.72比4.08±0.87， t＝10.352， P<0.05)，差异有统计学意义；过表达TRPV4组中细胞增殖水平低于其对照组(23.65±3.98比51.35±4.67， t＝-7.820， P<0.05)，差异有统计学意义，细胞凋亡水平高于其对照组(26.93±2.15比14.62±1.68)， t＝7.814， P<0.05)，差异有统计学意义；沉默TRPV4组中细胞增殖水平高于其对照组(72.49±6.21比53.18±5.14， t＝4.150， P<0.05)，差异有统计学意义，细胞凋亡水平低于其对照组(9.71±1.25比15.07±1.64， t＝-4.502， P<0.05)，差异有统计学意义。缺氧复氧组中Caspase-3和Cyt-C表达水平高于对照组(0.70±0.06比0.20±0.02， t＝13.693， P<0.05；0.74±0.07比0.26±0.03， t＝10.917， P<0.05)，差异有统计学意义；过表达TRPV4组中Caspase-3和Cyt-C表达水平高于其对照组(1.25±0.11比0.69±0.07， t＝7.439， P<0.05；1.38±0.14比0.72±0.07， t＝7.303， P<0.05)，差异有统计学意义；沉默TRPV4组中Caspase-3和Cyt-C表达水平低于其对照组(0.46±0.05比0.68±0.06， t＝-4.879， P<0.05；0.45±0.05比0.72±0.06， t＝-5.988， P<0.05)，差异有统计学意义。 结论:TRPV4在GC-1细胞中高表达，其可能通过改变GC-1细胞的增殖和凋亡能力，从而影响睾丸IRI的发生发展。

目的:探讨磷酸酶和张力蛋白同源物(PTEN)在睾丸缺血再灌注损伤(IRI)中对GC-1细胞焦亡的作用及其机制。方法:建立睾丸GC-1细胞(美国ATCC细胞库)缺氧复氧模型，采用定量实时聚合酶链反应(qRT-PCR)检测不同复氧损伤时间点PTEN的表达变化；分别采用免疫荧光实验、蛋白质印迹法(Western blot)检测转染PTEN后对GC-1细胞焦亡相关蛋白NLRP3和Caspase-1表达水平的影响。组间比较采用 t检验，多组间比较采用单因素方差分析。 结果:对照组及缺氧复氧组(0、6、12、24 h)PTEN的mRNA表达水平分别为(1.00±0.21、3.48±0.35、3.75±0.38、4.25±0.40、4.06±0.37)。与未缺氧GC-1细胞的对照组比较，随着复氧损伤时间的增加，PTEN表达明显增高，并在复氧12 h达到峰值( F＝43.21， P<0.05)。Western blot结果显示，缺氧复氧组中NLRP3和Caspase-1表达水平(0.52±0.04、0.41±0.04)高于对照组(0.24±0.03、0.20±0.03， t＝9.700， P<0.05； t＝7.275， P<0.05)。过表达PTEN组中NLRP3和Caspase-1表达水平(0.75±0.06、0.62±0.05)高于其对照组(0.53±0.04、0.42±0.03)明显( t＝5.284， P<0.05； t＝5.941， P<0.05)。沉默PTEN组中NLRP3和Caspase-1表达水平(0.36±0.03、0.32±0.03)低于对照组(0.52±0.04、0.41±0.03)明显( t＝-5.543， P<0.05； t＝-3.674， P<0.05)。 结论:PTEN在GC-1细胞中呈高表达，其可能通过改变GC-1细胞焦亡水平，从而影响睾丸IRI的发生发展。

睾丸扭转是泌尿外科最常见的阴囊急症之一，常需要急诊手术以争取保留患侧睾丸。有不少学者认为扭转复位后的睾丸仍存在缺血再灌注损伤并且会对患者性激素水平、生育能力等造成威胁。本文通过综述睾丸扭转的研究进展，以期提高临床医生对睾丸扭转的认识。

目的:研究miR-29a通过靶向调控瞬时受体电位通道家族4(TRPV4)在睾丸缺血再灌注损伤(IRI)中对GC-1细胞增殖和凋亡的影响及作用机制。方法:建立睾丸GC-1细胞缺氧复氧模型，RT-PCR检测不同复氧损伤时间点miR-29a和TRPV4的表达水平；分别采用MTT实验、流式细胞术检测转染miR-29a对GC-1细胞增殖和凋亡能力的变化；荧光素酶实验证实miR-29a和TRPV4的靶向关系，Western blot法测定转染miR-29a后细胞中TRPV4的蛋白表达水平。结果:miR-29a随着复氧损伤时间的增加，其表达显著降低，而TRPV4的表达明显增加；过表达miR-29a能显著促进GC-1细胞的增殖能力，抑制细胞凋亡水平。沉默miR-29a可使GC-1细胞的增殖能力明显减弱，凋亡水平增加；荧光素酶报告实验表明TRPV4是miR-29a的下游靶基因。过表达miR-29a能明显抑制GC-1细胞的TRPV4表达，而沉默miR-29a能显著促进TRPV4表达。结论:MiR-29a可以通过靶向调控TRPV4来改变GC-1细胞的增殖和凋亡能力，从而影响睾丸IRI的发生发展。

目的 探讨自噬在大鼠睾丸扭转所致缺血再灌注损伤(I/RI)中的作用机制.方法 将 40 只健康雄性SD大鼠随机分为假手术组、I/RI组、I/RI+雷帕霉素(RAPA)组和I/RI+3-甲基腺嘌呤(3-MA)组,每组 10 只.后 3 组大鼠建立左侧睾丸扭转(720°,1 h)复位模型,I/RI+RAPA组和I/RI+3-MA组大鼠造模前分别给予自噬激动剂RAPA和自噬抑制剂3-MA干预.于睾丸复位12 h后取各组大鼠左侧睾丸和附睾,收集精子进行精子质量分析,采用H-E染色观察睾丸组织病理变化,采用试剂盒检测睾丸组织中超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量、总抗氧化能力(T-AOC),采用TUNEL染色检测睾丸组织细胞凋亡水平,通过蛋白质印迹法检测睾丸组织中自噬相关蛋白(Beclin1、p62)和凋亡相关蛋白(Bcl2、Bax、cleaved caspase 3)表达水平.结果 与假手术组比较,I/RI组大鼠精子质量下降,睾丸曲细精管排列松散,生殖细胞减少、脱落,睾丸组织SOD活性、T-AOC降低(均P＜0.05),MDA含量升高(P＜0.05),p62 和Bcl2 蛋白表达水平降低(均P＜0.05),Beclin1、Bax和cleaved caspase 3蛋白表达水平升高(均P＜0.05),凋亡生殖细胞明显增多.与I/RI组比较,I/RI+RAPA组大鼠精子质量提高,睾丸曲细精管排列正常,睾丸组织SOD活性、T-AOC升高(均P＜0.05),MDA含量降低(P＜0.05),Beclin1 和Bcl2 蛋白表达水平升高(均P＜0.05),p62、Bax和cleaved caspase 3 蛋白表达水平降低(均P＜0.05),凋亡生殖细胞减少;I/RI+3-MA组大鼠精子质量下降,睾丸曲细精管排列松散,睾丸组织SOD活性、T-AOC降低(均P＜0.05),MDA含量升高(P＜0.05),Beclin1 和Bcl2 蛋白表达水平降低(均P＜0.05),p62、Bax和cleaved caspase 3 蛋白表达水平升高(均P＜0.05),凋亡生殖细胞增多.结论 激活自噬可改善I/RI大鼠精子质量和睾丸组织病理损伤,缓解氧化应激,抑制生殖细胞凋亡.

睾丸扭转又称精索扭转,是常见的阴囊急症之一,是指睾丸和精索本身的解剖异常或活动度加大而引起的扭转,扭转时精索内血管发生扭转,造成睾丸血液运行不畅,可引起睾丸缺血、坏死,导致患者生殖能力受损或缺失.每年18岁以下青少年睾丸扭转的发病率约为3.8/10万[1].研究表明,扭转6h内是治疗黄金时间,6 h内得到有效治疗的睾丸挽救成功率为90%～100%[2].

目的 研究自噬调控对小鼠精原细胞缺氧/复氧损伤(H/RI)的影响,探讨自噬对小鼠睾丸组织缺血再灌注损伤(IRI)的影响.方法 以小鼠精原细胞系GC1 spg为研究对象构建H/RI模型,雷帕霉素(RA-PA)和3-甲基腺嘌呤(3-MA)分别作为自噬激动剂和抑制剂,设置对照组、模型组(H/RI)、自噬激动剂干预组(H/RI+自噬激动剂)、自噬抑制剂干预组(H/RI+自噬抑制剂).用噻唑蓝(MTT)法检测各组细胞增殖能力,流式细胞术检测各组细胞活性氧(ROS)释放水平和凋亡水平,实时荧光定量PCR(qPCR)检测各组细胞自噬相关基因Beclin1和凋亡相关基因Bcl-2、Bax mRNA的表达水平,Western blot检测各组细胞自噬相关蛋白LC3-Ⅰ、LC3-Ⅱ、Beclin1、p62和凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、caspase-3的表达水平.结果 与对照组比较,模型组增殖能力、Beclin1和Bcl-2 mRNA表达水平明显下降(P＜0.01),p62和Bcl-2蛋白表达水平明显下降(P＜0.01),ROS水平、细胞凋亡率、Bax mRNA相对表达水平明显上升(P＜0.01),Beclin1、Bax、caspase-3蛋白表达水平和LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ蛋白比值明显上升(P＜0.01).与模型组比较,自噬激动剂干预组细胞增殖能力、Beclin1和Bcl-2 mRNA表达水平明显上升(P＜0.01),Beclin1、Bcl-2蛋白表达水平和LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ蛋白比值均明显上升(P＜0.01),ROS水平、细胞凋亡率、Bax mRNA表达水平明显下降(P＜0.01),p62、Bax、caspase-3蛋白表达水平明显下降(P＜0.01).与模型组比较,自噬抑制剂干预组细胞增殖能力、Beclin1和Bcl-2 mRNA表达水平明显下降(P＜0.01),Beclin1、Bcl-2蛋白表达水平和LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ蛋白比值明显下降(均P＜0.01),ROS水平、细胞凋亡率、Bax mRNA表达水平明显上升(P＜0.01),p62、Bax、caspase-3蛋白表达水平明显上升(P＜0.01).结论 增强自噬能抑制小鼠精原细胞凋亡,修复H/RI,为治疗睾丸组织IRI提供了理论基础.

目的:探究姜黄素对大鼠睾丸缺血再灌注损伤后的保护作用及核因子E2相关因子2(Nrf2)表达的影响.方法:32只4周龄健康雄性SD大鼠随机分为假手术组、生理盐水组、姜黄素单次给药组(术中灌注姜黄素)、姜黄素连续给药组(术中及术后7 d灌注姜黄素),每组8只.建立左侧睾丸扭转复位动物模型,于缺血再灌注损伤后1周用彩色多普勒超声观察睾丸损伤情况;术后6周处死大鼠,取左侧睾丸,测量精子活动率及精子计数;睾丸组织切片H-E染色观察睾丸组织病理改变;qRT-PCR检测各组大鼠睾丸Nrf2表达的差异.结果:姜黄素给药组能明显提高大鼠睾丸缺血再灌注损伤后精子活动率、精子计数水平,且能显著改善睾丸组织损害程度.姜黄素给药组睾丸Nrf2的表达水平明显高于缺血再灌注损伤组.结论:姜黄素能够上调缺血再灌注损伤后睾丸Nrf2的表达,有效减轻睾丸缺血再灌注损伤,从而对青春前期大鼠单侧睾丸扭转起到明显的远期保护作用,且连续给药优于单次给药.

目的 探讨胡黄连苷Ⅱ在大鼠睾丸缺血再灌注损伤过程中的保护作用.方法 选取成年雄性SD大鼠45只随机分为3组,每组15只:睾丸缺血再灌注+胡黄连苷Ⅱ组(睾丸IRI+胡黄连苷Ⅱ组);睾丸缺血再灌注组(睾丸IRI组);对照组.睾丸IRI组和睾丸IRI+胡黄连苷Ⅱ组大鼠分别建立睾丸扭转复位模型,睾丸IRI+胡黄连苷Ⅱ组在再灌注同时腹腔注射胡黄连苷Ⅱ(10 mg/kg).HE染色观察睾丸组织病理改变;测定丙二醛(MDA)、超氧化物岐化酶(SOD)含量;采用原位缺口末端标记检测细胞凋亡指数;免疫组化检测睾丸组织中的Bax和Caspase-3的表达情况;RT-PCR检测TNF-α和IL-1βmRNA表达水平.结果 睾丸IRI组可见生精上皮排列紊乱,生精细胞广泛脱落等表现;3组的凋亡指数分别为(4.28±0.36)％、(18.93±1.27)％、(9.53±1.02)％,SOD活性分别为(0.83±0.05)、(0.28±0.03)、(0.54±0.03)U/mg蛋白,MDA含量分别为(1.92±0.26)、(5.23±0.78)、(2.97±0.35)nmol/g蛋白,各组上述指标相互比较均有统计学意义(P＜0.05);睾丸IRI组中Bax及Caspase-3表达明显高于对照组,睾丸IRI+胡黄连苷Ⅱ组明显改善IRI引起的表达变化;与对照组相比,睾丸IRI组中TNF-α和IL-1βmRNA表达水平明显增高.和睾丸IRI组比较,睾丸IRI+胡黄连苷Ⅱ组中TNF-α和IL-1βmRNA表达水平明显减低,各组上述指标相互比较均有统计学意义(P＜0.05).结论 胡黄连苷Ⅱ可减轻氧化应激水平,发挥抗炎及抗凋亡作用,从而在睾丸组织在缺血再灌注损伤过程中发挥保护作用.

目的:揭示干细胞微囊改善Leydig细胞急性氧化应激损伤的机制. 方法:实验组采用单侧睾丸切除的SD大鼠5例建立睾丸缺血-再灌注损伤模型,经尾静脉注射干细胞微囊进行干预.对照组采用单侧睾丸切除的SD大鼠5例经尾静脉注射等量PBS.再灌注2h后HE染色检测睾丸组织中中性粒细胞浸润程度,TUNEL和caspase 3免疫组化染色检测Leydig细胞凋亡,Ki67免疫组化染色检测Leydig细胞增殖. 结果:实验组大鼠睾丸间质血管中中性粒细胞黏附明显少于对照组,且TUNEL及caspase 3免疫组化结果显示Leydig细胞的凋亡数量明显少于对照组,Ki67免疫组化结果显示实验组Leydig细胞增殖数量多于对照组. 结论:干细胞微囊可减少中性粒细胞在急性期的黏附,通过减少活性氧自由基的来源改善Leydig细胞的急性氧化应激损伤.