目的:基于溶酶体钙离子通道瞬时受体电位粘脂素亚家族1(TRPML1)探讨罗哌卡因在诱导心肌细胞自噬性凋亡中的作用机制.方法:将H9c2心肌细胞分为对照组、ROP诱导组、罗哌卡因+TRPML1抑制剂(1.25μmol/L ML-SI1)、罗哌卡因+活性氧(ROS)清除剂(100μmol/L NAC)组.CCK-8检测各组细胞增殖活性;Annexin V-APC/PI流式细胞术检测细胞凋亡;流式细胞术检测ROS含量和钙离子水平;免疫荧光双染LC3与LAMP-1,观察自噬小体与溶酶体膜蛋白的共定位情况;Western blot检测凋亡相关(Caspase-3、cleaved Caspase-3)、自噬相关(LC3-Ⅱ/Ⅰ、P62)蛋白表达情况.结果:与对照组相比,罗哌卡因诱导组细胞增殖活性降低,细胞内ROS和钙离子含量升高(P<0.05);当TRPML1表达被抑制时,能够降低细胞内ROS和Ca2+水平,同时减少自噬小体的蓄积,改善细胞凋亡.结论:局麻药罗哌卡因通过激活ROS/TRPML1途径致自噬流受阻,从而引起ROS、Ca2+和自噬小体的过度累积,导致心肌细胞出现凋亡.

目的:研究远端缺血后处理（RIPostC）对脑卒中大鼠脑缺血半暗带的保护作用及最佳干预时间，初步探讨RIPostC脑保护的相关机制。方法:构建大鼠大脑中动脉栓塞（MCAO）模型，栓塞2 h后再灌注，依据RIPostC开始干预时间将36只Sprague Dawley大鼠分为假手术组（Sham组）、缺血-再灌注（I/R）组、缺血后立即干预组（RIPostC-0 h组）、2 h后干预组（RIPostC-2 h组）、6 h后干预组（RIPostC-6 h组）和12 h后干预组（RIPostC-12 h组）。RIPostC进行4个循环，每个循环5 min。再灌注24 h后采用改良大鼠神经功能缺损（mNSS）评分进行神经功能评估，2,3,5-氯化三苯基四氮唑（TTC）染色评估脑梗死体积，干-湿重法测定脑含水量，荧光定量PCR检测瞬时受体电位粘脂素1（TRPML1）信使RNA（mRNA）表达水平，western-blotting法检测TRPML1和自噬相关蛋白Beclin1、微管相关蛋白1轻链3（LC3）、p62的蛋白表达水平。结果:6组大鼠mNSS评分、脑梗死体积、脑含水量、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值、Beclin1、p62以及TRPML1 mRNA和蛋白表达水平比较，差异均具有统计学意义（F = 4.640、9.968、10.211、83.414、32.074、8.234、172.232、27.462，P均< 0.05）。与I/R组比较，各RIPostC组mNSS评分、脑梗死体积、脑含水量、p62蛋白均显著降低（P均< 0.05）；而LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值、Beclin1以及TRPML1 mRNA和蛋白表达水平均显著升高，且RIPostC-0 h组TRPML1 mRNA和蛋白表达水平升高更明显（P均< 0.05）。此外，RIPostC-0 h组、RIPostC-2 h组、RIPostC-6 h组脑梗死体积均较RIPostC-12 h组减少更明显（P均< 0.05）。结论:RIPostC可显著减少大鼠脑梗死体积、减轻脑水肿、改善神经功能缺损症状，且在I/R之后立即实施效果最佳，RIPostC的脑保护作用可能是通过上调TRPML1提高脑I/R区的自噬水平实现的。

TRP通道(Transient Receptor Potential,瞬时受体电位通道)是细胞内重要的Ca2+调控通道,其在细胞内有着独特的分布及其能与其它钙离子传感元件特定地相互作用.TRP通道蛋白通过对Ca2+的调控发挥调节细胞的多种生理活动,如自噬和凋亡等.其中细胞质膜或是细胞器膜上的这些钙离子通道开放后可提升胞质[Ca2+]i,为自噬的启动提供Ca2+.自噬启动的初衷是为了使细胞能够在缺氧、营养匮乏及病理因素等应激状态下降解细胞内某些细胞成分满足某些重要生理活动的物质需求,但有大量的研究显示过度的自噬可导致细胞发生与凋亡相关的细胞程序性死亡,因而TRP通道对自噬的调控作用与疾病的发生、发展紧密相连,如TRPML1(Transient Receptor Potential mucolipin-1)与Ⅳ型粘膜脂质沉积症相关.根据目前对TRP通道与自噬的研究结果来看,不同的TRP通道可通过不同的机制升高胞质[Ca2+]i,这都与不同TRP通道蛋白在细胞内的特定分布有关,如TRPV(Transient receptor potential vanilloid)通道主要在细胞质膜或内质网膜上调控Ca2+,而TRPML则主要在溶酶体上发挥作用,但具体分子通路激活机制尚需进一步研究.

目的 研究雌激素缺乏状态下补钙对血管内皮炎症反应的影响,及G蛋白偶联的雌激素受体可能发挥的作用及机制.方法 将40只8周龄健康雌性C57BL/6小鼠按体重随机分为4组,分别为假手术对照组、去卵巢模型组、高钙组、植入G蛋白偶联的雌激素受体(G protein-coupled estrogen receptor,GPER)特异性激动剂G1+高钙组,每组10只.小鼠适应性喂养1周后行双侧去卵巢手术,假手术组仅切除卵巢周围部分脂肪组织.假手术组和去卵巢模型组喂饲AIN-93G基础饲料(钙含量0.5％),高钙组和植入G1+高钙组喂饲高钙饲料(调整的AIN-93G,钙含量1.5％).3个月后,植入G1+高钙组小鼠皮下植入G1,每天0.2 mg/kg,其余组皮下植入安慰剂.28 d后,麻醉状态下心脏采血,检测血清血管内皮细胞粘附因子1(vascular endothelial adhesion factor-1,VCAM-1)、肿瘤坏死因子 α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、雌二醇和血钙浓度;取主动脉弓做免疫组化检测瞬时受体电位通道1(transient receptor potential channel 1,TRPC1)、磷酸化细胞外信号调节激酶(phosphorylated-extracellular regulated kinase,p-ERK)1/2、VCAM-1 以及 CD68表达水平.结果 去卵巢组小鼠体重高于假手术组(P＜0.05),单独补钙或补钙联合植入G1组体重与去卵巢模型组相比差异无统计学意义(P＞0.05).摄食量各组间差异均无统计学意义(P＞0.05).去卵巢小鼠血清雌二醇水平低于假手术组(P＜0.05).补钙组血钙浓度高于未补钙组(P＜0.05).去卵巢小鼠血清VCAM-1浓度高于假手术组(P＜0.05),单纯补钙组血清VCAM-1浓度高于去卵巢模型组(P＜0.05),而补钙联合植入G1组血清VCAM-1浓度与去卵巢模型组相比差异无统计学意义(P＞0.05).TNF-α浓度各组间差异均无统计学意义(P＞0.05).单纯补钙组小鼠TRPC1、p-ERK1/2、VCAM-1和CD68表达高于去卵巢模型组(P＜0.05),而补钙联合植入G1组上述指标均低于单纯补钙组(P＜0.05),与去卵巢模型组相比差异无统计学意义(P＞0.05).结论 雌激素缺乏状态下,补钙引发炎症反应增加,可能与GPER的活性改变,进而影响TRPC1/ERK1/2通路有关.