目的:探讨绞股蓝皂苷ⅩⅦ调控核因子E2相关因子2/抗氧化反应元件（Nrf2/ARE）信号通路抗脑缺血/再灌注（I/R）的机制。方法:将40只SPF级SD大鼠随机分为假手术组、I/R模型组及25、50和100 mg/kg绞股蓝皂苷ⅩⅦ组，每组8只。绞股蓝皂苷ⅩⅦ组分别给予绞股蓝皂苷ⅩⅦ 25、50、100 mg/kg灌胃（灌胃量0.01 mL/g），连续给药14 d；其余两组给予相同剂量生理盐水灌胃。然后采用改良线栓法制备大鼠脑I/R模型；假手术组大鼠采用相同方法手术，但不产生实质性栓塞。再灌注后24 h，评估各组大鼠神经功能缺损评分；采集大鼠腹主动脉全血检测血清活性氧（ROS）、血红素加氧酶-1（HO-1）、γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶（γ-GCS）、超氧化物歧化酶（SOD）、醌NADH氧化还原酶1（NQO1）、丙二醛（MDA）水平；随后取完整大脑组织并分离大脑皮质脑梗死周围半暗带组织，观察大鼠脑组织大体情况及脑梗死体积，光镜下观察脑组织病理学变化，采用实时荧光定量反转录-聚合酶链反应（RT-qPCR）检测脑缺血半暗带组织Nrf2和Keap1的mRNA表达，采用蛋白质免疫印迹试验（Western blotting）检测脑缺血半暗带组织Nrf2和Keap1的蛋白表达。结果:再灌注后24 h，与假手术组比较，I/R模型组大鼠神经功能缺损评分明显升高，脑组织梗死体积明显增大，血清NQO1、SOD和γ-GCS水平均明显降低、血清MDA、HO-1和ROS水平均明显升高，脑缺血半暗带组织Nrf2和Keap1的mRNA及蛋白表达均明显升高。与I/R模型组比较，50 mg/kg与100 mg/kg绞股蓝皂苷ⅩⅦ能明显降低脑I/R大鼠的神经功能缺损评分（分：1.50±0.53、1.37±0.52比2.75±0.46），缩小脑组织梗死体积〔（19.8±5.1）%、（21.4±6.4）%比（42.3±5.8）%〕，明显提高血清NQO1、SOD、HO-1和γ-GCS水平〔NQO1（ng/L）：186.05±10.38、220.75±16.22比131.36±5.95，SOD（kU/L）：63.23±5.30、72.70±8.62比36.75±6.55，HO-1（ng/L）：60.57±7.93、60.35±4.72比42.72±4.95，γ-GCS（kU/L）：8.81±0.53、8.72±0.69比6.80±0.56〕，明显降低血清MDA和ROS水平〔MDA（μmol/L）：5.94±0.66、5.61±0.53比10.88±1.34，ROS（kU/L）：69.11±4.23、67.12±4.52比104.43±7.54〕，同时可明显提高脑缺血半暗带组织Nrf2和Keap1的mRNA及蛋白表达〔Nrf2 mRNA（2 -△△Ct）：1.90±0.13、2.13±0.18比1.48±0.11，Keap1 mRNA（2 -△△Ct）：1.78±0.11、1.85±0.10比1.43±0.10，Nrf2/β-actin：0.73±0.04、0.79±0.03比0.60±0.03，Keap1/β-actin：0.71±0.01、0.76±0.03比0.61±0.01〕，比较差异均有统计学意义（均 P<0.01）；25 mg/kg绞股蓝皂苷ⅩⅦ无明显作用。 结论:绞股蓝皂苷ⅩⅦ （50 mg/kg和100 mg/kg）可能通过Nrf2/ARE信号通路调节NQO1、SOD、HO-1、γ-GCS、ROS及MDA起到抗脑I/R损伤的作用。

目的 研究绞股蓝总皂苷(GPs)对tau蛋白过表达细胞代谢的影响,探讨GPs治疗阿尔茨海默病(AD)的机制.方法 通过采用CRISPR/Cas9技术构建微管相关蛋白tau(MAPT)过表达N2a细胞系(MAPT细胞);用CCK-8法检测GPs对N2a、MAPT细胞存活率的影响;体外培养N2a(对照组)、MAPT细胞(模型组),向MAPT细胞中加入GPs(50、100μg·mL-1)进行干预,共同孵育24h后收集细胞,采用Western blotting技术检测总tau蛋白量水平;利用代谢组学技术检测GPs对MAPT细胞内源性代谢产物的影响,明确差异代谢产物及通路.结果 50、100、200 μg·mL-1GPs对N2a细胞活力无明显影响;5、50、100、200 μg·mL-1 GPs对MAPT细胞活力无显著性影响;与对照组相比,MAPT细胞内tau蛋白水平明显增加(P＜0.001);与模型组比较,50 μg·mL-1 GPs可明显减少MAPT细胞内总tau蛋白含量(P＜0.05);代谢组学结果显示,按照差异代谢产物数量占比从高到底依次为脂质和类脂分子,有机酸及其衍生物,核苷、核苷酸和类似物等.通过京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路分析,差异代谢产物主要富集在核苷酸代谢、氨基酸合成、甘油磷脂代谢等通路.与模型组比较,给药后参与甘油磷脂代谢通路的胞磷胆碱和磷脂酰胆碱水平显著增加(P＜0.001),甘油磷酰胆碱、甘油-3-磷乙醇胺水平显著降低(P＜0.001).结论 GPs可以减少细胞内tau蛋白的异常过表达,通过增加胞磷胆碱和磷脂酰胆碱水平、减少甘油磷酰胆碱和甘油-3-磷乙醇胺水平调控甘油磷脂代谢通路.

目的 探讨绞股蓝皂苷(Gyp)调节高迁移率族蛋白B1-晚期糖基化终产物受体(HMGB1-RAGE)信号通路对骨肉瘤细胞恶性生物学行为的影响及其机制.方法 使用不同浓度(0～400 μmol/L)绞股蓝皂苷处理MG63 细胞,CCK-8检测细胞活力.将MG63 细胞分为对照组(Control组)、绞股蓝皂苷低、中、高浓度组(Gyp-L组、Gyp-M组、Gyp-H组,50、100、200 μmol/L Gyp)、绞股蓝皂苷高浓度+过表达 HMGB1 阴性对照组(Gyp-H+pcDNA-NC 组,200 μmol/L Gyp+转染 pcDNA-NC 质粒)和绞股蓝皂苷高浓度+过表达 HMGB1 组(Gyp-H+pcDNA-HMGB1 组,200 μmol/L Gyp+转染pcDNA-HMGB1 质粒).Edu检测细胞增殖水平;Transwell小室和划痕愈合实验检测细胞侵袭和迁移能力;ELISA检测转化生长因子-β(TGF-β)、基质金属蛋白酶(MMP-9)和白介素-6(IL-6)水平;流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot检测通路、凋亡及EMT相关蛋白.随后建立骨肉瘤移植小鼠模型,在体检验绞股蓝皂苷对骨肉瘤移植瘤生长的影响.结果 25～400 μmol/L的绞股蓝皂苷能降低MG63 细胞活力.与Control组相比,Gyp-L组、Gyp-M组和Gyp-H组细胞Edu阳性率、细胞侵袭数、划痕愈合率、TGF-β、MMP-9 和IL-6 水平及 Bcl-2、HMGB1、RAGE、N-cadherin和VEGF蛋白表达显著降低(P＜0.05);细胞凋亡率及 Bax和 E-cadherin蛋白表达显著增加(P＜0.05),且呈浓度依赖性.过表达 HMGB1 可部分逆转绞股蓝皂苷对骨肉瘤细胞恶性生物学行为的抑制作用(P＜0.05).小鼠移植瘤实验结果表明,绞股蓝皂苷可显著抑制小鼠骨肉瘤移植瘤的生长(P＜0.05).结论 绞股蓝皂苷对骨肉瘤细胞恶性生物学行为的抑制作用可能与抑制HMGB1-RAGE信号通路有关.

绞股蓝作为传统中药在我国有悠久的药用历史.绞股蓝具有神经保护、抗缺血再灌注损伤、抗肿瘤、免疫调节、降血糖、调脂等广泛药理活性.早期对绞股蓝药理作用的研究多集中于其皂苷类成分,而近年越来越多的研究开始关注其多糖、黄酮类成分的药理活性,绞股蓝药理活性成分的研究也从早期的粗提物、同类成分混合物逐渐深入为单体化合物.本文主要就近年来报道的绞股蓝皂苷、多糖、黄酮类成分及分离的单体化合物在中枢神经系统疾病、缺血再灌注损伤、免疫调节、肿瘤等疾病中的药理作用进行概述,为进一步阐明绞股蓝的药效物质基础以及高效开发绞股蓝相关药物提供重要线索和依据.

[目的]建立同时测定绞股蓝药材中8种成分(人参皂苷Rb1、Rb3、Rd、Re、F2和绞股蓝皂苷A、XLIX、XVII)含量的高效液相色谱方法.[方法]采用Agilent Eclipse XDB-C18(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱;以体积分数0.3％甲酸溶液(A)—乙腈(B)为流动相进行梯度洗脱,流速为1.5 mL·min-1;检测波长为203 nm;柱温为50℃.[结果]8个成分的峰面积与浓度的线性关系良好(r≥0.999),回收率在97％～100％范围内.[结论]该方法简便快速、 准确可靠、 重复性好,可用于绞股蓝药材的质量控制.

目的 观察不同剂量绞股蓝总皂苷(Gyp)对胶质母细胞瘤(GBM)细胞株U87细胞形态、迁移能力的影响,并探讨其机制.方法 取对数生长期U87细胞,分别加入10、5 mg/mL的Gyp溶液100 μL及等量PBS(分别计为A、B、C组),常规培养细胞.比较各组细胞形态、迁移能力及IL-6蛋白.结果 A组细胞生长慢、体积小、固缩现象非常明显,细胞贴壁现象接近消失;B组细胞生长缓慢,体积缩小,胞质固缩,部分细胞甚至破裂死亡,细胞贴壁现象减弱;C组细胞生长规则,轮廓清晰,形态饱满,胞体透亮,贴壁生长良好.A、B、C组细胞迁移覆盖区域占原有划痕区的54.8％、82.4％、98.6％,两两比较,P均＜0.05.A、B、C组穿膜细胞个数分别占19.8％、58.9％、100％,两两比较,P均＜0.05.A、B、C组IL-6蛋白水平分别为小量、中等量、多量,两两比较,P均＜0.05.结论 Gyp可抑制U87细胞生长及减弱细胞迁移能力,尤以10 mg/mL的Gyp效果更佳,机制可能与其可抑制IL-6蛋白表达有关.

绞股蓝总皂苷具有显著的降低血脂的作用,然而其机制尚未明确.课题组在前期研究的基础上,将33只C57BL/6J雄性小鼠随机分为3组,对照组(ND组)、模型组(HFD组)和绞股蓝皂苷组(HFD+ GP组),分别给予维持饲料和高脂饲料,从16周开始,每日分别灌胃给予绞股蓝总皂250 mg/kg和等体积的空白溶剂,至38周,收集小鼠的血清和肝脏样本.通过HE染色观察肝脏组织的病理变化,检测血清总胆固醇和低密度脂蛋白水平,利用UPLC-MS/MS技术对小鼠肝脏14种胆汁酸含量进行分析,采用实时荧光定量PCR检测Cyp7a1、Cyp8b1、Fxr、Shp、Lrh1、Hnf4α基因表达水平.与对照组比较,模型组有明显的脂肪泡结构,给予绞股蓝总皂苷可以明显减轻肝脏组织的病理改变.与模型组比较,绞股蓝总皂苷可以显著降低血清中TC和LDL-C含量,显著降低肝脏中牛磺熊去氧胆酸(TUDCA)、甘氨鹅去氧胆酸(GCDCA)和甘氨脱氧胆酸(GDCA)含量,显著升高肝脏中鹅去氧胆酸(CDCA)、脱氧胆酸(DCA)和牛磺脱氧胆酸(TDCA)含量,并在上调肝脏Cyp7a1、Cyp8b1、Fxr和Lrh1基因表达的同时下调Shp的基因表达.绞股蓝总皂苷降脂作用的潜在靶点可能与FXR介导的胆汁酸代谢通路有关,为进一步深入探讨绞股蓝总皂苷降脂作用及其机制提供了参考.

目的 建立绞股蓝药材皂苷类化合物的超高效液相色谱(UPLC)指纹图谱法,为绞股蓝药材的质量控制和质量评价提供参考.方法 色谱柱采用ACQUITY UPLC BEH C18柱(100 mm×2.1 mm,1.7μm),流动相以乙腈(A)-水(B)梯度洗脱,检测波长为203 nm,流速为0.2 mL/min,柱温为30℃.结果 绞股蓝药材皂苷类化合物指纹图谱有9个共有峰,指认了1个S峰为参照峰;11批绞股蓝药材的相似度达0.88以上,方法学考察符合指纹图谱的技术要求.结论 该方法较传统的高效液相色谱法有更好的分离效果,准确性、精密度、重复性高,可为绞股蓝药材的质量控制提供参考.

目的 建立HPLC波长切换法同时测定心神安胶囊中9种成分的含量.方法 采用AgilentEclipseXDB-C18色谱柱, 流动相乙腈 (A)-0.1％甲酸溶液 (B), 梯度洗脱;流速0.9 mL·min-1;检测波长分别为320 nm[检测远志 (口山) 酮Ⅲ、3, 6'-二芥子酰基蔗糖]、203 nm (检测人参皂苷Rb1、绞股蓝皂苷XLIX、绞股蓝皂苷XVII) 和254 nm (检测毛蕊异黄酮葡萄糖苷、芒柄花苷、毛蕊异黄酮、芒柄花素);柱温25℃.结果 远志 (口山) 酮Ⅲ、3, 6'-二芥子酰基蔗糖、人参皂苷Rb1、绞股蓝皂苷XLIX、绞股蓝皂苷XVII、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、芒柄花苷、毛蕊异黄酮、芒柄花素分别在2.070～41.40μg·mL-1 (r=0.999 2) 、3.860～77.20μg·mL-1 (r=0.999 6) 、11.29～225.8μg·mL-1 (r=0.999 8) 、5.070～101.4μg·mL-1 (r=0.999 9) 、19.86～397.2μg·mL-1 (r=0.9995) 、1.280～25.60μg·mL-1 (r=0.9991) 、0.9600～19.20μg·mL-1 (r=0.9993) 、0.670 0～13.40μg·mL-1 (r=0.999 7) 、2.580～51.60μg·mL-1 (r=0.999 1) 内线性关系良好, 平均回收率分别为98.04％, 99.26％, 99.05％, 97.42％, 100.0％, 98.27％, 97.81％, 96.84％和99.86％, RSD分别为1.28％, 0.82％, 1.43％, 1.43％, 0.86％, 1.26％, 1.38％, 1.16％和0.69％.结论 本方法操作简便、准确、重复性好, 能够对心神安胶囊中9种成分进行同时含量测定, 为提高和完善心神安胶囊的质量标准提供了有效方法.

目的 建立HPLC测定绞股蓝中七叶胆苷XLVI和人参皂苷Rb3含量的方法.方法 采用Ultimate XB-C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以乙腈(A)-水(B)线性梯度洗脱,检测波长203 nm,流速1 mL·min-1,柱温30℃.结果 七叶胆苷XLVI在3.30～39.62 μg·mL-1范围内线性良好(r2=0.999 7),平均回收率为113％,RSD为1.84％;人参皂苷Rb3在3.27～39.26μg·mL-1范围内线性良好(r2=0.999 7),平均回收率为102％,RSD为2.82％.结论 该方法有较好的分离效果,准确性、精密度和重复性良好,为绞股蓝的研究和质量控制提供了科学依据.