目的 分析绞股蓝总皂苷(gypenosides,Gyp)对结肠癌HCT116 细胞增殖的抑制作用,并阐明其机制.方法 采用Cell counting kit-8(CCK-8)法和流式细胞术检测细胞活力、细胞周期分布及凋亡率;采用实时荧光定量聚合酶链式反应(quantitative real time polymerase chain reaction,qRT-PCR)和蛋白质印记(Western blot)分别检测mRNA和蛋白质表达水平;采用Bodipy染色检测脂滴数量.结果 Gyp 呈浓度依赖性和时间依赖性抑制 HCT116 细胞增殖;Gyp 显著增加 G0/G1 期HCT116 细胞的比例,下调周期蛋白依赖性激酶(cyclin-dependent kinases,CDKs,包括 CDK2、CDK4 和CDK6)蛋白的表达水平并上调 p21 和 p27 蛋白的表达水平;Gyp 显著增加凋亡的HCT116 细胞的比例,上调活化型半胱氨酸蛋白酶-3(Cleaved caspase-3)、活化型聚(ADP-核糖基)转移酶1[Cleaved Poly(ADP-ribose)polymerase 1,Cleaved PARP1]和Bcl-2 相关X蛋白(Bcl-2 as-sociated X protein,Bax)的表达水平并下调B淋巴细胞瘤-xl(B cell lymphoma-xl,Bcl-xl)蛋白的表达水平;Gyp显著降低HCT116 细胞中脂滴的数量,下调脂肪酸合酶(fatty acid synthase,Fasn)mR-NA的表达水平并上调甘油三酯脂酶(adipose triglyceride lipase,Atgl)mRNA及蛋白的表达水平;与Gyp单独处理相比,Gyp与阿格列他汀(Atgl inhibitor,Atgl抑制剂,简称Atgli)合用显著增加HCT116 细胞中的脂滴数量、显著下调HCT116 细胞的凋亡率,并降低Cleaved caspase-3 的表达水平.结论 Gyp通过诱导细胞周期阻滞和凋亡抑制HCT116 细胞增殖,其机制与Atgl介导的脂代谢有关.

目的 研究绞股蓝总皂苷(GPs)对tau蛋白过表达细胞代谢的影响,探讨GPs治疗阿尔茨海默病(AD)的机制.方法 通过采用CRISPR/Cas9技术构建微管相关蛋白tau(MAPT)过表达N2a细胞系(MAPT细胞);用CCK-8法检测GPs对N2a、MAPT细胞存活率的影响;体外培养N2a(对照组)、MAPT细胞(模型组),向MAPT细胞中加入GPs(50、100μg·mL-1)进行干预,共同孵育24h后收集细胞,采用Western blotting技术检测总tau蛋白量水平;利用代谢组学技术检测GPs对MAPT细胞内源性代谢产物的影响,明确差异代谢产物及通路.结果 50、100、200 μg·mL-1GPs对N2a细胞活力无明显影响;5、50、100、200 μg·mL-1 GPs对MAPT细胞活力无显著性影响;与对照组相比,MAPT细胞内tau蛋白水平明显增加(P＜0.001);与模型组比较,50 μg·mL-1 GPs可明显减少MAPT细胞内总tau蛋白含量(P＜0.05);代谢组学结果显示,按照差异代谢产物数量占比从高到底依次为脂质和类脂分子,有机酸及其衍生物,核苷、核苷酸和类似物等.通过京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路分析,差异代谢产物主要富集在核苷酸代谢、氨基酸合成、甘油磷脂代谢等通路.与模型组比较,给药后参与甘油磷脂代谢通路的胞磷胆碱和磷脂酰胆碱水平显著增加(P＜0.001),甘油磷酰胆碱、甘油-3-磷乙醇胺水平显著降低(P＜0.001).结论 GPs可以减少细胞内tau蛋白的异常过表达,通过增加胞磷胆碱和磷脂酰胆碱水平、减少甘油磷酰胆碱和甘油-3-磷乙醇胺水平调控甘油磷脂代谢通路.

绞股蓝为葫芦科绞股蓝属植物绞股蓝Gynostemma pentaphyllum(Thunb.)Makino的全草,具有清热、补虚、解毒的功效.研究发现绞股蓝中主要活性成分为三萜皂苷,具有抗肿瘤、保肝、保肾、免疫调节、抗氧化等药理活性.皂苷类化合物中糖单元对于药理活性具有重要影响,针对绞股蓝皂苷进行糖基水解并总结其构效关系是挖掘活性绞股蓝皂苷及衍生物的重要手段,包括理化水解(酸水解、碱水解、热处理)以及生物转化(微生物转化、糖苷酶)两类方法.该文对绞股蓝皂苷糖基水解相关研究进行归纳总结,并展现糖基部分变化所带来的药理活性变化,旨在为后续绞股蓝皂苷糖基结构修饰及构效关系研究提供参考.

该研究旨在从体内、外探究晾晒干燥和杀青烘干 2 种不同干燥方式绞股蓝总皂苷及其差异部位对急性肺损伤(acute lung injury,ALI)小鼠炎症的改善作用.通过野生型C57BL/6J雄性小鼠气道喷雾脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)构建模型,造模 24 h后尾静脉注射给药.采用肺功能、肺组织湿重干重比(W/D)、肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)总蛋白浓度、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)和肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor α,TNF-α)含量等指标及肺组织病理变化评价不同绞股蓝皂苷对ALI小鼠的改善作用.研究发现晾干绞股蓝总皂苷(YGGPs)和1～2 个糖基取代的绞股蓝稀有皂苷(GPs1-2)可以改善ALI小鼠肺功能,BALF中IL-1β和TNF-α的水平显著降低,肺部炎症得到改善,且GPs1-2 抑制RAW264.7 细胞中NO释放率作用更为显著.该研究表明,绞股蓝采用不同干燥方式会对其抗炎活性造成影响,未杀青晾干绞股蓝产生的稀有皂苷具有更佳的抗炎活性.

目的 研究绞股蓝总皂苷对非酒精性脂肪肝(nonalcoholic fatty liver disease,NAFLD)大鼠肝脏保护作用及免疫调节作用机制.方法 48只SD大鼠随机分为正常对照组,模型对照组,多烯磷脂酰胆碱胶囊组(阳性对照组,150 mg·kg-1)及绞股蓝总皂苷高、中、低(240,120,60 mg·kg-1)剂量组,除正常对照组外,其余各组连续饲喂高脂饲料10周,制备NAFLD模型;模型成功后,各组连续给药8周.实验期间,分别于给药0,4,8周眼眶取血检测血清AST、ALT;末次给药后,采用流式细胞技术检测外周血Th17和Treg细胞含量;酶联免疫法检测血清IL-17、IL-10及TNF-α含量.HE染色检查肝组织病理变化和免疫组化法检查肝组织IL-17和Foxp3表达.结果 给药4周,绞股蓝总皂苷高剂量显著降低大鼠血清ALT、AST(P＜0.01);给药8周,绞股蓝总皂苷各剂量均能显著降低血清ALT、AST(P＜0.05,0.01).绞股蓝总皂苷高、中剂量能改善肝组织病变,降低TNF-α水平;高剂量显著降低IL-17、升高IL-10水平(P＜0.05,0.01),降低淋巴细胞IL-17含量,升高CD4+CD25+Treg含量(P＜0.05),明显减少炎症因子IL-17的表达和增加Foxp3表达.结论 绞股蓝总皂苷能改善NAFLD大鼠肝脏病变,其作用机制可能与调节肝脏Treg/Th 17细胞平衡,减少促炎症因子和增加抗炎因子产生相关.

为探究绞股蓝总皂苷调节自噬小体对动脉粥样硬化的防治作用.本研究分体内、体外实验.体内实验:30只健康Apo E-/-小鼠随机分为3组,模型组、绞股蓝总皂苷组和辛伐他汀组,每组10只.10只C57BL/6J小鼠为正常组.模型制备及给药干预完成后,全自动生化分析仪检测各组小鼠血脂水平,Western blot技术检测各组小鼠主动脉Atg3、Atg4c、Atg5、Atg12蛋白表达情况.体外实验:培养EA.hy926细胞,随机分为正常组、模型组、绞股蓝总皂苷组、人参皂苷GRb3组和绞股蓝皂苷XILX组.Western blot技术检测各组细胞自噬小体形成信号通路相关蛋白Atg3、Atg4c、Atg5、Atg12的表达情况.结果发现,绞股蓝总皂苷能够降低ApoE-/-小鼠血清中的TG、TC、LDL-C水平(P＜0.01),提高血清HDL-C水平(P＜0.01).且绞股蓝总皂苷能够提高ApoE-/-小鼠主动脉Atg3、Atg4c、Atg5、Atg12蛋白表达水平(P＜0.05或P＜0.01).绞股蓝总皂苷、人参皂苷GRb3和绞股蓝皂苷XILX能够提高ox-LDL诱导的EA.hy926细胞自噬小体相关蛋白Atg3、Atg4c、Atg5、Atg12的表达水平(P＜0.01).且绞股蓝总皂苷效果最好.以上结果说明,股蓝总皂苷可能通过促进自噬小体形成,降低ApoE-/-小鼠血清血脂水平,保护EA.hy926细胞抗内皮损伤,进而发挥其防治AS的生物学作用,且在该过程中人参皂苷GRb3和绞股蓝皂苷XILX可能是绞股蓝总皂苷中发挥关键作用的有效成分.

目的 研究绞股蓝总皂苷改善2型糖尿病小鼠糖脂代谢及肝脏脂肪变性的作用,并探讨其相关机制.方法 C57BL/6J小鼠采用高脂饲料加小剂量多次腹腔注射链脲佐菌素的方法建立2型糖尿病动物模型,随机分为模型组、阳性组(盐酸二甲双胍300mg/kg)、绞股蓝总皂苷低剂量组(70 mg/kg)、中剂量组(140 mg/kg)和高剂量组(280 mg/kg).另设空白组,各组动物持续灌胃8周,摘眼球取血,检测小鼠血清生化指标,观察肝组织病理学改变,实时荧光定量PCR法检测小鼠肝脏中自噬相关基因Beclin-1及LC3B的表达.结果 与模型组相比,治疗组小鼠血糖、血脂、总胆固醇、转氨酶等血清生化指标明显降低(P＜0.05);肝脏脂肪变性程度有所改善;治疗组小鼠肝脏自噬相关基因Beclin-1与LC3B的表达水平显著升高(P＜0.05).结论 绞股蓝总皂苷能够显著改善2型糖尿病小鼠糖脂代谢水平,减轻肝脏脂质变性的程度,其发挥作用的机制可能与调节肝脏自噬基因Beclin-1及LC3B的表达有关.

目的 研究外源硒对绞股蓝品质的影响,为绞股蓝的栽培与开发利用提供理论基础.方法 调整不同的外源硒浓度,以恩施特种经济植物——绞股蓝为材料进行盆栽试验,对不同浓度硒和特定浓度重金属处理条件下绞股蓝中硒含量,铅、镉、汞、砷四种重金属含量,主要生物活性成分含量的变化规律进行研究.结果 随着硒处理浓度的升高绞股蓝硒含量呈先升高后降低的规律;不同浓度硒的处理对于绞股蓝吸收重金属铅、镉、汞、砷具有不同的效应,一定浓度硒的处理对于绞股蓝吸收重金属铅、镉、汞、砷均具有显著抑制作用;硒浓度的升高对绞股蓝总皂苷含量的影响体现为先抑制,后促进,再抑制的规律;硒浓度的升高对绞股蓝生长体现出低浓度促进生长,高浓度抑制生长的规律.结论 绞股蓝最佳施硒浓度为25mg/kg.

目的 观察不同剂量绞股蓝总皂苷(Gyp)对胶质母细胞瘤(GBM)细胞株U87细胞形态、迁移能力的影响,并探讨其机制.方法 取对数生长期U87细胞,分别加入10、5 mg/mL的Gyp溶液100 μL及等量PBS(分别计为A、B、C组),常规培养细胞.比较各组细胞形态、迁移能力及IL-6蛋白.结果 A组细胞生长慢、体积小、固缩现象非常明显,细胞贴壁现象接近消失;B组细胞生长缓慢,体积缩小,胞质固缩,部分细胞甚至破裂死亡,细胞贴壁现象减弱;C组细胞生长规则,轮廓清晰,形态饱满,胞体透亮,贴壁生长良好.A、B、C组细胞迁移覆盖区域占原有划痕区的54.8％、82.4％、98.6％,两两比较,P均＜0.05.A、B、C组穿膜细胞个数分别占19.8％、58.9％、100％,两两比较,P均＜0.05.A、B、C组IL-6蛋白水平分别为小量、中等量、多量,两两比较,P均＜0.05.结论 Gyp可抑制U87细胞生长及减弱细胞迁移能力,尤以10 mg/mL的Gyp效果更佳,机制可能与其可抑制IL-6蛋白表达有关.

基于“伴随标志物”紫外在线检测技术以绞股蓝总皂苷(GPS)为目标,优化绞股蓝中GPS的纯化工艺,采用UPLC-QTOF-MS技术对GPS进行定性.“伴随标志物”紫外在线检测研究表明,上样终点为流出液吸光度为原药液的1/2时,洗脱终点为洗脱流出液吸光度基本稳定.UPLC-QTOF-MS鉴定出GPS提取物中的16个皂苷,其中新皂苷3个.该研究优选出的纯化工艺简单、检测方便、易于在线测定、实时记录,能较好的运用到大生产或生产的自动化中.质谱定性鉴定结果表明,基于“伴随标志物”紫外在线检测技术能很好地保留药材中的主要药效成分,为过程控制和质量溯源提供了分析工具.