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胶质母细胞瘤的体外三维模型中氧浓度对细胞功能的调控作用
编辑人员丨1天前
缺氧是肿瘤微环境的典型特征,是影响细胞行为和肿瘤进展的最关键因素之一.然而,目前尚缺乏能够精确模拟体内脑肿瘤组织的模型,这阻碍了研究缺氧对肿瘤细胞进展和生长的影响.在一项研究中,通过将U87MG(U87)细胞包埋在含有I型胶原的水凝胶中,制造了三维(3D)脑肿瘤模型.
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编辑人员丨1天前
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长链非编码RNA叉头框蛋白D2相邻对链RNA1在胶质瘤细胞中的表达和功能
编辑人员丨1天前
目的 研究长链非编码RNA叉头框蛋白D2相邻对链RNA1(lncRNA FOXD2-AS1)对胶质瘤生物学行为的影响.方法 首先用qPCR实验检测FOXD2-AS1在U251、LN229、U87这3种胶质瘤细胞系中的表达情况,筛选出高表达的2种细胞系进行培养,再构建慢病毒载体转染2种细胞系敲低FOXD2-AS1作为实验组,将空载慢病毒颗粒转染的细胞作为阴性对照组,将常规培养未进行转染的细胞作为空白组,采用划痕实验、Transwell实验检测2种胶质瘤细胞系中各组细胞迁移及侵袭能力,将FOXD2-AS1敲低后进行转录组测序,进行差异基因取交集,并对共同差异基因进行富集分析.结果 qPCR实验显示FOXD2-AS1在LN229、U251这2种胶质瘤细胞系中明显高表达,与阴性对照组和空白组相比,被慢病毒载体转染敲低FOXD2-AS1时,2种胶质瘤细胞系中实验组细胞迁移及侵袭能力明显下降.生信数据库分析敲低FOXD2-AS1时发现2种胶质瘤细胞系共有48个相关差异性表达基因,进一步通过KEGG通路富集分析发现,2种胶质瘤细胞系中FOXD2-AS1敲低都与多种信号通路(细胞过程中的聚焦粘附、环境信息处理中的神经活性配体-受体相互作用、遗传信息处理中的剪接体、人类疾病中的癌症通路、新陈代谢中的代谢途径、有机系统中的补体和凝血级联反应)存在相关性.结论 LncRNA FOXD2-AS1在胶质瘤细胞迁移、侵袭中发挥作用,其可能的作用机制可还有待后续进一步研究.
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编辑人员丨1天前
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白藜芦醇对化疗后脑胶质瘤动物模型血液高凝的影响及作用机制
编辑人员丨1天前
目的 为探究白藜芦醇(Resveratrol,RSV)对化疗后脑胶质瘤动物模型血液高凝的影响及作用机制.方法 通过皮下注射U87细胞构建小鼠胶质瘤动物模型,将建模成功的小鼠随机分为3组(每组5只):对照组、替莫唑胺(temozolomide,TMZ)组和TMZ+RSV组.其中TMZ组和TMZ+RSV组使用TMZ灌胃,剂量为50mg/(kg·d).TMZ+RSV组小鼠用RSV灌胃,剂量10mg/(kg·d).分析RSV对肿瘤生长和血液高凝状态的影响.通过Western blot检测肿瘤和血管内皮组织中Wnt通路水平.结果 TMZ组肿瘤体积(144.56±15.24)mm3 和质量(114.11±13.07)mg,均显著低于对照组(P<0.05);TMZ+RSV组肿瘤体积(106.45±13.15)mm3和质量(90.23±10.38)mg,均显著低于TMZ组(P<0.05).对照组肿瘤组织中细胞凋亡率为(4.16±1.05)%,TMZ组凋亡率为(15.83±2.54)%,显著高于对照组(P<0.05);TMZ+RSV组凋亡率为(24.03±3.85)%,显著高于TMZ组(P<0.05).TMZ组全血黏度、PT、APTT和ET1显著高于对照组,NO低于对照组(P<0.05).TMZ+RSV组全血黏度、PT、APTT和ET1显著低于TMZ组,NO高于TMZ组(P<0.05).对照组和TMZ组肿瘤和血管内皮组织中Wnt2和β-catenin比较,差异不显著(P>0.05),TMZ+RSV组肿瘤组织和血管内皮组织中Wnt2和β-catenin显著低于对照组和TMZ组(P<0.05).结论 RSV可通过抑制肿瘤组织和血管内皮细胞中Wnt通路,促进肿瘤细胞凋亡和保护血管内皮功能,缓解高凝状态.
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编辑人员丨1天前
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沉默Wiskott-Aldrich综合征蛋白家族富含脯氨酸同源蛋白1基因表达抑制人U87-MG胶质瘤细胞的迁移与侵袭
编辑人员丨1天前
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编辑人员丨1天前
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1,4,5-三磷酸肌醇3激酶A调控脑胶质瘤细胞增殖、迁移和上皮间质化
编辑人员丨1天前
目的:探讨1,4,5-三磷酸肌醇3激酶A(ITPKA)在脑胶质瘤细胞的表达和功能。方法:利用实时定量聚合酶链反应(PCR)和蛋白质印迹法(Western blot)比较SVGP12、U118和U87细胞系(购自中国科学院生物化学与细胞生物学研究所)ITPKA mRNA和蛋白表达水平。将U87细胞分为对照组、对照短发卡RNA(shRNA)组和sh-ITPKA组,噻唑蓝法检测转染细胞培养24、48、72、96 h后细胞活性,平板克隆和小室迁移(Transwell)法检测克隆形成能力与细胞迁移能力,Western blot检测ITPKA、波形蛋白、N-钙黏蛋白和E-钙黏蛋白表达水平。多组间比较采用单因素方差分析或双因素方差分析。结果:U118和U87细胞中ITPKA mRNA和蛋白表达水平明显高于SVGP12细胞(mRNA水平:2.81±0.40、3.92±0.19比1.06±0.06, F=94.48, P<0.01;蛋白水平:0.57±0.05、0.66±0.03比0.20±0.01, F=161.30, P<0.01)。培养24、48、72、96 h后,sh-ITPKA组细胞活性明显低于对照组和对照shRNA组(24 h:0.14±0.01比0.19±0.01、0.20±0.02, P<0.01;48 h:0.20±0.01比0.30±0.01、0.30±0.02, P<0.01;72 h:0.26±0.01比0.37±0.01、0.38±0.01, P<0.01;96 h:0.29±0.01比0.45±0.01、0.45±0.01, F交互=17.22, F时间=713.00, F分组=662.60, P<0.01)。sh-ITPKA组细胞细胞迁移数目低于对照组和对照shRNA组(25.40±2.51比41.20±4.66、42.00±5.24, F=23.69, P<0.01)。同时,sh-ITPKA组细胞克隆形成数目明显低于对照组和对照shRNA组(120.60±11.41比215.00±18.73、221.40±14.83, F=68.15, P<0.01)。sh-ITPKA组细胞ITPKA、波形蛋白、N-钙粘蛋白表达水平低于对照组和对照shRNA组,而E-钙粘蛋白表达则高于对照组和对照shRNA组(ITPKA:0.11±0.02比0.70±0.02、0.68±0.03, F=637.00, P<0.01;波形蛋白:1.06±0.07比1.65±0.07、1.60±0.08, F=58.31, P<0.01;N-钙粘蛋白:0.88±0.04比1.15±0.07、1.20±0.03, F=31.56, P<0.01;E-钙粘蛋白:0.85±0.03比0.46±0.04、0.43±0.04, F=116.80, P<0.01)。 结论:ITPKA在胶质瘤细胞中表达升高,敲低ITPKA表达则抑制胶质瘤细胞恶性行为。
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编辑人员丨1天前
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miR-1254通过靶向CSF-1抑制胶质瘤细胞的增殖和侵袭能力
编辑人员丨1天前
目的:探讨miR-1254及其靶基因巨噬细胞集落剌激因子-1(CSF-1)在胶质瘤组织、胶质瘤细胞中的表达,以及miR-1254和CSF-1对胶质瘤细胞增殖和侵袭能力的影响。方法:收集2017年4月至2019年5月在湖北省十堰市太和医院接受手术治疗的30例胶质瘤患者的临床病理标本以及癌旁组织,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测胶质瘤组织、癌旁组织以及细胞株U87和人脑正常胶质细胞HEB中miR-1254和CSF-1 mRNA的表达水平。将胶质瘤U87细胞分为空白对照组、mimic NC组、miR-1254 mimic组以及siRNA NC组、CSF-1 siRNA组。采用qRT-PCR检测各组细胞miR-1254及CSF-1的mRNA表达水平;采用Western blotting检测各组细胞CSF-1的蛋白表达水平;采用双荧光素酶报告基因实验验证miR-1254和CSF-1基因的靶向关系;采用CCK-8法和Transwell侵袭实验检测细胞的增殖和侵袭能力。结果:胶质瘤组织中miR-1254 mRNA的相对表达量为0.44±0.16,癌旁组织为1.15±0.28,差异具有统计学意义( t=12.914, P<0.001);胶质瘤组织中CSF-1 mRNA的相对表达量为1.96±0.27,癌旁组织为0.98±0.22,差异具有统计学意义( t=14.970, P<0.001)。胶质瘤细胞U87中miR-1254 mRNA的相对表达量为0.39±0.11,人脑正常胶质细胞HEB中为1.03±0.02,差异具有统计学意义( t=10.113, P=0.008);胶质瘤细胞U87中CSF-1 mRNA相对表达量为1.02±0.03,人脑正常胶质细胞HEB为0.32±0.13,差异具有统计学意义( t=9.037, P=0.009)。转染miR-1254后,CSF-1 mRNA、蛋白的表达水平均随miR-1254表达水平的升高而降低。双荧光素酶报告基因实验结果显示,与mimic NC组(1.04±0.12)比较,miR-1254 mimic组(0.31±0.02)CSF-1-WT细胞中荧光活性显著降低( t=10.430, P<0.001)。转染48 h后,空白对照组(0.71±0.01)、mimic NC组(0.68±0.04)、miR-1254 mimic组(0.35±0.01)细胞增殖能力差异具有统计学意义( F=252.651, P<0.001);miR-1254 mimic组与空白对照组相比,差异具有统计学意义( P<0.001);miR-1254 mimic组与mimic NC组相比,差异具有统计学意义( P<0.001)。空白对照组(0.71±0.01)、siRNA NC组(0.68±0.04)、CSF-1 siRNA组(0.25±0.01)细胞增殖能力差异具有统计学意义( F=320.309, P<0.001);CSF-1 siRNA组与空白对照组相比,差异具有统计学意义( P<0.001);CSF-1 siRNA组与siRNA NC组相比,差异具有统计学意义( P<0.001)。侵袭实验结果显示空白对照组(365±27)、mimic NC组(388±24)、miR-1254 mimic组(83±15)细胞穿膜数差异具有统计学意义( F=173.915, P<0.001);空白对照组(365±27)、siRNA NC组(404±32)、CSF-1 siRNA组(87±14)细胞穿膜数差异具有统计学意义( F=141.294, P<0.001)。 结论:miR-1254在胶质瘤组织和胶质瘤细胞株U87中的表达均显著下降,CSF-1在胶质瘤组织和胶质瘤细胞株U87中的表达均显著升高。过表达miR-1254可能通过靶向降低CSF-1的表达来抑制胶质瘤U87细胞的增殖和侵袭能力。
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编辑人员丨1天前
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妊娠期糖尿病患者血清炎性因子、晚期氧化蛋白产物、同型半胱氨酸、血管细胞黏附分子1检测及临床意义
编辑人员丨1天前
目的:探讨妊娠期糖尿病患者炎性因子、晚期氧化蛋白产物(AOPP)、同型半胱氨酸(Hcy)、血管细胞黏附分子1(VCAM-1)表达及妊娠结局变化。方法:选择浙江省台州医院于2019年1月至2020年1月收治的妊娠期糖尿病103例作为观察组;另选择同期在该院分娩的正常妊娠87例作为对照组,均采用全自动生化分析仪检测空腹血糖(FPG)和空腹胰岛素(FINS);采用ELISA法测定肿瘤坏死因子α(TNF-α)、超敏C反应蛋白(hs-CRP)、白细胞介素6(IL-6)水平、AOPP和VCAM-1水平;采用循环酶法测定Hcy水平。结果:观察组FPG[(8.34±1.25)mmol/L]、FINS[(9.75±0.89)U/L],高于对照组[(4.89±0.67)mmol/L、(5.93±0.45)U/L]( t=23.088、36.297, P<0.05)。观察组血清TNF-α[(21.63±3.25)ng/L]、hs-CRP[(6.34±1.29)mg/L]、IL-6[(147.32±28.39)ng/L],均高于对照组[(8.72±1.84)ng/L、(2.17±0.73)mg/L、(87.96±12.41)ng/L]( t=32.861、26.744、18.091,均 P<0.05);观察组血清AOPP[(53.21±9.89)μg/L]、Hcy[(11.23±1.36)μmol/L]、VCAM-1[(94.27±15.46)μg/L],均高于对照组[(25.48±6.18)μg/L、(8.41±1.28)μmol/L和(62.18±6.52)μg/L]( t=22.674、14.627、18.047,均 P<0.05)。观察组不良妊娠结局发生率(29.13%)低于对照组(4.60%)(χ 2=19.313, P<0.05)。 结论:妊娠期糖尿病患者存在明显炎性反应,且血清AOPP、Hcy和VCAM-1水平明显升高,妊娠结局不良。
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编辑人员丨1天前
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SiRNA干扰BTN3A3对脑胶质瘤细胞凋亡作用的研究
编辑人员丨1天前
目的:探讨采用siRNA干扰嗜乳脂蛋白亚家族成员A3(BTN3A3)对脑胶质瘤细胞凋亡的影响。方法:实验采用胶质瘤细胞株(HS683、U251)以及原代胶质瘤细胞,均设立阴性对照组(NC组)以及转染不同序列siRNA的Si-1组(转染1序列)和Si-2组(转染2序列)。应用蛋白质免疫印迹方法分析不同胶质瘤细胞株、小胶质细胞株(HMC3)中BTN3A3的表达情况。通过转染siRNA敲减BTN3A3后,采用流术细胞术分析各细胞株中细胞凋亡的变化情况。分离培养手术切除的脑胶质瘤组织,获得原代胶质瘤细胞后,采用蛋白质免疫印迹方法分析原代细胞中BTN3A3的表达水平;通过转染siRNA敲减BTN3A3后,采用流式细胞术分析原代细胞的细胞凋亡变化情况。结果:BTN3A3在HS683(1.12±0.03)和U87-MG细胞(1.08±0.05)中的表达水平显著高于HMC3细胞(0.66±0.02)(均 P<0.01)。U251细胞Si-1组、Si-2组BTN3A3的表达水平分别为0.11±0.01、0.12±0.01,均低于NC组(0.21±0.01)(均 P<0.01);HS683细胞Si-1组、Si-2组BTN3A3的表达水平分别为0.77±0.03、0.78±0.04,均低于NC组(1.01±0.03)(均 P<0.01)。敲减BTN3A3后,与NC组相比,HS683细胞的早期凋亡比率(NC组:31.6%,Si-1组:53.7%,Si-2组:63.3%)、U251细胞的晚期凋亡比率(NC组:10.4%,Si-1组:18.9%,Si-2组:26.5%)升高。BTN3A3在原代胶质瘤细胞中的表达水平高于HMC3细胞(分别为0.75±0.07和0.55±0.06, P<0.05)。采用siRNA敲减后,原代胶质瘤细胞中BTN3A3的表达水平降低(NC组:0.90±0.01,Si-1组:0.44±0.01,Si-2组:0.49±0.02,Si-1组和Si-2组与NC组相比,均 P<0.01),晚期细胞凋亡比率升高(NC组:12.3%,Si-1组:22.6%,Si-2组:18.2%)。 结论:采用siRNA干扰BTN3A3可促进胶质瘤细胞株、原代胶质瘤细胞的凋亡。
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编辑人员丨1天前
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BCL11A调控波形蛋白影响胶质母细胞瘤增殖、迁移和侵袭的实验研究
编辑人员丨1天前
目的:探讨B细胞淋巴瘤/白血病11A(BCL11A)对胶质母细胞瘤(GBM)细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响,并分析其可能的机制。方法:通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)及蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测BCL11A在不同级别脑胶质瘤组织及不同GBM细胞株中的表达水平。在高表达BCL11A的GBM细胞株中感染shRNA慢病毒,构建稳定敲低BCL11A的GBM细胞株。设立阴性对照(NC)组(仅感染随机无关对照shRNA)和BCL11A敲低组(BCL11A-KD组)。通过qRT-PCR和Western blot实验检测敲低BCL11A的效果;通过CCK-8实验和克隆形成实验检测敲低BCL11A后GBM细胞的增殖能力;应用Transwell小室法检测敲低BCL11A后GBM细胞株的迁移和侵袭能力;采用Western blot实验检测敲低BCL11A后GBM细胞相关信号分子的表达情况。结果:与低级别胶质瘤[世界卫生组织(WHO)Ⅰ~Ⅱ级]和正常脑组织相比,BCL11A在高级别胶质瘤(WHO Ⅲ~Ⅳ级)中呈高表达(均 P<0.05)。BCL11A在原代胶质瘤细胞PT2及GBM细胞株U251和TG-905中的表达水平较高,而在A172、SF295和U87-MG中几乎不表达。qRT-PCR和Western blot检测结果显示,通过感染shRNA慢病毒,可成功构建稳定敲低BCL11A的U251和TG-905细胞株。CCK-8实验结果显示,U251和TG-905细胞NC组的吸光度值分别为1.72±0.05、1.87±0.05,高于BCL11A-KD组(分别为1.15±0.05、1.18±0.05)(均 P<0.001)。克隆形成实验结果显示,U251和TG-905细胞NC组的克隆数分别为(15.3±1.5)个和(9.0±1.0)个,高于BCL11A-KD组[分别为(8.8±1.0)个、(2.3±0.6)个](均 P<0.001)。Transwell小室实验结果显示,U251细胞NC组和BCL11A-KD组在迁移实验中进入上室底部的细胞数分别为(111.0±10.2)个和(55.3±5.5)个,侵袭实验中分别为(85.3±7.8)个和(35.0±4.6)个,两组差异均有统计学意义(均 P<0.01)。TG-905细胞NC组和BCL11A-KD组在迁移实验中进入上室底部的细胞数分别为(95.0±5.0)个和(66.7±7.0)个,侵袭实验中分别为(93.0±3.6)个和(46.7±7.4)个,两组差异均有统计学意义(均 P<0.01)。Western blot结果显示,U251和TG-905细胞敲低BCL11A的表达可显著下调波形蛋白的表达。 结论:BCL11A通过调控波形蛋白的表达影响GBM细胞的增殖、迁移和侵袭能力。BCL11A-波形蛋白调控通路或可为GBM分子靶向治疗提供依据。
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编辑人员丨1天前
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北京市2015—2019年肺炎衣原体感染患者临床特征分析
编辑人员丨1天前
目的:分析北京市肺炎衣原体感染患者的临床特征。方法:依托北京市呼吸道病原体监测系统,从全市35家不同类型的哨点医院招募急性呼吸道感染患者,采集临床标本并系统收集患者的流行病学资料、临床资料。对采集的临床标本,进行包括肺炎衣原体在内的30种(型)呼吸道病原体的核酸检测。将筛检出的肺炎衣原体感染患者分为上呼吸道感染患者和肺炎患者2组,采用独立样本 t检验、Mann-Whitney U检验、χ2检验或Fisher精确概率法比较2组患者临床表现、实验室检查、愈后转归等方面的差异。 结果:共纳入119例肺炎衣原体感染患者,其中上呼吸道感染患者12例、肺炎患者107例。81.5%(97/119)肺炎衣原体感染患者年龄介于5~44岁之间。临床主要症状为咳嗽92.4%(110/119)、发热88.8%(95/107)、咳痰76.5%(91/119)。39.3%(46/117)的肺炎衣原体感染患者白细胞计数升高,39.7%(46/116)的患者中性粒细胞百分数升高,36.9%(41/111)的患者血小板计数升高,24.5%(12/49)的患者出现肌酸激酶MB同工酶升高。影像学方面:90.6%(87/105)的肺炎衣原体肺炎患者表现为肺实质改变,病变部位常见于右肺下叶34.3%(36/105)和左肺下叶27.6%(29/105)。转归方面:73.8%(79/107)的肺炎患者住院治疗,病程天数 M( P25, P75)为18.0(13.5,22.0)d,住院治疗天数 M( P25, P75)为10.0(7.0,13.0)d,1例患者出现呼吸衰竭,6例患者出现心肌损伤,无患者接受重症监护室监护或机械通气治疗,无患者死亡。 结论:北京市2015―2019年肺炎衣原体感染患者总体症状较轻,主要症状为咳嗽、发热、咳痰,大多数肺炎衣原体肺炎患者需住院治疗,预后较好。
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编辑人员丨1天前
