目的 探讨藏药经典方肺热普清散对小鼠肝炎病毒A59(MHV-A59)感染小鼠模型的影响及其对炎症因子的作用.方法 以雄性昆明种小鼠为实验对象,利用MHV-A59滴鼻操作建立小鼠冠状病毒感染模型,设置对照组、模型组、阳性(利巴韦林)组和肺热普清散低、中、高剂量(25、50、100mg·kg-1)3组,每天ig给药1次,连续给药10d,考察记录造模期内小鼠体质量变化,处死后称体质量并计算小鼠肺脏指数和肝脏指数;使用Elisa试剂盒测定小鼠血清中炎症因子白细胞介素-1β(IL-1β)和白细胞介素-18(IL-18)含量;利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)方法检测小鼠肝脏中IL-1β、IL-18的mRNA表达水平和血清中MHV-A59病毒载量;通过苏木素-伊红(HE)染色,检测肺热普清散对肝脏和肺脏细胞坏死及炎症细胞浸润的影响.结果 与对照组比较,模型组的体质量增长缓慢(P＜0.01);肺热普清散3个剂量组的体质量每日递增,中、高剂量组在第5～8天均与模型组有显著差异(P＜0.01);各组小鼠肺脏指数组间无显著性差异,肺热普清散中剂量组肝脏指数与模型组有显著性差异(P＜0.05);模型组病毒感染后血清中炎症因子IL-1β和IL-18显著性升高(P＜0.001),与模型组比较,肺热普清散3个剂量组均可降低血清中IL-18水平(P＜0.001、0.01);模型组肝脏组织中IL-1β和IL-18的mRNA表达水平均显著升高(P＜0.001);与模型组比较,肺热普清散高剂量组肝脏中IL-1β转录水平显著降低(P＜0.01);与模型组比较,肺热普清散3组实验动物肝脏组织中IL-18水平未出现显著性变化;MHV载量测定结果显示,与模型组比较,利巴韦林组和肺热普清散高剂量组血清中MHV载量显著性降低(P＜0.01);病理切片结果显示,模型组肝脏细胞出现广泛坏死和变性,并出现炎症细胞浸润,气球样变等现象,肺热普清散高剂量和利巴韦林组出现点状病灶、炎症细胞浸润等明显减少现象;模型组肺组织肺泡明显间隔增厚,间质水肿,肺泡被压缩,有炎症细胞浸润,毛细血管扩张充血等现象,而肺热普清散中、高剂量组和阳性组肺组织肺泡间隔较窄,肺泡舒展,局部有炎性浸润和出血,肺泡腔内的分泌物明显减少.结论 肺热普清散对MHV-A59感染小鼠模型具有保护作用,其作用机制与抑制病毒复制和抑制感染后炎症因子有关.

目的 建立测定藏药肺热普清散中乌头碱含量的高效液相色谱法.方法 色谱柱为Phenomenex ODS柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为0.05 mol/L醋酸铵-乙腈(梯度洗脱),流速为1.0 mL/min,检测波长为235 nm,柱温为35℃,进样量为10μL.结果 乌头碱进样量在0.046～1.440μg范围内与峰面积线性关系良好(r=0.9996,n=6),检测限为1.2μg/mL;精密度、稳定性、重复性试验的RSD均小于2.0％(n=6),平均加样回收率为99.32％,RSD为0.41％(n=6).结论 所建立的方法稳定可靠,重复性好,可用于测定肺热普清散中乌头碱的含量.

目的 探讨电子加速器不同辐照剂量灭菌对肺热普清散质量的影响.方法 采用电子加速器,分别以0,4,6,8,10,12 kGy辐照剂量对样品进行辐照灭菌,比较样品性状、显微粉末特征,对去氢木香内酯、木香烃内酯进行薄层色谱鉴别,采用高效液相色谱法测定羟基红花黄色素A含量,参照2015年版《中国药典(四部)》通则检测细菌菌落总数、霉菌酵母菌菌落总数的变化.结果 与0 kGy比较,不同辐照剂量灭菌后的样品性状及粉末显微特征无明显变化;TLC图显相同颜色斑点,且阴性对照无干扰;羟基红花黄色素A含量无明显变化(P>0.05);细菌菌落总数、霉菌酵母菌菌落总数明显减少(P<0.05),当辐照剂量达8 kGy时,霉菌酵母菌及细菌菌落均未检出.结论 电子加速器辐照适用于藏药肺热普清散的灭菌.

目的 探讨藏药肺热普清散对斑马鱼炎症模型的作用及机制.方法 挑选受精后72 h斑马鱼随机移入24孔板中,分为对照组、模型组和肺热普清散低、中、高质量浓度(3、10、30mg·L-1)组,对照组与模型组不加药,肺热普清散与斑马鱼共孵育1h后,除对照组外,其余各组用20 μmol·L-1硫酸铜处理2 h制备炎症模型.在荧光显微镜下观察绿色荧光标记中性粒细胞的Tg(Lyz:EGFP)系斑马鱼体内炎症细胞迁移情况;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测野生型斑马鱼核因子κB2(NF-κB2)、白细胞介素(IL)-1b、肿瘤坏死因子(TNF)-α、IL-8mRNA水平;Western blotting实验检测野生型斑马鱼NF-κB、TNF-α蛋白表达水平;免疫荧光法检测各组鱼尾NF-κB表达.结果 对照组斑马鱼荧光细胞主要分布于头部和主动脉部,躯干部位主动脉以上荧光细胞稀少;模型组荧光细胞在各区域均增加,显示出炎症细胞向血管外迁移的明显趋势,躯干侧线以上荧光细胞计数较对照组显著增加(P＜0.001);肺热普清散10、30mg·L-1组躯干部荧光细胞计数与模型组比较显著降低(P＜0.01、0.001).与模型组比较,肺热普清散3、10、30mg·L-1组IL-1b、TNF-α、IL-8的mRNA水平显著下调(P＜0.05、0.01),10、30 mg·L-1组NF-κB2mRNA水平显著下调(P＜0.01);10、30mg·L-1组NF-κB、TNF-α蛋白表达水平显著降低(P＜0.01、0.001).免疫荧光结果显示,模型组躯干部位和鱼鳍NF-κB白色荧光点较对照组明显增加,经10 mg,L-1肺热普清散处理后的相同部位荧光点减少.结论 肺热普清散对硫酸铜诱导的斑马鱼炎症模型具有抗炎作用,机制与抑制NF-κB、TNF-α表达有关.