目的:探讨关节腔内注射脱落乳牙牙髓干细胞外泌体(SHED-EXO)对大鼠颞下颌关节骨关节炎(TMJ OA)软骨下骨稳态的影响.方法:36只雄性SD大鼠随机分为3组(n=12):对照组(CON组)、碘乙酸钠(MIA)诱导TMJ OA组(MIA组)和SHED-EXO治疗TMJ OA组(治疗组).治疗2、6周后取材,Micro-CT、荧光双标、TRAP染色、免疫组化染色和免疫荧光染色检测成骨与破骨情况,qRT-PCR检测ADAMTs5,IL-1β,OCN,OPG/RANKL等相关因子表达变化.结果:MIA组骨量丧失明显,骨髓腔明显扩大,相较于CON组,BV/TV和Tb.Th降低(P＜0.001),BS/BV、Tb.Sp和Tb.N升高(P＜0.01),且5 d内骨生成速率低于对照组(P＜0.001);SHED-EXO组与MIA组相比,骨形态与骨量显著增加,BV/TV和Tb.Th升高(P＜0.01),BS/BV、Tb.Sp和Tb.N降低(P＜0.05),骨生成速率增加(P＜0.01).2、6周后,MIA组较对照组与治疗组,下骨内破骨细胞数量均升高(P＜0.01),而H型血管与OCN阳性面积减少(P＜0.01).结论:关节腔注射SHED-EXO 可以通过促进成骨和抑制破骨调节TMJ OA大鼠髁突软骨下骨稳态.

目的:探讨人牙源性干细胞（DSC）的数据独立采集（DIA）蛋白质组学的建立方法。方法:2021年8月至2022年9月于苏州口腔医院收集牙齿，培养来自不同个体的牙髓干细胞（DPSC）、牙龈间充质干细胞（GMSC）、牙周膜干细胞（PDLSC）、根尖乳头干细胞（SCAP）和人脱落乳牙来源的干细胞（SHED），每种细胞各3个样本，共计15个样本进行DIA蛋白组学测序。通过唯一肽段分布和蛋白质覆盖分布、蛋白质质量分布评估蛋白质鉴定结果，通过组内变异系数（CV）、主成分分析及样本定量相关性等方面来评估DIA数据的质量。结果:从细胞中提取的蛋白质样本合格，总样本中共鉴定出8 662个蛋白质。蛋白质鉴定的基本统计表明所鉴定的蛋白质是可靠的。差异蛋白分析显示，DSPC组与其他各组（GMSC、PDLSC、SCAP和SHED）比较，上调和下调的蛋白分别为125、168、100、102和106、107、94、107个。差异蛋白的热图显示，同DPSC比较，GMSC、PDLSC、SCAP和SHED均有不同高表达的蛋白图谱。京都基因和基因组百科全书数据库（KEGG）分析表明不同DSC的蛋白质富集在不同的信号通路。结论:本研究成功建立了不同DSC的DIA蛋白质组学分析方法，为后续研究奠定了基础。

脱落乳牙牙髓干细胞(SHED)因增殖能力强、致癌风险低,具有较高的细胞分化能力和免疫抑制能力,成为组织工程和再生医学的主要关注领域.近年来,有关SHED在肝脏疾病中的疗效与安全性方面研究逐渐增多,本文集中对SHED在肝脏疾病中的应用与研究进展作一综述,以期为后续进一步临床推广提供参考.

迄今为止,已有多种牙源性间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)从具有外胚间充质来源的牙齿和牙周组织中分离出来,主要包括牙髓干细胞(dental pulp stem cells, DPSCs)、脱落乳牙干细胞(stem cells from human exfoliated deciduous teeth,SHED)、牙周膜干细胞(periodontal ligament stem cells,PDLSCs)、根尖乳头干细胞(stem cells from apical papilla,SCAP)、牙囊干细胞(dental follicle stem cells,DFSC)、唾液腺干细胞(salivary gland stem cells,SGSCs)等.

目的:通过间接共培养的方法初步探讨人脱落乳牙牙髓干细胞(stem cells from human exfoliated decidu-ous teeth,SHED)在体外对破骨前体细胞分化的影响.方法:建立SHED与破骨前体细胞(外周血单个核细胞,periph-eral blood mononuclear cells,PBMCs)的间接共培养模型,利用TRAP染色观察PBMCs向破骨细胞样细胞分化后的细胞数目与形态,利用qPCR技术和Western Blot技术检测破骨相关基因TRAP、CTSK、c-Fos、TRAF6的表达,以评估PBMCs向破骨细胞样细胞分化的情况.结果:与对照组相比,SHED与PBMCs间接共培养模型中,TRAP染色阳性、具有多个核的破骨细胞样细胞数量显著增多,破骨相关基因TRAP、CTSK、c-Fos、TRAF6在PBMCs中的表达水平显著上调.结论:SHED能够以细胞非接触的方式促进破骨前体细胞向破骨细胞样细胞分化.

目的 探讨中药丹参对人脱落乳牙牙髓干细胞(SHEDs)成骨/成牙分化功能的影响.方法 利用50mg/ml的丹参注射液作用于SHEDs细胞,利用成骨/成牙分化诱导培养基诱导SHEDs定向分化.通过检测ALP活性、茜素红染色、钙离子定量分析、成骨/成牙分化相关基因的表达研究 SHEDs 体外成骨/成牙分化能力.Western Blot检测AKT信号分子的表达.结果 50mg/ml的丹参注射液促进SHEDs细胞ALP活性,体外矿化能力及成骨/成牙分化相关基因骨涎蛋白(bone sialoprotein,BSP)、牙本质涎磷蛋白(Dentin sialophosphoprotein,DSPP)的表达.50mg/ml的丹参注射液促进磷酸化AKT的表达.结论 50mg/ml的丹参注射液具有促进SHEDs细胞体外成骨/成牙分化的潜能,其作用可能与激活AKT信号通路相关.

目的:探讨肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)对人脱落乳牙牙髓干细胞(stem cells from human exfoliated deciduous teeth,SHED)促破骨细胞形成能力的影响.方法:通过酶消化法体外分离、培养处于生理性根吸收时期的自然脱落乳牙牙髓干细胞;建立SHED与破骨前体细胞外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclearcells,PBMCs)的间接共培养模型,在破骨诱导培养液中加入0、5、10、50、100 ng/mL不同浓度的TNF-α,通过实时定量RT-PCR和Western免疫印迹检测破骨相关基因及核转录因子κB (nuclear factor-κB,NF-κB)信号通路相关基因的表达.采用SPSS 19.0软件包对数据进行统计学分析.结果:在10 ng/mL的TNF-α刺激下,PBMCs中破骨相关蛋白CTSK和TRAP的表达水平均显著增高.Western免疫印迹和实时定量RT-PCR检测结果显示,SHED胞质内p-IκBα和胞核内p65蛋白、基因的表达水平在10 ng/mL的TNF-α刺激下显著高于无TNF-α刺激组.结论:炎症细胞因子TNF-α通过NF-κB信号通路对SHED促破骨细胞形成能力具有调控作用.

目的:研究人脱落乳牙牙源髓干细胞(SHED)在体外长时期扩增,培养至20代后生物学特性的改变,探讨长时间扩增培养对SHED特性的影响.方法:从健康儿童脱落的乳牙中分离牙髓干细胞,在常规条件下扩增培养至第20代,比较第4代、第20代SHED,在细胞形态、增殖速率、多向分化、细胞凋亡等方面的差异.结果:与第4代相比,第20代细胞增殖速率减慢,成脂、成骨分化能力减弱,凋亡细胞增多,但仍能保持干细胞特有的免疫表型,高表达CD73、CD90、CD105,低表达CD34、CD11b、CD19、CD45和 HLA-DR.结论:随着体外扩增至20代,SHED虽能维持干细胞特有的免疫表型,但其生物学特性发生改变,已成为衰老细胞,不再适用于组织工程及干细胞治疗.

目的:探讨核转录因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)信号通路在人脱落乳牙牙髓干细胞(stem cells from human exfoliated deciduous teeth,SHED)促进破骨细胞形成中的作用.方法:通过酶消化法体外分离培养SHED;建立破骨前体细胞外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs)与SHED的间接共培养模型,在破骨诱导液中加入核转录因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)信号通路抑制剂BAY11-7082,通过实时定量PCR和West-ern Blot检测破骨相关基因及NF-κB信号通路相关因子表达的差异.结果:SHED共培养组的破骨相关基因CTSK、TRAP的表达水平较PBMCs单独培养组显著上调,而加入BAY11-7082刺激的SHED共培养组中破骨相关基因CTSK、TRAP和RANKL/OPG比值的表达水平显著低于SHED共培养组.结论:NF-κB信号通路通过调控RANK/RANKL/OPG受体配体系统介导SHED促进破骨细胞形成.

目的:评估iRoot BP Plus和ProRoot MTA作为盖髓剂对脱落乳牙牙髓干细胞(stem cells from human exfoliated deciduous teeth,SHED)和人牙髓干细胞(human dental pulp stem cells,DPSC)生物学行为的影响.方法:选择处于生理性牙根吸收期的乳牙和无龋的正畸减数前磨牙或第三磨牙,体外提取、分离和培养SHED和DPSC,制备iRoot BP Plus和ProRoot MTA标准膜片并提取浸提液,通过CCK-8法检测l、3、5、7d时iRoot BP Plus和MTA浸提液对SHED和DPSC增殖能力的影响;Transwell小室和划痕修复实验观察iRoot BP Plus和MTA浸提液对SHED和DPSC迁移能力的影响;SHED和DPSC分别接种于iRoot BP Plus和MTA样品表面进行培养,分别在1、3、5d使用鬼笔环肽(phalloidin)和DAPI(4',6-diamidino-2-phenylindole)进行免疫荧光染色,观察细胞骨架变化;SHED和DPSC分别在成骨诱导培养基、含MTA浸提液的成骨诱导培养基和含iRoot BP Plus浸提液的成骨诱导培养基中进行矿化诱导,7d和14d时进行碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)染色以及ALP定量分析,21 d时进行茜素红染色和半定量分析钙盐沉积量,采用SPSS 19.0软件包对数据进行统计学分析.结果:iRoot BP Plus和MTA均能促进SHED和DPSC的细胞增殖;细胞迁移与黏附实验中,iRoot BP Plus和MTA均能促进SHED和DPSC的迁移与黏附,其中,iRoot BP Plus的作用更显著(p=0.000);经矿化诱导后,iRoot BP Plus组的SHED和DPSC的ALP活性强于MTA组,茜素红染色和半定量分析钙盐沉积量结果显示,iRoot BP Plus和MTA均能促进细胞矿化,且iRoot BP Plus促进细胞矿化的能力显著强于MTA (P=0.000).结论:iRoot BP Plus和MTA均具有较好的生物相容性,均能促进SHED和DPSC的细胞增殖,能够促进细胞黏附、迁移,具有较好的成骨分化能力;且iRoot BP Plus促进SHED和DPSC黏附、迁移和成骨分化的能力相对MTA更好,iRoot BP Plus和MTA均可作为乳牙和年轻恒牙牙髓治疗的盖髓剂.