目的 分析不同地理种群腐食酪螨遗传多样性及遗传分化.方法 2018年6-7月在安徽省芜湖市(WH)、阜阳市(FY)和河北省石家庄市(SJZ)、张家口市(ZJK)4个地区的面粉厂和米厂采集螨虫标本并经形态学和细胞色素C氧化酶亚基1(cox1)分子鉴定筛选出腐食酪螨,PCR扩增腐食酪螨线粒体细胞色素b(Cytb)和核糖体DNA内转录间隔区(ITS)并测序.使用Chromas 2和DNAStar 1.00软件对基因序列进行校对和拼接,使用DnaSP 5.10.00软件计算各种群单倍型多样性(Hd)和核苷酸多态性(Pi),用MEGA 10.2软件包分析种群遗传变异和遗传分化指数(Fst)及基因流(Nm),用Arlequin3.1软件计算Tajima's D值和Fu's FS值并进行中性检验和分子方差分析,使用Network 10.2基于Median-joining法构建单倍型网络关系图,采用最大似然法(ML)对单倍型构建系统进化树.结果 腐食酪螨呈椭圆形,表皮柔软,乳白色或黄棕色,口器高度变异或退化;本研究获得的cox1与GenBank中腐食酪螨cox1(登录号:LC 190838.1)的序列一致性大于98％.腐食酪螨样本Cytb基因长度为372 bp,16个单倍型(H1～H16)中仅H4为共享单倍型(为来自WH和FY种群的9个个体共享),其余为独享单倍型.4个地理种群Hd较高,整体值为0.895(＞0.5),其中以WH种群最高(Hd=0.867),SJZ种群最低(Hd=0.464).基于Cytb序列分析显示腐食酪螨4个地理种群遗传多样性较高(Pi＞0.005);分子方差分析可见腐食酪螨4个地理种群Fst＞0.15(P＜0.05);中性检验结果显示,腐食酪螨Tajima's D值为-0.737 22,Fu's FS值为2.336 33(均P＞0.05).单倍型网络图与系统进化树结果一致,4个地理种群个体相互交织分布,仅ZJK种群个别个体聚为另外一支.ITS序列长度为1 259～1 405 bp,32个单倍型(G1～G2)均为独享单倍型.4个地理种群Hd较高,整体值与分别值为1.000(＞0.5).基于ITS序列分析显示腐食酪螨4个地理种群遗传多样性较高(Pi＞0.005),Fst＞0.25(P＜0.05);Tajima's D 值和 Fu's FS 值分别为 2.030 29 和 3.044 54(均P＞0.05).单倍型网络图与系统进化树结果一致,WH、FY、SJZ种群单倍型聚为一支,ZJK的单倍型单独聚为一支.结论 腐食酪螨4个地理种群遗传多样性较高,地理种群间存在较大遗传分化,FY种群可能有向WH种群扩张的历史,不同腐食酪螨地理种群间发生局部高水平基因交流,未发现明显地理分布格局.

目的 利用超高倍显微镜观察腐食酪螨成螨的外部形态特征. 方法 采集某面粉厂的面粉灰尘样品,分离孳生腐食酪螨成螨,制备玻片标本,超高倍显微镜下观察其形态特征. 结果 镜下见腐食酪螨成螨体躯由颚体和躯体两部分组成.螯肢由3节(基节和二部分端节)构成.足Ⅰ端部背面有感棒.基节上毛(ps)膨大且有刺状侧突.格式器(G)有2个分枝,一枝为杆状,另一枝外形不规则.雄性成螨肛门达躯体末端,周围着生有5对肛毛(a),3对肛后毛(pa).阳茎较短且弯曲呈“S”形.足末端呈柄状,前跗节较发达. 结论 超高倍显微镜下能清晰观察到腐食酪螨成螨外部形态特征,可为该螨的形态学鉴定提供实验依据.

目的 调查海南省文昌市境内地脚米粉螨的孳生程度.方法 采用直接镜检法分离地脚米样本中孳生的粉螨,将检出的螨制成玻片标本,置于光学显微镜下观察其形态并进行螨种鉴定和计数.结果 从采集的20份地脚米中共分离出12种粉螨(5 885只),分别隶属于4科10属.总体平均孳生密度为29.43只/g,其中热带无爪螨和腐食酪螨孳生率较高.结论 海南省文昌市地脚米中粉螨孳生密度较高,应采取控制措施.

目的 以核糖体第二核糖体内部转录间隔区 (ITS2) 作为分子标记, 对粉尘螨、屋尘螨、腐食酪螨和热带无爪螨进行系统发育树分析.方法 PCR扩增种常见储藏物螨种的ITS2基因并测序, 进行序列比对分析;从GenBank下载8条螨虫的ITS2序列, 用MEGA 2.1软件构建分子系统树, 进行系统进化分析.结果 分析4种螨的ITS2序列长度为316～487bp, 种内基因遗传距离为0.003 823～0.052 599, 种间遗传距离为0.187 440～0.534 699.以长食酪螨 (Tyrophagus longior) 为外类群构建系统发育树, 进行系统发育分析, 屋尘螨与粉尘螨亲缘关系较近, 腐食酪螨及热带无爪螨分别位于发育树的基部和中部, 系统发育树结果与根据形态分类对应.结论 依据ITS2基因片段序列及系统发育树可对常见螨种鉴定, ITS2基因片段可作为螨种鉴定的分子标记.

目的 调查农户储藏物中孳生粉螨的密度及种类.方法 采集安徽省临泉县农户家中的储藏粮食、调味品、食物、果蔬等储藏物样本,分离其中的孳生粉螨,制作成玻片标本并进行螨种的鉴定、分类.结果 从66种储藏物样本中共分离出粉螨21种,隶属于7科15属,其中以小米中粉螨的孳生密度最高(3 888.89只/g),茴香中粉螨的孳生密度最低(2.03只/g);以孳生腐食酪螨(Tyrophagus putrescentiae)及害嗜鳞螨(Lepidoglyphus destructor)的储藏物种类最多.粮食类粉螨平均孳生密度为383.94只/g,优势螨种为长食酪螨(Tyrophagus longior);调味品类粉螨平均孳生密度为149.53只/g,优势螨种为害嗜鳞螨和拱殖嗜渣螨(Chortoglyphus arcuatus);食物类粉螨平均孳生密度为85.15只/g,优势螨种为腐食酪螨、长食酪螨、阔食酪螨(Tyrophagus palmarum)、家食甜螨(Glycyphagus domesticus)和粉尘螨(Dermatophagoides farinae);果蔬类粉螨平均孳生密度为49.15只/g,优势螨种为罗宾根螨(Rhizoglyphus robini)和阔食酪螨;其他粉螨平均孳生密度为25.05只/g,优势螨种为腐食酪螨和害嗜鳞螨.结论 农户储藏物中孳生的粉螨物种丰富,应采取积极措施控制粉螨孳生以降低其危害.

目的 建立常见粉螨DNA条形码鉴定方法.方法 对2017年3-12月采自安徽省部分地区的面粉、中药材、饲料等储藏物中的粉螨进行形态学鉴定,获得相应种类线粒体细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ(COⅠ)基因序列作为标准片段.同时,通过美国国立生物技术信息中心检索已知粉螨CO Ⅰ基因序列,应用DNAStar和MEGA 6.0软件进行序列分析,使用Neighbor-Joining(NJ)法构建系统发育树.结果 经形态学鉴定出7种粉螨,分别为粗脚粉螨、椭圆食粉螨、腐食酪螨、害嗜鳞螨、拱殖嗜渣螨、棕脊足螨和粉尘螨.DNA条形码技术鉴定结果与形态学鉴定结果一致,种间遗传距离为0.058～0.323,种内遗传距离为0.000～0.015.NJ系统进化树中,粉螨聚类分析结果与形态学鉴定的物种分类地位一致.结论 DNA条形码可作为形态学鉴定方法的补充,对粉螨种类进行准确快速鉴定.

目的 了解合肥市市售食物粉螨污染情况. 方法 采集合肥市市售食品,采用直接镜检法镜检粉螨,并制作标本玻片,进行螨种鉴定. 结果 共采集36种市售食物及尘埃样品,37种样品全部检出粉螨,隶属6科13属共15种,即粗脚粉螨(Acarus siro)、腐食酪螨(Tyrophagus putrescentiae)、长食酪螨(Tyrophagus longior)、椭圆食粉螨(Aleuroglyphus ovatus)、伯氏嗜术螨(Calogophus berlesei)、纳氏皱皮螨(Suidasia nesbitti)、河野脂螨(Lardoglyphus konoi)、害嗜鳞螨(Lepidoglyphus destructor)、家食甜螨(Glycyphagus domesticus)、热带无爪螨(Blomia tropicalis)、甜果螨(Carpoglyphus lactis)、粉尘螨(Dermatophagoides arinae)、屋尘螨(Dermatophagoides pteronyssinus)、罗宾根螨(Rhizoglyphus robini)、速生薄口螨(Histiostoma eroniarum). 结论 合肥市市售食品中的粉螨污染严重,应采取适当预防措施,抑制市售食品粉螨的孳生.

目的 了解安徽省砀山县农户居家常备储粮粉螨孳生种类及种群多样性.方法 采集安徽省砀山县居家常见储粮共6种,采用直接镜检法分离孳生的粉螨,制作玻片标本对螨种进行鉴定并分类.结果 共采集600份样品,其中413份样品有粉螨孳生,阳性率为68.8％.共分离出9种粉螨,隶属4科7属.样品粉螨平均孳生密度达131.26％,腐食酪螨、粗脚粉螨均为常见螨种.结论 砀山家常储粮中粉螨孳生的密度高,应当采取适当预防措施,控制粉螨孳生以降低其危害.

目的 建立用于腐食酪螨过敏原特异性IgE抗体检测的纳米磁微粒化学发光法.方法 依据化学发光常规操作步骤,设置条件建立腐食酪螨过敏原特异性IgE检测的化学发光反应体系和合适的免疫反应条件,并以美国Phadia方法为标准,评估所建立化学发光方法的检验性能.应用SPSS 21.0软件对两种方法的阳性率χ2进行检验,以Phadia为标准,评价化学发光方法的检测性能.结果 化学发光反应体系中,发光底物A液中鲁米诺浓度为0.4 mg/ml、发光底物B液中过氧化氢脲浓度为0.2 mg/ml,此发光反应体系对辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase,HRP)的敏感性很髙,可检测到HRP的最小量为0.01 ng/ml,在免疫反应中,加入底物A液和B液后室温避光反应5 min检测,在5～30 min内检测数值均有效,37℃为最佳发光反应温度;选择0.35～100 IU/ml范围作为标准曲线;以Phadia方法为标准,本研究建立的化学发光法敏感度为80.95％、特异度为100％、漏诊率为19％,用于检查腐食酪螨有显著意义.结论 本研究成功建立纳米磁微粒化学发光法检测腐食酪螨过敏原特异性IgE抗体.