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基于HT-SELEX筛选的节球藻毒素-R适配体的鉴定
编辑人员丨2023/8/6
节球藻毒素-R(nodularin-R,NOD-R)是具有强烈肝毒性的蓝藻毒素.然而,现有的NOD-R检测技术均存在一定的局限性,亟待开发一种新的检测方法.本文利用指数富集的配基系统进化(systematic evolution of ligands by exponential enrichment,SELEX)技术结合高通量测序(HT-SELEX),筛选出NOD-R特异的高亲和力适配体.生物膜干涉(biolayer interferometry,BLI)技术对适配体的鉴定结果表明,适配体H62与NOD-R之间的亲和力最高,达到了168 nM.而且,该适配体不与其他毒素结合,具有较高的特异性.以上结果表明,适配体H62有望作为NOD-R检测新方法——适配体生物传感器的分子识别元件.
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编辑人员丨2023/8/6
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核酸适配体对岩沙海葵毒素细胞毒性的拮抗作用
编辑人员丨2023/8/5
目的 探究核酸适配体对岩沙海葵毒素(PLTX)细胞毒性的拮抗作用.方法 采用细胞毒性实验分别检测并比较PLTX对小鼠胚胎成纤维细胞株NIH-3T3、仓鼠卵巢细胞亚株CHO-K1 及人永生化角质形成细胞株HaCaT的毒性作用,以及核酸适配体13-S3对PLTX细胞毒性的拮抗作用(PLTX与适配体的浓度比例均为1∶1).采用红细胞溶血实验检测PLTX对绵羊红细胞的溶血作用,以及适配体对PLTX溶血活性的抑制作用.结果 细胞毒性实验结果显示,HaCaT细胞的IC50 为(1.24±0.93)nmol/L,CHO-K1细胞的IC50 为(3.95±0.78)×10－3 nmol/L,NIH-3T3细胞的IC50 为(5.18±1.92)×10－3 nmol/L.与PLTX对照组比较,各浓度(9.3×10－4、9.3×10－3、9.3×10－2、9.3×10－1、9.3、93.3 nmol/L)PLTX+适配体 13-S3 组的HaCaT细胞存活率均升高(P均＜0.05).在 12.5 nmol/L PLTX浓度下,与PLTX+适配体N7-T(节球藻毒素R的特异性适配体)组相比,PLTX+适配体 13-S3 组的溶血率下降更明显(P＜0.05),表明适配体 13-S3 能够特异性地抑制PLTX对绵羊红细胞的溶血活性.结论 HaCaT细胞存活率对PLTX浓度变化(9.3×10－4～93.3 nmol/L)具有较好的梯度响应,相应浓度的核酸适配体能够拮抗PLTX对HaCaT细胞的毒性作用.在 12.5 nmol/L PLTX浓度下,相应浓度适配体能够有效抑制PLTX对绵羊红细胞的溶血活性,具有细胞保护作用.
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编辑人员丨2023/8/5
