目的 用分子对接技术探讨苍耳亭在上皮间质转化(EMT)过程中的作用靶点,并通过Western Blotting实验检测其对肝癌HepG2细胞相应靶点蛋白表达的影响.方法 选取在EMT过程中的关键因子蓬乱蛋白(Dhs)、波形蛋白(Vimentin)、Snail、血管内皮生长因子受体3(VEGFR3)为作用靶点,采用分子对接虚拟技术评价苍耳亭与其空间结合能力,并与相应内源性物质烟酰胺腺嘌呤二核苷酸、醋酸离子、黄素腺嘌呤二核苷酸、N-乙酰葡糖胺对比;培养HepG2细胞,给予1、5、20 μmol/L浓度的苍耳亭,利用Western Blotting实验检测其对Dhs、Vimentin、Snail、VEGFR3蛋白表达的影响.结果 分子对接结果显示,苍耳亭与EMT过程中作用靶点均具有一定亲和力,其中与Dhs、Snail、VEGFR3的亲和力高于内源性物质,与Vimentin的亲和能力不及内源性物质;Western Blotting实验结果显示,苍耳亭显著下调Vimentin、Snail、VEGFR3蛋白的表达,显著上调E-cadherin蛋白表达(P＜0.05、0.01、0.001).结论 苍耳亭对肝癌侵袭转移关键因子E-cadherin、Vimentin、Snail、VEGFR3有明显影响,可能是其潜在靶点;分子虚拟对接和Western blotting实验结果具有一定的相似性,能预先提示潜在靶因子.

目的 探讨苍耳亭对过敏性皮炎的药效作用及其机制.方法 利用异硫氰酸荧光素(FITC)诱导Th2型变应性接触性皮炎(ACD)模型观察苍耳亭全程给药对小鼠的耳肿胀、耳组织病理学以及脾脏指数的影响,并运用ELISA法检测小鼠耳匀浆中的Th2型炎症因子IL-4、IL-5和IL-13水平.利用MTT法考察不同化合物浓度对于人永生化角质形成细胞(HaCaT)、单核巨噬细胞RAW264.7以及小鼠脾脏淋巴细胞的增殖毒性作用.ELISA法检测Poly(I:C)和TNF-α联合作用于上皮细胞产生胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP)的量以及脂多糖(LPS)诱导下RAW264.7产生TNF-α的含量.结果 苍耳亭40 mg/kg能显著抑制ACD小鼠耳肿胀,并可明显降低耳匀浆中Th2型细胞因子IL-4、IL-5水平,病理切片显示其可明显改善耳肿胀程度以及炎性细胞的浸润.体外实验中0.1μmol/L苍耳亭对上皮细胞产生的TSLP有显著抑制作用;1μmol/L的苍耳亭可以显著抑制RAW264.7产生TNF-α;苍耳亭对于脾淋巴细胞的增殖、对刀豆蛋白(ConA)以及脂多糖(LPS)诱导下T淋巴细胞和B淋巴细胞的活化增殖作用均未见明显影响.结论 苍耳亭对过敏性皮炎有明显的治疗作用,其机制可能通过抑制上皮细胞产生的TSLP以及巨噬细胞产生TNF-α发挥抗炎作用.

研究菊科植物苍耳Xanthium sibiricum的干燥成熟带总苞的果实(苍耳子)的化学成分.采用硅胶柱色谱,SephadexLH-20,ODS和HPLC等色谱方法进行分离纯化,并结合HR-ESI-MS与现代波谱学技术鉴定化合物结构.采用脂多糖(LPS)诱导的巨噬细胞RAW264.7为筛选模型评价分离得到化合物的抗炎活性.从苍耳子95％乙醇提取物的乙酸乙酯萃取物中分离得到了21个化合物,分别鉴定为尿嘧啶(1),胸腺嘧啶(2),尿苷(3),吲哚-3-甲醛(4),吲哚-3-甲酸(5),2'-O-methyluridine(6),鸟苷(7),2,4(1H,3H)-quinazolinedione(8),3-hydroxy-3-(2-hydroxyethyl) indolin-2-one (9),nicotinamide (10),N-acetyl-L-phenylalaninol(11),heliolactam (12),terresoxazine(13),告达亭(14),qingyangshengemn (15),告达亭-3-O-β-D-夹竹桃吡喃糖基-(1→4)-β-D-力Ⅱ拿大麻吡喃糖基-(1→4)-β-D-加拿大麻吡喃糖苷(16),告达亭-3-O-β-D-加拿大麻吡喃糖基-(1→4)-β-D-夹竹桃吡喃糖基-(1→4)-β-D-加拿大麻吡喃糖基-(1→4)-β-D-加拿大麻吡喃糖苷(17),caudatin-3-O-α-L-cymaropyranosyl-(1→4)-β-D-cymaropyranosyl-(1 →4)-β-D-cymaropyranosyl-(1→4)-α-L-cymaropyranosyl-(1 →4)-β-D-oleandropyranosyl-(1 →4)-β-D-cymaropy-ranoside (18),qinyangshengenin-3-O-β-D-oleandropyranosyl-(1→4)-β-D-oleandropyranosyl-(1→4)-β-D-cymaropyranoside (19),qin-yangshengenin-3-O-β-D-oleandropyranosyl-(1→4)-β-D-cymaropyranosyl-(1→4)-β-D-digitoxopyranoside (20),rostratarnine-3-O-β-D-deandropyranosyl-(1→4)-β-D-cymaropyranosyl-(1→4)-β-D-cymaropyranoside (21).化合物5～21为首次从苍耳属植物中分离得到.对分离得到的21个化合物进行抗炎活性筛选,其中,化合物12～13具有抗炎活性,其IC50分别为(15.45±0.56),(20.14±0.78) μmol·L-1.

综述苍耳草与苍耳子在化学成分、药理作用及毒理学等方面的异同点.苍耳草性微寒,味苦、辛,临床上主治慢性鼻炎、麻风、肠伤寒、皮肤癌、小儿腹泻等.苍耳子性温,味苦、甘、辛,临床上主治鼻渊、风寒头痛、湿疹、疥癣等,是治疗鼻渊的首选药.二者均含有脂肪酸、水溶性苷类、木脂素类、酚酸及其衍生物类化合物、倍半萜内酯、黄酮、蒽醌、生物碱等化学成分,但在一些化学成分的含量上存在差异.苍耳草中白桦脂酸、苍耳亭、石竹烯、伞花烃、紫云英苷等含量高于苍耳子,但α-蒎烯、α-松油醇、绿原酸、原儿茶醛(酸)和一些黄酮类化合物的含量却明显低于苍耳子.苍耳草与苍耳子均具有抑菌、抗肿瘤、抗炎镇痛及抗氧化等药理活性,苍耳草还具有兴奋、抑制、利尿及电解质平衡等作用,苍耳子则还在降压、抗过敏、免疫调节、镇咳及对调节血管系统等方面发挥作用.目前对苍耳草及苍耳子的毒理学研究主要集中在毒性物质和毒性机制两方面,以苍耳子的研究居多,苍耳草的毒理学研究报道较少.本文系统比较苍耳草与苍耳子近年来的研究现状,以期为今后苍耳的进一步开发利用提供科学依据.

[目的]观察祛风解表苍耳子中苍耳亭对肺癌大鼠的抑瘤作用及机制.[方法]将40只大鼠右腋下接种Lewis肺癌细胞构建肺癌荷瘤模型,随机分为模型组,苍耳亭低、中、高剂量组,每组10只.给药14 d后,比较各组大鼠瘤体质量和体积;苏木素-伊红(HE)染色观察肺癌组织病理学变化,末端脱氧核苷酸转移酶介导的d UTP缺口末端标记(TUNEL)法测定肺癌细胞凋亡情况,高效液相色谱法(HPLC)检测肺癌组织中三磷酸腺苷(ATP)、二磷酸腺苷(ADP)、一磷酸腺苷(AMP)含量,JC-1法检测肺癌组织线粒体膜电位(MMP)水平,蛋白质免疫印迹法检测肺癌组织中哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、磷酸化真核细胞翻译起始因子4E(eIF4E)结合蛋白1(p-4E-BP1)的蛋白表达.[结果]与模型组比较,苍耳亭低、中、高剂量组瘤体质量和体积均显著减小(P<0.05),肺癌细胞凋亡指数均增加(P<0.05),ATP含量均显著降低(P<0.05),ADP/ATP、AMP/ATP比值均显著升高(P<0.05),MMP水平均明显降低(P<0.05),肺癌组织中mTOR、p-4E-BP1蛋白表达水平均显著降低(P<0.05),且呈剂量依赖性.[结论]苍耳亭可通过降低癌细胞能量代谢,抑制癌细胞mTOR/4E-BP1信号通路的活化,抑制大鼠肺癌.

目的 探讨苍耳亭对白血病细胞的抗癌作用及其机制是否与调控长链非编码RNA(lncRNA)类赖氨酰氧化酶1反义RNA1(LOXL1-AS1)和微小RNA(miR)-520d-5p表达有关.方法 按转染细胞分组:对照组、苍耳亭6 μmol/L组、苍耳亭 20 pemol/L 组、苍耳亭 60 μmol/L 组、si-NC 组、si-LOXL1-AS1 组、苍耳亭+pcDNA-LOXL1-AS1 组;采用细胞计数试剂盒(CCK-8)法、流式细胞术检测细胞增殖和凋亡.实时定量PCR(RT-qPCR)检测LOXL1-AS1和miR-520d-5p表达;蛋白质印迹法检测B细胞淋巴瘤(Bcl)-2和Bcl相关x蛋白(Bax)蛋白表达.分别转染LOXL1-AS1小干扰RNA、LOXL1-AS1过表达载体至K-562细胞中,通过CCK-8法、流式细胞术、蛋白质印迹法分析干扰LOXL1-AS1表达或过表达LOXL1-AS1联合苍耳亭对K-562细胞增殖、凋亡以及Bcl-2、Bax蛋白表达的影响.双荧光素酶报告实验分析LOXL1-AS1和miR-520d-5p相互作用.结果 苍耳亭处理后K-562细胞增殖抑制率、凋亡率、Bax蛋白表达、miR-520d-5p表达显著升高(均P＜0.05),Bcl-2蛋白表达、LOXL1-AS1表达显著降低(均P＜0.05).干扰LOXL1-AS1表达后K-562细胞增殖抑制率、凋亡率、Bax蛋白表达、miR-520d-5p表达显著升高(均P＜0.05),Bcl-2蛋白表达显著降低(P＜0.05).过表达LOXL1-AS1明显减弱苍耳亭处理对K-562细胞细胞增殖、凋亡以及Bel-2和Bax蛋白表达的影响.LOXL1-AS1与miR-520d-5p直接结合.结论 苍耳亭可抑制白血病细胞增殖,诱导其凋亡,其机制可能与抑制LOXL1-AS1/miR-520d-5p 轴有关.

目的:探究苍耳亭对细胞外信号调节激酶(ERK)/c-Jun氨基末端激酶(JNK)信号通路的调控作用以及对溃疡性结肠炎(UC)大鼠肠道黏膜组织损伤的保护作用.方法:90只SD大鼠按随机数字表法分为正常组、模型组、阳性药物组、苍耳亭低剂量组、苍耳亭中剂量组、苍耳亭高剂量组,每组15只.除正常组外,其余各组运用5％2,4,6-三硝基甲苯磺酸(TNBS)建立大鼠UC模型,实验结束后记录各组大鼠排出的粪便性状、便血情况和体质量变化,进行疾病活动指数(DAI)评分;处死大鼠,取出完整结肠,进行结肠黏膜损伤指数(CMDI)评分,并进行HE染色,ELISA法检测结肠黏膜组织中IL-6、TNF-α、IL-10含量,免疫组化法检测结肠黏膜组织中Occludin、Claudin-1、Caspase-3表达情况,Western blotting法检测结肠黏膜组织中p-ERK、ERK、p-JNK、JNK蛋白表达情况.结果:与正常组比较,模型组大鼠结肠黏膜组织可见隐窝消失,大量炎症细胞浸润,黏膜下层也出现炎症现象;DAI、CMDI评分,IL-6、TNF-α含量,Caspase-3表达,以及p-ERK/ERK、p-JNK/JNK均明显升高(P<0.05),IL-10含量与Occludin、Claudin-1表达均明显降低(P<0.05).与模型组比较,阳性药物组与苍耳亭低、中、高剂量组结肠黏膜组织病变减轻,DAI、CMDI评分,IL-6、TNF-α含量,Caspase-3表达,以及p-ERK/ERK、p-JNK/JNK均明显降低(P<0.05),IL-10含量与Occludin、Claudin-1表达均明显升高(P<0.05).苍耳亭高剂量组上述指标与阳性药物组比较,差异无统计学意义(P>0.05).苍耳亭各剂量组间各指标比较,差异有统计学意义(P<0.05).结论:苍耳亭可能通过抑制ERK/JNK信号通路的表达,改善UC大鼠肠道黏膜组织损伤.

目的 筛选苍耳亭与MHCC97H共培养过程中差异miRNAs并进行验证,为寻找肝癌治疗靶点提供线索.方法 将苍耳亭与肝癌细胞MHCC97H共培养24 h,利用差速超离心法分离出外泌体.通过透射电镜观察外泌体的典型结构以及Western blotting分析外泌体标志性蛋白CD9和HSP70的表达来验证分离的是外泌体;检测苍耳亭与MHCC97H共培养后细胞外泌体的miRNA谱.筛选苍耳亭与MHCC97H细胞共培养和未共培养的MHCC97H细胞外泌体的差异miRNAs,通过GO和KEGG分析表征差异miRNAs的功能,分析差异miRNAs的潜在抗肿瘤意义.利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)对筛选的4种差异miRNAs进行验证.结果 共鉴定出78个差异miRNAs,其中36个上调miRNA,42个下调miRNA.差异基因主要与肿瘤代谢通路相关.qRT-PCR实验结果显示,细胞外泌体let-7f-5p、let-7b-5p、miR-192-5p和miR-197-3p表达上调,与miRNA测序结果一致.结论 苍耳亭可调节肿瘤细胞来源的外泌体miRNA,这些外泌体对抑制肝癌具有重要意义.