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仅具有CDR3的单域抗体NBL42作为纳米抗体亲和力转移的移植框架研究
编辑人员丨1周前
目的:评价前期获得的1株仅具有互补决定区3(CDR3)的单域抗体(sdAbs)NBL42作为纳米抗体亲和力移植通用框架的潜力。方法:采用亲和力转移的方法将分别结合蒜氨酸酶、程序性死亡受体-1(PD-1)、溶菌酶和CD47的4种抗体VHH-A4、VHH-H5、cAb-Lys3和B6H12的CDR3序列移植到NBL42对应的CDR3区。DNA合成获得4种仅具有CDR3的重组sdAbs,镍柱纯化并获得目的蛋白,间接ELISA法检测4种重组纳米抗体与抗原的结合及其热稳定性。用Swiss Model三维建模分析移植前后sdAbs的空间结构。结果:纯化后的4种重组蛋白在十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)中呈现单一条带,相对分子质量与预期相符。移植后的重组sdAbs NBL42-A4CDR3和NBL42-H5CDR3获得了与蒜氨酸酶和PD-1的特异结合能力,但结合活性降低了约50%,并转变为可溶性表达形式。移植后的重组sdAbs NBL42-L3CDR3和NBL42-B6H12CDR3完全丧失了对原抗原溶菌酶和CD47的结合能力。在热稳定性分析中,移植后的重组sdAbs NBL42-A4CDR3和NBL42-H5/CDR3保留了约50%的剩余结合活性。根据C88Y突变实验和Swiss Model三维建模分析,提示NBL42-FR3中88位半胱氨酸对于亲和力转移可能具有重要作用。结论:NBL42具有作为CDR3移植和亲和力转移框架的潜力。
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编辑人员丨1周前
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SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法同时测定不同产地大蒜药材中的蒜酶与凝集素
编辑人员丨2023/8/6
目的:建立SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳同时测定不同产地大蒜药材中蒜酶与凝集素相对含量和相对分子质量的方法.方法:通过考察溶媒方法、样品前处理方法、供试品溶液浓度等因素,确定SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定蒜酶与凝集素的最佳条件:以超纯水为溶媒,静置10 min为前处理方法,供试品溶液质量浓度为28 mg· mL-1;分别配制5%浓缩胶、12%分离胶,凝胶厚度为1 mm,浓缩胶电压为80V,分离胶电压为100 V,进行不连续体系垂直板电泳,借助Gel-pro Analyzer软件分析凝胶电泳图谱.以标准蛋白为marker,建立标准曲线,将蒜酶和凝集素的比移值代入标准曲线方程,计算蒜酶和凝集素的相对分子质量.结果:标准曲线方程为lgM=-1.369 1X+2.184 7,r=0.966 6.大蒜药材中蒜酶相对分子质量为52.1~54.0 kDa,凝集素相对分子质量为11.0~11.8 kDa.不同产地大蒜药材中蒜酶和凝集素总相对含量为18.1%~77.2%,其中蒜酶的相对含量为5.60%~27.1%,凝集素的相对含量为12.5%~68.2%.新疆巴里坤市大蒜样品中蒜酶的相对含量最高为27.1%,新疆阿克苏拜城县大蒜样品中凝集素的相对含量最高为68.2%.不同产地大蒜药材中蒜酶、凝集素的相对含量存在差异,凝集素相对含量普遍高于蒜酶相对含量.结论:与其他测定蛋白质含量的方法相比,本文建立的方法操作简便,样品用量少,能够准确测定大蒜药材中蒜酶及凝集素的相对分子质量与相对含量.不同产地大蒜中蒜酶与凝集素相对总合量均达50%以上,证明蒜酶和凝集素是大蒜中的主要蛋白质.大蒜中的蒜酶与蒜氨酸相对含量的相关性并不显著.
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编辑人员丨2023/8/6
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大蒜化学成分(组)对免疫抑制小鼠免疫功能的调节作用
编辑人员丨2023/8/6
目的 研究大蒜化学成分(组)对免疫抑制小鼠免疫功能的调节作用.方法 选用腹腔注射环磷酰胺(CTX)制造免疫抑制小鼠模型.以左旋咪唑(LMS)作为阳性药物对照.分别用3个剂量的蒜氨酸(60.0,17.5,5.0 mg·kg-1,以蒜氨酸计)+多糖 、大蒜多糖(164 mg·kg-1)和大蒜提取物(164 mg·kg-1,以大蒜多糖计)灌胃.给药30 d后测定小鼠血液中的白细胞总数 、碳廓清指数K、吞噬指数 α以及血清中IL-2、TNF-α和IFN-γ的水平.结果 大蒜各化学成分(组)能明显提高免疫抑制小鼠血液中的白细胞总数 、显著增强免疫抑制小鼠单核-巨噬细胞功能,促进细胞因子IL-2、TNF-α和IFN-γ 的分泌.结论 大蒜各化学成分具有免疫增强活性,有良好的开发应用潜力.
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编辑人员丨2023/8/6
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大蒜蒜氨酸指纹图谱研究
编辑人员丨2023/8/6
目的 建立大蒜蒜氨酸的HPLC指纹图谱.方法 采用HPLC柱前衍生化法建立大蒜蒜氨酸指纹图.结果 建立了大蒜蒜氨酸指纹图谱,确定了15个共有峰并指认了11个色谱峰,10批次大蒜蒜氨酸色谱图与典型指纹图谱的相似度大于0.95.结论 所建立的大蒜蒜氨酸指纹图谱符合提取物指纹图谱的技术要求,可用于大蒜蒜氨酸的生产过程控制及质量评价.
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编辑人员丨2023/8/6
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叶酸-蒜酶缀合物的合成及联合蒜氨酸原位抑制肿瘤细胞增殖作用
编辑人员丨2023/8/6
合成叶酸-蒜酶缀合物(FA-Alliinase),采用宫颈癌HeLa细胞考察其对肿瘤细胞的靶向性和抑制肿瘤生长活性.采用两种方法合成叶酸-蒜酶缀合物FA-AlliinaseⅠ和FA-AlliinaseⅡ,测得两种缀合物的偶联比分别为12和31,选择高偶联比的FA-AlliinaseⅡ,对其结构进行初步的表征.高效液相色谱法测得FA-AlliinaseⅡ有约50%的蒜酶活力;激光共聚焦及流式细胞仪观察到FA-AlliinaseⅡ对HeLa细胞具有一定的靶向性,MTT法测得FA-AlliinaseⅡ联合蒜氨酸后对HeLa细胞增殖有抑制作用,以蒜氨酸计IC50为(127.6±2.3)μmol/L.该研究为类前药叶酸-蒜酶缀合物的合成优化提供了较为直接的评价方法.
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编辑人员丨2023/8/6
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大蒜提取物抗白念珠菌作用机制研究进展
编辑人员丨2023/8/5
1 概述长期以来,中医以及其他国家的传统医疗就有将大蒜作为一种药物应用于疾病的预防与治疗.现如今中国、印度、美国、英国以及欧洲的药典中都收录了大蒜及其制剂.大蒜提取物主要是大蒜中的有效成分,随着医学研究的发展,大蒜提取物也被发现有多种药理作用,如抗肿瘤,抗细菌、真菌和原虫感染,以及对心脑血管疾病有较好疗效[1-4].大蒜提取物主要包括蒜氨酸(alliin)、蒜酶(alliinase)、大蒜辣素(allicin)、大蒜素(diallytrisulfide).其中蒜氨酸在蒜酶的催化裂合下产生大蒜辣素,而大蒜素是大蒜辣素的降解产物之一,研究发现大蒜中最重要的生物活性成分为大蒜辣素[5-6].
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编辑人员丨2023/8/5
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硫化氢介导大蒜提取物对变应性鼻炎大鼠的治疗作用
编辑人员丨2023/8/5
目的 研究大蒜提取物对变应性鼻炎(AR)模型大鼠的治疗作用.方法 用卵清蛋白(OVA)致敏,氢氧化铝为佐剂诱发建立AR大鼠模型.鼻炎康片作为阳性对照药物.将72只SD 大鼠随机分为空白组、模型组、阳性对照组及大蒜提取物低、中、高剂量组.除空白组外,其余5组大鼠均进行AR造模,造模成功后灌胃给药;阳性对照组给予鼻炎康片466 mg.kg-1;大蒜提取物低、中、高剂量组分别给予大蒜提取物(以蒜氨酸计)3.15,6.30,12.60 mg·kg-1;空白组及模型组给予等量生理盐水.隔日进行行为学评分.连续给药10 d后,检测大鼠血清免疫球蛋白E(IgE)、嗜酸性粒细胞阳离子蛋白(ECP)、白细胞介素-5(IL-5)、白细胞介素-13(IL-13)和一氧化氮(NO)水平,用超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)法测定大鼠血清、心、肝、脾、肺、肾和脑组织的硫化氢水平,并用苏木精-伊红(HE)染色观察鼻黏膜病理学组织.结果 大蒜提取物能明显改善AR大鼠鼻黏膜病变程度,减轻AR症状,降低血清中IgE、ECP、IL-5、IL-13和NO水平,大蒜提取物高剂量组肺、脑组织中硫化氢水平均明显高于空白组(P<0.05).结论 大蒜提取物对AR大鼠有明显的治疗作用,大蒜含硫化合物有望用于开发硫化氢供体药物以治疗AR.
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编辑人员丨2023/8/5
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蒜氨酸抗细菌感染机制初探
编辑人员丨2023/8/5
目的:以家兔脓肿模型,探讨蒜氨酸抗细菌感染机制.方法:将60只家兔脓肿模型,分为模型对照组、青霉素4×104 U/kg组、蒜氨酸0.5、1、5、10 mg/kg组,家兔静脉注射给予相应药物或生理盐水,连续7日.流式细胞术检测血液吞噬细胞吞噬率,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清IL-2、IL-7含量,试管法检测家兔血清抗金葡菌抗体效价,流式细胞术检测脓汁标本中活菌率和死菌率.结果:经过一周治疗,模型对照组只有3只家兔存活,脓肿仍然存在,治疗组家兔均完全康复.与模型对照组比较,蒜氨酸各治疗组,脓汁标本死菌率显著增高(P<0.01);脓汁标本活菌率显著降低(P<0.01).蒜氨酸各治疗组吞噬细胞吞噬率明显低于正常参考值,显著高于模型对照组(P<0.05),蒜氨酸治疗组血清IL-2、IL-7和抗金葡菌抗体均显著高于模型对照组和青霉素治疗组(P<0.01).结论:蒜氨酸进入体内杀菌效果能与青霉素媲美,同时蒜氨酸提高吞噬细胞吞噬功能、提高机体免疫防御机能,具有双重抗感染效应.
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编辑人员丨2023/8/5
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蒜氨酸抗菌机制研究
编辑人员丨2023/8/5
目的 检测蒜氨酸最低抑菌浓度(MIC)与最低杀菌浓度(MBC),探讨蒜氨酸体内外抗菌机制.方法 体外微量稀释法检测蒜氨酸MIC和MBC,荧光显微镜观察菌体表面蒜氨酸,探讨蒜氨酸抗菌机制.体内蒜氨酸和青霉素分别治疗金葡菌感染家兔脓肿,检测脓汁标本中细菌存活情况,探讨体内蒜氨酸抗菌作用.结果 蒜氨酸对大肠杆菌、伤寒杆菌、金黄色葡萄球菌、白色葡萄球菌的MIC分别为3.047μg·mL-1、6.094μg·mL-1、0.386μg·mL-1、0.386μg·mL-1,蒜氨酸体外无杀菌活性.浓汁标本:死菌率蒜氨酸治疗组显著高于阴性对照组(P<0.01),与青霉素治疗组无明显差异(P>0.05);活菌率蒜氨酸治疗组显著低于阴性对照组(P<0.01),与青霉素治疗组无明显差异(P>0.05).结论 蒜氨酸与菌体蛋白、细菌酶蛋白结合阻断细菌与环境物质交换,抑制细菌生命活动,具有较强的抑菌作用,无杀菌活性;蒜氨酸体内代谢成大蒜素,具有较强杀菌作用.
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编辑人员丨2023/8/5
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蒜氨酸抗体的制备与应用
编辑人员丨2023/8/5
为制备抗蒜氨酸抗体,探讨其应用价值,将蒜氨酸与卵清蛋白结合,加入弗氏佐剂,常规免疫家兔;用间接血凝试验、间接免疫荧光试验检测蒜氨酸抗体及其效价;利用蒜氨酸抗体和蒜氨酸荧光抗体探讨蒜氨酸在组织细胞的分布特点及蒜氨酸的抗菌作用和可能机制,探索蒜氨酸抗体的潜在应用价值.结果 显示,免疫家兔抗蒜氨酸抗体检测鉴定结果均为阳性,抗体效价达到1∶64;抗体能够准确反映蒜氨酸在组织细胞的分布特点,初步显示蒜氨酸的抑菌作用.蒜氨酸通过与异种蛋白偶联形成完全抗原,免疫家兔获得抗蒜氨酸抗体,并可将其应用于基础与临床研究.
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编辑人员丨2023/8/5
