目的:建立中药薯莨的质量控制方法,提高其质量可控性.方法:采用显微鉴别法对薯莨的粉末显微特征进行鉴别,薄层色谱法(TLC)对薯莨进行薄层色谱鉴别,高效液相色谱法(HPLC)测定薯莨中儿茶素和表儿茶素含量,参考2015年版《中国药典》四部通则测定10批薯莨的水分、总灰分、酸不溶性灰分和醇溶性浸出物含量.结果:薯莨粉末显微特征明显,具有草酸钙针晶、淀粉粒和石细胞等.薄层色谱鉴别显示薯莨中主斑点分离较好,斑点颜色及Rf值与对照药材一致.HPLC结果显示薯莨药材中的儿茶素和表儿茶素分离度好,线性范围分别是4.900 ～ 196.0,5.020～200.8 mg·L-1,相关系数r均为0.999 9.精密度、重复性和稳定性良好,平均加样回收率分别为99.67％和99.25％,RSD分别为1.5％和1.6％.不同批次薯莨中儿茶素和表儿茶素的含量范围分别为0.553 2～10.25 mg·g-1和0.646 1 ～11.06 mg·g-1.10批水分质量分数平均值为16.3％,总灰分质量分数平均值为3.97％,酸不溶性灰分平均值为1.41％,醇溶性浸出物平均质量分数为20.3％.结论:该方法简便、准确、可靠,可以为更有效的控制薯莨的质量提供参考依据.

目的:利用H2O2诱导的H9c2细胞氧化损伤模型,筛选薯莨抗氧化损伤的主要活性部位.方法:利用不同浓度的H2O2诱导H9c2细胞氧化损伤,选择最佳造模浓度;以不同浓度(100、200、400 mg/L)的薯莨提取物不同部位样品孵育H9c2细胞24 h后,再以H2O2进行氧化损伤模型处理,采用MST法检测H9c2细胞的存活率,以化学试剂盒的方法检测细胞培养上清液中乳酸脱氢酶(LDH)水平及细胞中活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)水平,评价薯莨提取物不同部位抗氧化损伤的作用,筛选其主要抗氧化活性有效部位.结果:H2O2浓度为600 μmol/L时可使H9c2细胞存活率下降至50％左右(P＜0.001),可用该浓度的H2O2建立氧化应激损伤模型.与模型组比较,薯莨总提物和水洗脱物能显著提高H2O2诱导下H9c2细胞存活率(P＜0.05～ P＜0.001),并能明显改善细胞形态;与模型组比较,薯莨水洗脱物高浓度组LDH泄漏量显著降低,薯莨水洗脱物各组细胞中ROS、MDA水平显著降低,SOD、CAT水平显著升高(P＜0.05～P＜0.001).结论:在本研究的浓度下,薯莨水洗脱物具有显著的抗H2O2致H9c2细胞氧化损伤作用,是薯莨抗H9c2细胞氧化损伤的主要活性部位.

目的 研究薯莨提取物是否影响食管癌细胞的生物学行为.方法 自2019年1月至2020年1月,采用(10、20和30 mg/L)浓度的薯莨提取物处理食管癌Eca109细胞,分别记为薯莨-L组、薯莨-M组、薯莨-H组,另以未加薯莨提取物的Eca109细胞作为对照组.细胞计数试剂盒8(CCK-8)测定细胞增殖,克隆形成实验分析细胞克隆能力,蛋白质印迹法检测周期素依赖激酶抑制剂p21(P21)、上皮钙黏素(E-cadherin)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)蛋白表达,Transwell分析细胞迁移、侵袭,实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测长链非编码RNA(lncRNA)KTN1反义RNA 1(KTN1-AS1)表达.在Eca109细胞中转染KTN1-AS1小干扰RNA(si-KTN1-AS1),或转染KTN1-AS1过表达质粒(pcDNA3.1-KTN1-AS1)并使用薯莨提取物处理,观察其对细胞增殖、迁移和侵袭的影响.结果 与对照组相比,薯莨-L组、薯莨-M组、薯莨-H组Eca109细胞的抑制率[(1.06±0.21)％比(19.25±1.68)％比(38.57±3.69)％比(62.14±6.06)％]、P21、E-cadherin蛋白水平明显提高,细胞的克隆形成数、迁移细胞数[(142.00±11.59)比(121.00±11.07)比(94.00±9.26)比(73.00±7.15)]、侵袭细胞数[(81.00±8.03)比(67.00±6.21)比(50.00±5.04)比(37.00±3.56)]、MMP-2蛋白表达量、KTN1-AS1表达量显著减少(P<0.05),均呈浓度依赖性.抑制KTN1-AS1明显增加Eca109细胞的抑制率[(1.04±0.17)％比(47.81±4.55)％]、E-cadherin、P21蛋白表达量,显著降低迁移细胞数[(144.00±13.52)比(85.00±8.51)]、侵袭细胞数[(80.00±8.11)比(47.00±4.36)]、克隆形成数和MMP-2蛋白水平(P<0.05).过表达KTN1-AS1能减弱薯莨提取物对食管癌细胞增殖、迁移、侵袭的抑制作用.结论 薯莨提取物通过下调食管癌细胞中KTN1-AS1的表达,发挥抑制细胞增殖、迁移和侵袭的作用.