目的 观察蛇床子催眠活性组分(SCZ)对失眠大鼠海马神经递质及钟基因表达的影响,探讨其催眠作用机制.方法 采用ip对氯苯丙氨酸(PCPA)建立大鼠失眠模型,ig给予低(25 g/kg)、中(50 g/kg)、高(100 g/kg)剂量SCZ,并设阳性对照(地西泮)组,给药3d,免疫组织化学法检测大鼠海马齿状回γ-氨基丁酸(GABA)和谷氨酸(Glu)受体蛋白的表达;高效液相色谱法和免疫组化法检测大鼠海马GABA和Glu含量的变化;实时荧光定量PCR检测大鼠海马Clock、Bmal1、Cry1、Cry2、Per1、Per2、Per3等生物钟基因的表达水平.结果 免疫组化结果显示,与对照组比较,模型组大鼠海马齿状回GABA表达水平显著降低,Glu表达水平显著升高(P＜0.05、0.01);与模型组比较,SCZ中、高剂量组大鼠海马齿状回GABA表达水平显著升高,Glu表达水平显著降低(P＜0.01).HPLC结果显示,与对照组比较,模型组大鼠海马GABA表达水平显著降低,Glu表达水平显著升高(P＜0.05、0.01);与模型组比较,SCZ中、高剂量组大鼠海马组织Glu表达水平显著降低(P＜0.05),SCZ高、低剂量组大鼠GABA表达水平显著升高(P＜0.01).生物钟基因表达水平检测结果显示,与对照组比较,模型组大鼠Clock、Bmal1基因表达水平显著升高(P＜0.05),Cry1、Per1、Per2基因表达水平显著降低(P＜0.05、0.01).与模型组比较,SCZ中剂量组大鼠Clock、Bmal1基因表达水平显著降低(P＜0.01);SCZ高剂量组大鼠Cry1、Per1、Per2基因表达水平显著增高(P＜0.05、0.01),SCZ低剂量组大鼠Per1基因表达水平显著增高(P＜0.01).结论 蛇床子催眠活性组分通过降低海马Clock、Bmal1表达,提高Cry1、Per1、Per2基因的表达水平,增加抑制性、减少兴奋性氨基酸类神经递质的表达,从而调节睡眠-觉醒周期,达到治疗失眠的效果.

目的 观察蛇床子催眠活性组分对焦虑大鼠行为干预效果,并检测脑干氨基酸类神经递质含量,探讨其抗焦虑的可能作用机制.方法 建立高架十字迷宫(EPM)实验大鼠焦虑模型,观察蛇床子催眠活性组分对焦虑大鼠行为的影响,酶联免疫吸附测定法(ELISA)测定大鼠脑干内γ-氨基丁酸(GABA)和谷氨酸(GLU)的含量.结果 与模型对照组比较,蛇床子催眠活性组分中、高剂量组及地西泮组大鼠进入开臂次数百分比及开臂滞留时间百分比增加(P<0.05);与空白对照组比较,模型组GABA水平显著降低(P<0.01),GLU水平、GLU/GABA值显著升高(P<0.01);与模型对照组比较,蛇床子催眠活性组分中、高剂量组及地西泮组GABA水平显著升高(P<0.05),GLU水平、GLU/GABA值显著降低(P<0.05).结论 蛇床子催眠活性组分有显著的抗焦虑作用,其作用机制与增加脑干GABA抑制性与降低GLU兴奋性氨基酸类神经递质,调节二者比例平衡有关.

目的:观察蛇床子催眠活性组分对体外培养原代海马神经元细胞神经递质及钟基因表达的影响,探讨其催眠作用机制.方法:体外培养SD乳鼠原代海马神经元细胞,CCK-8法检测细胞活性,绘制细胞生长曲线,在细胞生长状态最佳时,经神经元特异性烯醇化酶(NSE)免疫组化鉴定纯度并给药.将海马神经元细胞随机分为为空白对照组、地西泮(25μg/mL)阳性对照组及蛇床子催眠活性组分低(25μg/mL)、中(50μg/mL)、高(100μg/mL)浓度组共5组,给药24 h后流式细胞术分析海马神经元细胞早期凋亡,酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞上清液γ-氨基丁酸(GABA)、5-羟色胺(5-HT)、去甲肾上腺素(NA)等神经递质的含量,实时荧光定量PCR检测细胞内GABA、5-HT相关受体基因及钟基因Clock、Bmal1、Cry1、Per1、Per2 mRNA的表达.结果:体外原代培养第7天海马神经元细胞生长状态良好,鉴定纯度大于90％.与空白对照组比较,蛇床子催眠活性组分低、中浓度组海马神经元细胞凋亡率显著降低,中、高浓度组神经递质GABA、5-HT分泌及Gabra1、Gabra5、Gabbr1、5-HT1A(B)、5-HT1A(C)、5-HT1B、5-HT1D、Cry1、Per1、Per2 mRNA表达显著升高,蛇床子催眠活性组分高浓度组5-HT1A(A)mRNA表达显著升高,Bmal1 mRNA表达显著降低(P＜0.05或P＜0.01).结论:蛇床子催眠活性组分能降低体外培养的海马神经元细胞凋亡率,增强抑制性神经递质分泌与表达,并能调节钟基因.

目的:观察蛇床子催眠活性组分(CHC)对对氯苯丙氨酸(PCPA)失眠大鼠行为学、褪黑素(MT)合成限速酶芳基烷基胺N-乙酰基转移酶(AANAT)的影响,探讨其对松果体的保护机制.方法:60只SPF级雄性SD大鼠随机分为正常、模型,MT阳性药,CHC高、中、低剂量6组,每组10只.除正常组其余各组腹腔注射4.5％PCPA混悬液,10 mL· kg-1,连续2d,建立大鼠PCPA失眠模型.造模后正常及模型组灌胃等体积2％聚山梨酯-80,MT组(10 mg· kg-1),CHC高、中、低(60,30,15 mg·kg-1)给予10 mL·kg-1给药体积的药物,每日1次,连续7d.给药4d后分别进行旷场活动、高架十字迷宫、戊巴比妥钠协同睡眠试验,采用酶联免疫吸附法检测血清MT;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)测定松果体MT合成关键酶AANAT mRNA表达水平;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测松果体AANAT蛋白表达变化.结果:与正常组比较,模型组大鼠旷场活动总距离、站立次数、中心区持续时间明显增加(P＜0.05,P＜0.01),高架开臂次数及时间比例下降(P＜0.05),入睡潜伏期显著延长(P＜0.01);与模型组比较,低剂量组无明显差异,其余各组大鼠活动总距离均减少(P＜0.05,P＜0.01),高架开臂次数百分比升高(P＜0.05),入睡潜伏期缩短、睡眠时间明显延长(P＜0.05,P＜0.01).与正常组比较,模型组MT含量显著下降(P＜0.01);与模型组比较,低剂量组差异无明显统计学意义,其余各组血清MT不同程度的升高(P＜0.05).与正常组比较,模型组AANAT mRNA表达量,AANAT蛋白表达量下降(P＜0.01);与模型组比较,MT组,CHC高剂量组表达量明显增加(P＜0.05).结论:CHC改善PCPA失眠行为学指标、增加松果体细胞合成分泌MT,提高血清MT水平,与上调松果体AANAT mRNA及其蛋白的表达有关.

目的:观察蛇床子催眠活性组分(CHC)对PCPA致大鼠松果体细胞凋亡及其Bcl-2/Bax蛋白阳性表达的影响,探讨其改善松果体损伤的作用机制.方法:雄性SD大鼠随机分成空白对照组,模型对照组,MT阳性对照(10 mg/kg)组,蛇床子催眠活性成分高、中、低剂量(60、30、15 mg/kg)共6组,每组10只,除空白对照组外,其余各组大鼠每日腹腔注射PCPA 450 mg/kg,连续2 d,制备失眠大鼠松果体损伤模型,造模完成每日灌胃给药1次,连续7d.分别于造模及给药前后观察各组大鼠的精神状态、皮毛光泽度、体质量变化情况;观察给药后HE染色松果体组织病理变化,原位末端凋亡(TUNEL)计数松果体组织凋亡细胞数得出凋亡指数(AI)、流式细胞术分析松果体细胞早期凋亡率,免疫组化法半定量分析凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax表达.结果:松果体病理组织镜下观察可见模型对照组细胞数目明显减少,排列紊乱,核固缩,空泡变性增多,CHC低剂量组与模型组无明显差异,其余各给药组大鼠松果体细胞排列紊乱均有一定程度改善、空泡变性减少;松果体组织TUNEL的AI指数模型对照组显著高于空白对照组(P<0.01),MT、CHC高、中剂量组显著低于模型对照组(P<0.01).松果体细胞早期凋亡率模型对照组显著高于空白对照组(P<0.05),CHC高剂量组显著低于模型对照组(P<0.05);Bcl-2模型对照组显著低于空白对照组(P<0.05),MT阳性对照组、CHC高、中剂量组显著高于模型对照组(P<0.01,P<0.05);Bax模型对照组显著高于空白对照组(P<0.01),MT阳性对照组、CHC高、中剂量组著低于模型对照组(P<0.05,P<0.01).结论:CHC改善PCPA致失眠大鼠松果体组织结构损伤,减少松果体凋亡,其作用机制与降低诱导凋亡蛋白Bax、增加抑制凋亡蛋白Bcl-2表达、上调Bcl-2/Bax有关.

目的:观察蛇床子催眠活性组分对PCPA松果体损伤大鼠结构、功能的保护作用及生物钟基因表达的影响,探讨蛇床子催眠活性组分催眠作用机制.方法:采用腹腔注射PCPA 450 mg/kg连续2 d,建立大鼠松果体损伤模型,灌胃蛇床子催眠活性组分高、低剂量(60、30 mg/kg)并设褪黑素(10 mg/kg)阳性对照组,检测血清褪黑素、松果体组织病理学和超微结构及松果体中钟基因Clock、Bmal1、Per1、Per2、Per3、Cry 1、Cry2表达.结果:与正常对照组比较,模型组入睡潜伏期显著延长,血清褪黑素水平及松果体Bmal1、Per1 mRNA表达显著降低,Per3 mRNA表达显著升高(P＜0.05).与模型组比较,蛇床子催眠活性组分高剂量组入睡潜伏期显著缩短,睡眠持续时间显著延长,血清褪黑素水平显著升高;蛇床子催眠活性组分高剂量组松果体Clock、Bmal1、Cry1、Cry2 mRNA表达显著升高,Per3 mRNA显著降低,蛇床子催眠活性组分低剂量组Clock、Bmal1、Per1、Per2、Per3、Cry1、Cry2 mRNA表达显著降低(P＜0.05或P＜0.01).组织病理学检查结果显示模型组松果体细胞排列紊乱,核固缩,空泡变性明显增多,数目明显减少,蛇床子催眠活性组分高剂量组细胞排列紊乱,核固缩,空泡变性增多,数目减少;松果体超微结构观察显示模型组线粒体多肿胀、嵴断裂、固缩,蛇床子催眠活性组分高剂量组线粒体肿胀、嵴断裂、固缩较模型组减少.结论:蛇床子催眠活性组分对松果体细胞损伤有保护作用,并能调节松果体钟基因表达.