目的 探讨生姜提取物6-姜酚对实验性口腔溃疡大鼠黏膜愈合的促进作用,及其对蛋白激酶B(PKB)/驱动蛋白家族成员14(KIF14)信号通路的调节作用.方法 将50只大鼠随机分为正常组、模型组、6-姜酚组、信号通路抑制剂(LY294002)组和LY294002联合6-姜酚组,每组10只,除正常组外,其余组大鼠用冰醋酸烧灼法建立口腔溃疡模型,6-姜酚组大鼠尾静脉注射6-姜酚6mg·kg-1,LY294002 组大鼠尾静脉注射 LY294002 0.3 mg·kg-1,LY294002 联合 6-姜酚组大鼠尾静脉注射 LY294002 0.3mg·kg-1,30min后,尾静脉注射6-姜酚6mg·kg-1;每日1次,连续7d.计算溃疡面积,HE染色观察病理学变化,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测白细胞介素-6(interleukin 6,IL-6)、白细胞介素-1β(interleukin 1β,IL-1β)和肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor α,TNF-α)水平,实时荧光定量聚合酶链反应(quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR)检测基质金属蛋白酶2(matrix metal-loproteinase 2,MMP-2)和基质金属蛋白酶9(matrix metalloproteinase 9,MMP-9)水平,蛋白印迹法(Western blotting)检测磷脂酰肌醇3激酶(phosphatidylinositol 3 kinase,PI3K)、PKB和KIF14蛋白的相对表达量.结果 模型组大量炎性细胞浸润,黏膜上皮细胞坏死脱落,无新生成纤维细胞;6-姜酚组黏膜上皮覆盖,溃疡趋于愈合;LY294002组大量炎性细胞浸润,上皮结构被破坏,黏膜上皮细胞脱落坏死;LY294002联合6-姜酚组炎性细胞浸润减少,病变较6-姜酚组减轻.与模型组比较,6-姜酚组大鼠溃疡面积减小,IL-6、TNF-α、IL-1β水平及MMP-2、MMP-9 mRNA的相对表达量降低,p-PI3K、p-PKB以及KIF14的相对表达量升高;LY294002组溃疡面积增加,IL-6、TNF-α、IL-1β水平以及MMP-2、MMP-9 mRNA的相对表达量升高,p-PI3K、p-PKB及KIF14的相对表达量降低(P＜0.05);与LY294002联合6-姜酚组比较,6-姜酚组大鼠溃疡面积减小,IL-6、TNF-α、IL-1β水平及MMP-2、MMP-9 mRNA的相对表达量降低,p-PI3K、p-PKB及KIF14的相对表达量升高;LY294002组溃疡面积增加,IL-6、TNF-α、IL-1β水平及MMP-2、MMP-9mRNA相对表达量升高,p-PI3K、p-PKB及KIF14的相对表达量降低(P＜0.05).结论 生姜提取物6-姜酚可促进口腔溃疡大鼠创面愈合,其可能是通过激活蛋白激酶B/驱动蛋白家族成员14信号通路发挥作用的.

目的:研究小分子药物Tideglusib对大鼠创面愈合的影响及其机制。方法:选择40只健康雄性2月龄SD大鼠，采用随机数字表法随机分为对照组和Tideglusib组，每组20只，在其背部制作直径8 mm的圆形全层皮肤缺损创面，伤后即刻起，对照组创面滴加50 μL磷酸盐缓冲溶液(PBS)，Tideglusib组创面滴加50 μL 40 μmol/L的Tideglusib，1次/d。(1)每组按照随机数字表法选定8只大鼠，分别于伤后3、7、10 d观察创面愈合情况，并计算、比较创面愈合率。(2)每组从未进行创面观察的12只大鼠中选定6只，分别于伤后3、7、10 d取创缘组织，通过苏木精-伊红染色观察创面愈合过程中再上皮化情况、新生毛细血管情况、新生表皮厚度，Masson染色观察真皮胶原纤维排列情况，免疫组织化学染色检测驱动蛋白家族成员14(KIF14)表达水平和分布。(3)将每组剩余的6只大鼠在伤后3 d取创缘组织，经蛋白质印迹法检测蛋白激酶(PKB)、磷酸化蛋白激酶B(p-PKB)、KIF14表达水平变化。对数据行独立样本t检验。结果:(1)相较于对照组，Tideglusib组在各时相点创面明显缩小，创面渗出物更少，炎症反应更轻，肉芽组织质量更好，新生表皮延伸更多；伤后3 d，Tideglusib组创面愈合率为(12.42±3.48)%，对照组创面愈合率为(8.35±1.73)%，2组比较差异无统计学意义(t＝1.48, P＝0.56)；伤后7、10 d，Tideglusib组创面愈合率分别为(33.69±2.18)%、(73.69±3.23)%，与对照组[(21.44±2.11)%、(56.12±3.65)%]，比较，差异均有统计学意义(t＝5.71、5.08, P＝0.01、0.02)。(2)相较于对照组，Tideglusib组在各时相点创面新生表皮层次更多，同真皮连接更加完善，钉突数量更多，且厚度均厚于对照组；伤后3、7、10 d，Tideglusib组新生表皮厚度分别为(15.86±1.78)、(40.42±4.07)、(60.39±7.68) μm，厚于对照组[(6.07±1.12)、(22.25±3.24)、(36.36±6.46) μm]，2组比较差异均有统计学意义(t＝6.58、4.94、5.36，P＝0.003、0.008、<0.05)。相较于对照组，Tideglusib组在各时相点真皮形态更接近于正常大鼠皮肤，胶原更加粗大，排列更加有序，胶原纤维含量更高；伤后3、7、10 d，Tideglusib组真皮胶原纤维含量分别为(16.33±2.35)%、(37.61±3.88)%、(49.72±1.98)%，高于对照组[(7.53±2.99)%、(16.97±3.55)%、(27.06±3.81)%]，2组比较差异均有统计学意义(t＝3.27、5.55、7.47, P＝0.03、0.01、<0.05)。伤后3 d，对照组和Tideglusib组KIF14均主要表达在创缘的表皮和毛囊处；伤后7、10 d，Tideglusib组可在表皮层观察到大量棕黄色KIF14阳性表达，真皮层内也可见棕黄色颗粒分布，而对照组棕黄色颗粒分布稀疏且仅局限于表皮层；伤后3 d，Tideglusib组KIF14免疫组织化学染色平均吸光度值同对照组比较，差异无统计学意义(t＝0.994, P＝0.344)；伤后7、10 d，Tideglusib组KIF14平均吸光度值高于对照组，差异均有统计学意义(t＝3.440、2.826, P＝0.006、0.018)。(3)伤后3 d，Tideglusib组PKB蛋白相对表达量相较于对照组，差异无统计学意义(P>0.05)，p-PKB、KIF14蛋白相对表达量相较于对照组，差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:小分子药物Tideglusib可加速SD大鼠创面愈合，其机制可能与上调PI3K/PKB/KIF14信号通路有关。

目的:研究小分子药物Tideglusib对表皮干细胞增殖能力和细胞周期的影响及其机制。方法:将人表皮干细胞采用随机数字表法随机分为对照组，小分子药物Tideglusib 50 nmol/L、100 nmol/L、200 nmol/L组，培养48 h后，通过细胞计数试剂盒8(CCK-8)实验检测细胞增殖能力变化(n＝6)。通过RNA测序检测转录组水平变化，以P.adj <0.05为差异表达基因筛选标准，分析差异表达基因，并通过基因本体论(GO)富集分析差异表达基因对表皮干细胞生物过程、细胞组成、分子功能的影响(n＝3)。通过实时定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)验证差异表达基因驱动蛋白家族成员14(KIF14)的转录水平变化，通过蛋白质印迹法和免疫荧光染色验证KIF14蛋白表达水平的变化(n＝3)。通过蛋白质印迹法探究蛋白激酶B(PKB)、磷酸化蛋白激酶B(p-PKB)表达水平的变化(n＝3)。数据比较采用独立样本t检验，单因素方差分析和Tukey-post-hoc检验。结果:培养48 h后，CCK-8实验结果表明，同对照组相比，50 nmol/L组的小分子药物Tideglusib对表皮干细胞增殖能力的影响，差异无统计学意义(P>0.05)，100 nmol/L组和200 nmol/L组的小分子药物Tideglusib可明显促进表皮干细胞的增殖(P<0.05)。测序数据显示，同对照组相比，小分子药物Tideglusib 200 nmol/L组共有107个差异表达基因，其中106个表达上调，1个表达下调。GO富集分析表明，差异表达基因主要同有丝分裂与细胞周期相关。通过流式细胞仪检测发现，小分子药物Tideglusib可呈浓度依赖性地提升表皮干细胞进入有丝分裂期的比例，50 nmol/L组的小分子药物Tideglusib对表皮干细胞的细胞周期的影响无统计学差异(P>0.05)，100 nmol/L和200 nmol/L的小分子药物Tideglusib可明显提高表皮干细胞处于有丝分裂期的比例，差异有统计学意义(P<0.05)。通过qRT-PCR验证细胞周期相关差异表达基因KIF14发现，小分子药物Tideglusib对KIF14转录的促进作用呈浓度依赖性，50 nmol/L组的Tideglusib即可促进KIF14的转录(P<0.05)。蛋白质印迹法检测证明，小分子药物Tideglusib对KIF14蛋白表达水平的影响呈浓度依赖性，50 nmol/L组的小分子药物Tideglusib即可提高KIF14的蛋白表达水平(P<0.05)。免疫荧光染色表明，小分子药物Tideglusib对KIF14相对荧光强度的影响呈浓度依赖性，50 nmol/L组的Tideglusib对KIF14相对荧光强度的影响无统计学差异(P>0.05)，100 nmol/L组和200 nmol/L组的小分子药物Tideglusib可明显提高表皮干细胞KIF14的相对荧光强度(P<0.05)。通过蛋白质印迹法检测KIF14上游蛋白PKB与p-PKB表达水平发现，不同浓度的小分子药物Tideglusib对表皮干细胞PKB的总蛋白水平不产生影响，差异无统计学意义(P>0.05)，50 nmol/L组的小分子药物Tideglusib对表皮干细胞p-PKB表达的影响差异无统计学意义(P>0.05)，100 nmol/L组和200 nmol/L组的小分子药物Tideglusib可明显提高表皮干细胞p-PKB的表达。结论:小分子药物Tideglusib可提升有丝分裂期细胞比例，促进表皮干细胞的增殖，其机制可能与通过上调PI3K/PKB/KIF14信号通路调控表皮干细胞的细胞周期有关。