在全面阐述胰腺癌中医病因病机及中药单体概念的基础上,总结了大黄素、大黄酸、穿心莲内酯、雷公藤甲素、蝙蝠葛酚性碱等中药单体在胰腺癌肿瘤抑制中的作用,认为其作用是发挥具体机制,包括干扰胰腺癌细胞及干细胞中多个异常信号通路、靶基因等,这能为中药治疗胰腺癌的临床应用及研究提供参考.

胰腺癌是最具破坏性的恶性肿瘤之一,其发病机制复杂,与遗传易感性、慢性胰腺炎、信号通路基因突变等因素密切相关.磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)信号通路是经典的癌症信号通路,在胰腺癌细胞中被异常激活.近年来研究发现,中药单体在胰腺癌治疗中表现出特殊活性,是治疗胰腺癌的潜在药物.本文基于PI3K/Akt信号通路总结中药单体干预胰腺癌的作用机制发现,生物碱类(如青藤碱、白鲜碱、蝙蝠葛碱等)、萜类(如柴胡皂苷A、乌药内酯、异土木香内酯等)、酚类(如6-姜酮酚、姜黄素、紫檀芪等)、黄酮类(如非瑟酮、山柰酚、槲皮素等)、醌酮类(β-羟基异戊酰紫草素、大黄酸、赤芝酮等)中药单体,可通过抑制PI3K/Akt信号通路,抑制胰腺癌细胞增殖、侵袭、迁移,调节自噬和凋亡,进而抑制胰腺癌的病理进程.

目的 探讨蝙蝠葛酚性碱(PAMD)灌胃对大鼠脑缺血再灌注损伤的预防作用及其机制.方法 将36只大鼠随机分为假手术组、模型组、PAMD组,每组12只.PAMD组先每日给予50 mg/kg的PAMD灌胃1周,假手术组和模型组给予等体积生理盐水灌胃.PAMD组和模型组采用大脑中动脉线栓法制作局灶性脑缺血模型,持续栓塞2 h后再灌注4 h.假手术组不栓塞大脑中动脉.各组均采用Zea Longa 6级评分法行神经功能损伤评分;取各组再灌注侧脑组织行2,3,5-氯化三苯基四氢唑(TTC)染色观察脑梗死情况并测算脑梗死体积.采用Western blotting法检测各组再灌注脑皮层组织中的N-甲基-D-门冬氨酸受体调节亚基NR2B和磷酸化的NR2B(p-NR2B).结果 PAMD组、模型组、假手术组神经功能损伤评分分别为(0.84 ±0.26)、(2.41 ±0.72)、0分.PAMD组、模型组神经功能损伤评分高于假手术组(P均<0.05),PAMD组神经功能损伤评分低于模型组(P<0.05).肉眼可观察到模型组、PAMD组再灌注侧有不同程度的梗死灶,对侧无梗死灶,梗死区域与大脑中动脉所支配的脑区一致.PAMD组、模型组缺血再灌注侧脑梗死体积大于假手术组(P均<0.05);PAMD组再灌注侧脑梗死体积小于模型组(P<0.05).PAMD组、模型组、假手术组再灌注侧脑皮质NR2B相对表达量比较差异均无统计学意义(P均>0.05).PAMD组、模型组再灌注侧脑皮质p-NR2B相对表达量高于假手术组(P均<0.05),PAMD组再灌注侧脑皮质p-NR2B相对表达量低于模型组(P<0.05).结论 PAMD灌胃对大鼠脑缺血再灌注损伤有预防作用;其机制可能与抑制NR2B磷酸化有关.

目的:探讨蝙蝠葛酚性碱(PAMD)对人胰腺癌BxPC-3细胞的增殖抑制作用,以及通过观察PAMD对胰腺癌BxPC-3细胞Hedgehog信号通路中Shh、Ptch1 mRNA和蛋白表达的影响,进一步讨论PAMD抗胰腺癌的作用机制及其作用靶点.方法:对人胰腺癌BxPC-3细胞进行体外培养,以不同终浓度的PAMD培养液进行干预,对照组用正常培养液培养,进行以下实验:(1)利用台盼蓝染色测定各组中BxPC-3细胞生长周期;(2)运用MTT法检测各组BxPC-3细胞增殖情况;(3)利用RT-PCR、Western Blot技术检测各组BxPC-3细胞中Shh、Ptch1mRNA及蛋白的表达.结果:(1)各给药组与对照组相比,癌细胞生长缓慢;(2)PAMD高、低剂量组及5-FU组细胞的增殖抑制率分别为72.35％、44.62％、56.07％;(3)与对照组相比,Shh、Ptch1 mRNA的表达均下降,差异显著(P＜0.01),具有统计学意义.结论:PAMD对人胰腺癌BxPC-3细胞有增殖抑制作用,对Hedgehog信号通路关键位点的表达有一定的抑制作用.由此推断,PAMD对胰腺癌的抗癌作用机制可能与Hedgehog信号通路有关.

采用制备薄层色谱、硅胶柱色谱、ODS柱色谱、D101大孔树脂柱色谱、Sephadex LH-20凝胶柱色谱等色谱分离方法, 对北豆根的75％乙醇提取物进行分离纯化, 根据化合物的理化性质和波谱数据进行结构鉴定.从北豆根的75％乙醇提取物中分离得到15个化合物, 分别鉴定为N-methylcorydaldine (1) 、白蓬草福林 (2) 、千金藤啶碱 (3) 、阿克吐明 (4) 、蝙蝠葛苏林碱 (5) 、阿克吐米定 (6) 、蝙蝠葛新苛林碱 (7) 、蝙蝠葛辛碱 (8) 、6-O-去甲基蝙蝠葛波酚碱 (9) 、蝙蝠葛定碱 (10) 、蝙蝠葛糖苷 (11) 、刺五加苷D (12) 、马兜铃内酯 (13) 、马兜铃酸萜酯Ⅰ (14) 和马兜铃酸 (15) , 化合物12～15为首次从蝙蝠葛属植物中分离得到.利用MTT法对所分得量较大的6种生物碱进行了抗缺氧活性研究, 结果表明6种生物碱均具有较显著的抗缺氧活性.

为探究天葵子化学成分及其抑菌活性.采用色谱法从天葵子中分离得到13个化合物,利用波谱学等方法鉴定了它们的化学结构,分别鉴定为蝙蝠葛内酯(1)、格列风内酯(2)、β-谷甾醇(3)、胡萝卜苷(4)、对羟基苯乙醇(5)、邻苯二甲酸-二-2-乙基-己酯(6)、小檗碱(7)、木兰碱(8)、唐松草酚定(9)、果糖(10)、紫草氰苷(11)、小檗红碱(12)、bauhinin(13).其中化合物12和13为首次从天葵子中分离得到.采用滤纸片琼脂扩散法测定了所得化合物的抑菌活性,其中化合物7和12具有明显的抑菌活性,在载药量为5μg/片时,化合物7对白菜软腐病菌和猕猴桃溃疡病菌的抑菌圈直径分别为19.4、13.3 mm;化合物12对青枯病菌和猕猴桃溃疡病菌的抑菌圈直径分别为13.2、12.8 mm,表明天葵子对于防治作物细菌性病害具有较好的应用前景.

目的:研究人胰腺癌细胞BxPC-3在蝙蝠葛酚性碱(PAMD)的干预下出现增殖抑制的作用,以及观察PAMD作用于BxPC-3细胞使其产生的病理形态、细胞凋亡及细胞周期的影响.方法:培养BxPC-3细胞,进行以下实验:(1)利用台盼蓝染色测定法测定各组中BxPC-3细胞的生长周期,并根据周期绘制其生长曲线;同时采用MTT法检测法测定各组中BxPC-3细胞的增殖情况;(2)利用透射电镜观察PAMD对BxPC-3细胞病理形态的变化;然后利用流式细胞术检测法检测各组BxPC-3细胞的细胞周期及其细胞凋亡的情况.结果:(1)根据盼蓝染色测定实验可知,各给药组细胞的生长较为缓慢;MTT实验可知,各组细胞的增殖抑制率PAMD高剂量组最高,其次是5-FU组,最后PAMD低剂量;(2)透射电镜显示:各给药组与对照组相比较各给药组的细胞核固缩,并伴有凋亡小体样形成;流式细胞术结果显示:各给药组与对照组的相比,各给药组细胞均停滞在细胞周期中的G1期并且各给药组细胞的细胞凋亡率均有所上升,差异有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01).结论:PAMD使BxPC-3细胞被阻滞在G1期然后阻断其复制增殖,促进细胞凋亡,并且对肿瘤细胞的超微结构造成一定的影响.BxPC-3在PAMD的作用下出现增殖抑制.

目的:探讨蝙蝠葛酚性碱(PAMD)对人胰腺癌BxPC-3细胞的增殖抑制作用,以及通过观察PAMD对胰腺癌BxPC-3细胞Hedgehog信号传导通路中Smo、Gli-1mRNA和蛋白表达的影响,进一步讨论PAMD对胰腺癌Hh信号通路的作用机制及其作用靶点.方法:对人胰腺癌BxPC-3细胞进行体外培养,以终浓度为80、40μg/mL的PAMD培养液以及5-FU终浓度为50μg/mL进行干预,进行以下实验:(1)利用台盼蓝染色测定各组中BxPC-3细胞不同时间点的活细胞数;(2)运用MTT法检测各给药组对BxPC-3细胞增殖抑制情况;(3)利用RT-PCR、Western Blot技术检测各组BxPC-3细胞中Smo、Gli-1 mRNA及蛋白的表达.结果:(1)与对照组相比,BxPC-3细胞生长缓慢;(2)PAMD高、低及5-FU组细胞的增殖抑制率分别为71.15％、43.44％、55.38％;(3)PAMD高、低剂量组及5-FU组BxPC-3细胞中的Smo、Gli-1mRNA及蛋白表达降低,差异具有统计学意义(P＜0.01).结论:PAMD对人胰腺癌BxPC-3细胞有增殖抑制作用,对Hedgehog信号通路中相关蛋白的表达有抑制作用.因此我们推断,PAMD对胰腺癌的增殖抑制作用机制可能与Hedgehog信号通路有关.

[目的]研究北豆根(Menispermum dauricum DC.)中氧化异阿朴啡型生物碱类化学成分及其抗心肌缺血活性.[方法]采用硅胶柱色谱,制备薄层色谱及Sephadex LH-20柱色谱相关方法,对北豆根醇提物进行分离纯化,根据理化性质和波谱数据对分离所得生物碱进行结构鉴定.复制心肌细胞糖氧剥夺损伤模型,采用MTT法测定化合物的抗心肌缺血活性.[结果]从北豆根醇提取物的酸性及碱性二氯甲烷层分离纯化得到5个氧化异阿朴啡型生物碱类化合物,分别鉴定为oxoisoaporphine A (1),oxoisoaporphine B (2),蝙蝠葛波酚碱(3),蝙蝠葛啡诺林碱(4)和蝙蝠葛宁碱(5).MTT法测得5种生物碱作用于糖氧剥夺损伤心肌细胞后的存活率分别为(50.2±3.5)％、(46.4±3.7)％、(59.6±6.0)％、(61.5±5.4)％和(46.9±2.6)％,其中生物碱1、3和4作用后心肌细胞存活率显著高于模型组(38.4±5.0)％.[结论]生物碱1和2为新化合物,生物碱1、3和4具有良好的体外抗心肌缺血活性.

目的:通过观察蝙蝠葛酚性碱(Phenolic alkaloids from Menisphermum dauricum PAMD)对胰腺癌细胞株BxPC-3裸鼠移植瘤的抑制情况,及其对裸鼠移植瘤Hedgehog信号通路中关键分子膜受体Patched 1(Ptch1)、偶联受体Smothened(Smo)基因、蛋白表达的影响,探讨其作用机制.方法:将30只裸鼠随机选择6只作为空白对照组,其余24只裸鼠接种人源性胰腺癌细胞株BxPC-3细胞24小时后,随机分为4组:模型组、5-氟尿嘧啶组(5-FU)、PAMD高、低剂量组,每组6只.连续给药3周后,取出肿瘤组织进行抑瘤率计算,行免疫组化(IHC)、实时定量PCR和Western blot三种方法检测裸鼠移植瘤组织中Ptch1、Smo基因及蛋白的表达影响.结果:①抑瘤率:PAMD低、高剂量组和5-FU组与模型组比较,对胰腺癌裸鼠移植瘤均有不同程度的抑制作用,抑瘤率分别为36.14％、55.88％和30.88％,具有统计学意义(P＜0.05).其中以PAMD高剂量组治疗效果最好,差异具有极显著统计学意义(P＜0.01).②免疫组化:模型组与各治疗组比较,Ptch1和Smo蛋白均呈现高表达,而各治疗组Ptch1蛋白和Smo蛋白表达均出现不同程度的下调,差异具有统计学意义(P＜0.05);同组Ptch1和Smo蛋白相互之间具有相同的表达趋势,其中PAMD高剂量组Ptch1和Smo蛋白表达下调最明显,差异有极显著的统计学意义(P＜0.01).③实时定量PCR: PAMD低、高剂量组与模型组比较,Ptch1蛋白相对表达量均有不同程度的降低,差异具有极显著统计学意义(P＜0.01);而Smo蛋白表达量降低但不明显,差异具有统计学意义(P＜0.05),其中以PAMD高剂量组表达效果最明显,差异具有极显著的统计学意义(P＜0.01).④Western blot结果与上述趋势相一致.结论:PAMD可通过降低Hedgehog信号通路中Ptch1、Smo关键蛋白的含量,诱导肿瘤细胞发生凋亡,从而起到抑制BxPC-3裸鼠移植瘤的生长,延缓胰腺癌的发生发展.