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甲型流感病毒血凝素头部蛋白结构域的原核表达及血清学分析
编辑人员丨2天前
目的:在原核系统中表达流感病毒血凝素(hemagglutinin，HA)头部蛋白并进行血清学分析。方法:将H1N1和H3N2型流感病毒的HA头部蛋白编码基因克隆到pET-22b(+)原核表达质粒中，通过IPTG诱导，在大肠埃希菌BL21中获得含有HA头部与His-Tag的融合蛋白rH1N1-HA和rH3N2-HA。SDS-PAGE分析IPTG诱导前后的融合蛋白，验证表达的准确性，Western blot验证重组蛋白的表达。纯化重组蛋白，多剂次免疫家兔，获得针对H1N1-HA和H3N2-HA头部的多克隆抗体。同时，重组蛋白免疫BALB/c小鼠，评价其免疫原性。结果:rH1N1-HA和rH3N2-HA蛋白在小鼠体内诱导了滴度高于40的血凝抑制抗体，可作为一种保护性抗原。rH1N1-HA和rH3N2-HA蛋白制备的多克隆抗体，可作为Western blot、ELISA等免疫学应用的重要材料。结论:本研究制备的HA头部蛋白可作为一种保护性抗原，在小鼠体内诱导保护性抗体。HA头部制备的多克隆抗体，可用于甲型流感病毒的免疫学和血清学研究。
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编辑人员丨2天前
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H5亚型流感病毒HA头部球状结构域在毕赤酵母中的高效表达及其免疫原性分析
编辑人员丨2023/8/6
为了研究H5亚型流感病毒HA蛋白中头部球状结构的免疫原性及其基因优化对蛋白表达的影响,本研究构建了重组真核表达载体pPICZαA-H5HA,并将其转化至毕赤酵母,经筛选获得重组菌株.SDS-PAGE和Western blotting结果分析显示,目的蛋白可在酵母中高效分泌表达,发酵液上清中目的蛋白浓度高达0.2 mg/mL,分子量约为37 kDa.将酵母发酵上清经浓缩、纯化后,获得重组目的蛋白H5HA.将不同剂量的H5HA与不同佐剂联用后分别以滴鼻和肌肉注射两种方式免疫试验动物,进行免疫效力的评价.试验结果表明,H5HA具有较好的免疫原性,可诱导SPF鸡产生较高水平的IgG(血凝抑制效价达1∶64、病毒中和抗体效价为1∶218),最佳使用剂量为50 μg/羽,与白油佐剂联用时效果最佳,且肌肉注射方式的免疫效果优于滴鼻方式.研究结果为H5亚型流感病毒亚单位疫苗的研制提供了理论支撑.
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编辑人员丨2023/8/6
