目的:探讨亚砷酸钠（NaAsO 2）暴露对小鼠淋巴结血管内皮细胞系SVEC4-10细胞中核因子E2相关因子2（Nrf2）信号通路转录活性的影响。 方法:采用细胞体外培养方法，分别以不同剂量NaAsO 2[0（对照）、2、5、10、20、50、100、150 μmol/L]处理SVEC4-10细胞24 h，四唑化合物（MTS）法检测细胞活性。时间-效应关系研究分别以5 μmol/L NaAsO 2处理SVEC4-10细胞0（对照）、2、6、12 h。剂量-效应关系研究分别以0（对照）、2、5、10 μmol/L NaAsO 2处理SVEC4-10细胞6 h。采用实时荧光定量PCR（RT-qPCR）法检测Nrf2信号通路相关基因Nrf2、谷氨酰半胱氨酸连接酶催化亚单位（Gclc）、谷氨酰半胱氨酸连接酶修饰亚单位（Gclm）、醌氧化还原酶1（Nqo1）、金属硫蛋白1（Mt1）mRNA水平。采用SVEC4-10细胞建立Nrf2基因稳转沉默（Nrf2-KD）细胞，分别以0（对照）、10、20 μmol/L NaAsO 2处理干扰对照（scramble，SCR）细胞和Nrf2-KD细胞16 h，流式细胞仪检测细胞凋亡情况。 结果:MTS检测结果显示，对照组，2、5、10、20、50、100、150 μmol/L NaAsO 2处理组细胞活性分别为（100.00 ± 19.53）%、（98.18 ± 9.85）%、（96.09 ± 30.04）%、（90.64 ± 8.74）%、（59.75 ± 12.09）%、（35.43 ± 8.58）%、（26.35 ± 5.89）%、（17.54 ± 4.48）%，不同剂量组间细胞活性比较差异有统计学意义（ F = 18.30， P < 0.05）；且20、50、100、150 μmol/L NaAsO 2处理组细胞活性显著低于对照组（ P均< 0.05）。时间-效应关系研究结果显示，对照组，2、6、12 h处理组组间Nrf2、Gclc、Gclm、Nqo1、Mt1 mRNA水平比较差异有统计学意义（ F = 56.69、85.28、90.82、80.46、758.60， P均< 0.05）；随着砷暴露时间的延长，Nrf2、Gclc、Gclm、Mt1 mRNA水平先上升后下降，Nqo1 mRNA水平不断上升；其中，Nrf2 mRNA水平在2 h达到峰值，Gclc、Gclm、Mt1 mRNA水平在6 h达到峰值，Nqo1 mRNA水平在12 h达到峰值。剂量-效应关系研究结果显示，对照组，2、5、10 μmol/L NaAsO 2处理组组间Nrf2、Gclc、Gclm、Nqo1、Mt1 mRNA水平比较差异有统计学意义（ F = 68.39、72.26、30.41、397.00、28.88， P均< 0.05）；随着砷暴露剂量增加，Nrf2、Gclc、Gclm、Nqo1、Mt1 mRNA水平有所上升，其中Nrf2 mRNA水平在5 μmol/L剂量时达到峰值，Gclc、Gclm、Nqo1、Mt1 mRNA水平在10 μmol/L剂量时达到峰值。细胞凋亡检测结果显示，对照组，10、20 μmol/L NaAsO 2处理组组间SCR、Nrf2-KD细胞凋亡率比较差异有统计学意义（ F = 8.18、9.66， P均< 0.05）；与对照组比较，20 μmol/L NaAsO 2处理组SCR、Nrf2-KD细胞凋亡率升高（ P均< 0.05）；且20 μmol/L NaAsO 2处理组Nrf2-KD细胞凋亡率高于同剂量组的SCR细胞（ P < 0.05）。 结论:NaAsO 2暴露引起小鼠淋巴结血管内皮细胞系SVEC4-10细胞Nrf2信号通路活化，激活适应性抗氧化反应，改变转录活性；而Nrf2的沉默使SVEC4-10细胞对NaAsO 2毒性更为敏感。

本研究通过在线公共数据库与细胞实验分析过氧化物酶体增殖物激活受体a（peroxisome proliferator-activated receptor a，PPARA）在肝细胞癌中的表达情况、基因功能及对肝细胞癌（hepatocellular carcinoma，HCC）患者疾病恶化的影响，探讨 PPARA是否参与肝细胞癌铁死亡的过程。采用实验性研究，基于生物信息学的数据分析及细胞实验，2022年1至8月在我院基础医学实验室进行相关细胞实验。利用癌症基因组数据（The Cancer Genome Atlas，TCGA）和基因表达数集（Gene Expression Omnibus，GEO）数据库分析 PPARA在肝细胞癌中表达水平及与患者临床病理特征相关性。通过人类蛋白免疫组化表达数据库（The Human Protein Atlas，HPA）研究PPARA在HCC肿瘤组织及正常组织中蛋白表达情况。基于基因、蛋白质相互作用关系检索工具（Search Tool for the Retrival of Interacting Genes/Protein，STRING）数据库构建PPARA与铁死亡关键因子的蛋白质相互作用（protein-protein interaction，PPI）网络，同时用基因表达谱数据动态分析（Gene Expression Profiling Interactive Analysis，GEPIA）分析PPARA与关键基因谷氨酸半胱氨酸连接酶催化亚单位（Glutamate-Cysteine Ligase Catalytic Subunit，GCLC）的相关性。通过免疫印迹（Western Blot，WB）检测HCC细胞株SK-HEP-1、SMMC-7721、MHCC-97H、BEL-7402及正常肝细胞L02中PPARA的表达水平，观察用铁死亡诱导剂Erastin处理48 h后PPARA表达量的变化。GEPIA数据库中各组间PPARA表达量间比较使用单因素方差分析方法。GSE25097与GSE112790数据集中PPARA的表达量比较采用秩和检验。生存分析使用时序检验方法进行统计。比较不同临床、病理特征间PPARA表达量间的差异利用克鲁斯卡尔-沃利斯检验。利用斯皮尔曼相关系数的方法比较GCLC与PPARA表达量之间的相关性。利用配对T检验对PPARA在细胞系中表达量进行比较。结果显示，HCC组织中 PPARA 的RNA水平和蛋白表达水平均低于正常组织（ P<0.05）。PPARA表达水平与临床病理分级和预后有关（ P<0.05）。STRING数据库构建的PPI提示PPARA与铁死亡关键因子NFE2样bZIP转录因子2（NFE2 like bZIP transcription factor 2，NFE2L2）、血红素加氧酶1（heme oxygenase 1，HMOX1）、肿瘤蛋白P53（tumor protein P53，TP53）、GCLC、二肽基肽酶4（dipeptidyl peptidase 4，DPP4）、柠檬酸合成酶（citrate synthase，CS）、花生四烯酸15脂氧合酶（arachidonate 15-lipoxygenase，ALOX15）、酰基CoA合成酶长链家族成员4（Acyl-CoA synthetase long chain family member 4，ACSL4）等存在相互作用。进一步研究表明，GEPIA数据库结果显示PPARA与GCLC的表达呈正相关（ R=0.6， P<0.05）。用铁死亡诱导剂Erastin处理MHCC-97H和SK-HEP-1细胞48 h后，通过WB 检测发现PPARA表达量均升高。综上，PPARA在HCC低表达，表达量越低则患者生存期越短。PPARA与GCLC相互作用，从而共同参与调控HCC铁死亡过程。

目的 探讨高浓度氧暴露对新生早产大鼠肺组织中血红素加氧酶-1(HO-1)和谷氨酰-L-半胱氨酸连接酶催化亚单位(GCLC)动态表达的影响.方法 受孕21d大鼠行剖宫产取出早产鼠80只,喂养1d后随机分为空气组和高氧组.空气组早产鼠放置在室内常压空气中饲养,高氧组早产鼠放置在同一室内常压氧箱中(氧浓度85％～95％)饲养,分别于第1、4、7、10、14天,每组取8只大鼠,采集两组早产鼠肺组织标本.采用苏木精-伊红染色法检测两组早产鼠不同时间点肺组织结构的病理变化;采用Western blot技术和RT-qPCR检测两组早产鼠不同时间点肺组织HO-1和GCLC蛋白及mRNA的表达变化.结果 与空气组相比,高氧组早产鼠体重下降显著(P＜0.05).与空气组相比,高氧组早产鼠肺组织病理切片显示肺组织结构紊乱、肺泡间隔增宽、肺泡数目减少和肺泡简单化.高氧组早产鼠肺组织中HO-1 mRNA相对表达量在第7天时低于空气组,在第10、14天时高于空气组(P＜0.05).高氧组早产鼠肺组织中GCLC mRNA表达量在第1、4、7天时低于空气组,在第10天时高于空气组(P＜0.05).与空气组比较,高氧组早产鼠肺组织中HO-1蛋白表达水平在各时间点均升高;除第1天外,GCLC蛋白表达水平在其他各时间点均升高(P＜0.05).结论 高氧暴露导致早产鼠生长发育迟缓、肺发育阻滞.早产鼠肺组织HO-1和GCLC蛋白及mRNA的表达变化可能与高氧暴露导致早产鼠肺损伤发病过程相关.