目的:探讨超活化血小板裂解液(sPL)对类风湿关节炎患者成纤维细胞样滑膜细胞(RA-FLS)的影响。方法:选取哈尔滨医科大学附属第一医院2018年1月—2019年3月6例类风湿关节炎患者作为研究对象，其中男3例、女3例，年龄26~49岁、中位年龄33岁，受累关节功能分级均为Ⅱ级。收集患者静脉血标本，先进行两次离心分离获得富血小板血浆(PRP)；再加入0.08 mmol/L CaCl 2, 37 ℃孵育激活血小板；然后经过冷冻、融化、离心、过滤除菌、去除纤维蛋白原，获得sPL。培养RA-FLS，分为对照组和2.5%、5%、10% sPL组，分别与含有0、2.5%、5%、10% sPL的培养液培养48 h。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组细胞中炎症因子白细胞介素(IL)-6、肿瘤坏死因子(TNF)-α、IL-1β的浓度；细胞计数试剂盒(CCK)-8法测定各组细胞增殖活性；流式细胞术测定各组细胞的凋亡率；体外小管生成实验检测各组细胞血管生成能力；Transwell实验检测各组细胞迁移能力和侵袭能力；Western blot法测定各组细胞增殖细胞核抗原(PCNA)、细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、B细胞淋巴瘤/白血病-2蛋白(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、基质金属蛋白酶(MMP)2、MMP-9、血管内皮生长因子(VEGF)和VEGF受体-2 (VEGFR2)的表达情况。 结果:(1)对照组、2.5%sPL组、5%sPL组、10%sPL组细胞培养基中IL-6浓度分别为(80.18±11.67)、(59.94±9.50)、(46.60±8.04)、(60.67±9.24)pg/mL，TNF-α浓度分别为(70.75±9.14)、(54.56±7.81)、(43.27±6.30)、(53.99±8.60)pg/mL，IL-1β浓度分别为(64.18±9.90)、(46.97±8.79)、(36.28±7.44)、(47.66±8.15)pg/mL，组间比较差异均有统计学意义( F＝12.186、11.934、10.709， P值均<0.01)；2.5%sPL组、5%sPL组、10% sPL组细胞中IL-6、TNF-α、IL-1β的表达水平均明显低于对照组，差异均有统计学意义( P值均<0.05)；5% sPL组炎症因子表达水平低于2.5% sPL组和10% sPL组，差异均有统计学意义( P值均<0.05)。(2)对照组、2.5%sPL组、5%sPL组、10%sPL组RA-FLS增殖率分别为87.33%±10.98%、76.17%±8.18%、60.83%±7.99%、75.83%±8.45%，细胞凋亡率分别为6.51%±1.16%、16.23%±2.75%、29.69%±3.80%、16.37%±2.29%，小管形成数分别为(41.00±7.55)、(26.67±4.16)、(11.67±3.51)、(26.00±6.56)个，迁移细胞数目分别为(443.00±54.06)、(282.33±31.66)、(154.64±23.18)、(292.00±35.03)个，侵袭细胞数目分别为(243.30±27.39)、(67.00±12.53)、(22.33±8.74)、(79.33±14.98)个，组间比较差异均有统计学意义( F＝8.795、38.095、34.278、29.352、94.772, P值均<0.05)；2.5%sPL组、5%sPL组、10% sPL组RA-FLS细胞增殖率、血管管腔形成数量、迁移细胞数目和侵袭细胞数目均低于对照组，细胞凋亡率均高于对照组，差异均有统计学意义( P值均<0.05)；5% sPL组中细胞增殖率、小管形成数、迁移细胞数目和侵袭细胞数目均明显低于2.5% sPL组和10% sPL组，细胞凋亡率则高于2.5% sPL组和10% sPL组，差异均有统计学意义( P值均<0.05)。(3)对照组、2.5%sPL组、5%sPL组、10%sPL组RA-FLS PCNA、CyclinD1、Bax、Bcl-2、MMP-2、MMP-9、VEGF和VEGFR2蛋白相对表达量比较，差异均有统计学意义( P值均<0.01)；2.5%sPL组、5%sPL组、10% sPL组细胞中PCNA、CyclinD1、Bcl-2、MMP-2、MMP-9、VEGF和VEGFR2蛋白相对表达量均低于对照组，Bax蛋白相对表达量均高于对照组，差异均有统计学意义( P值均<0.05)；5% sPL组PCNA、CyclinD1、Bcl-2、MMP-2、MMP-9、VEGF和VEGFR2蛋白相对表达量均低于2.5% sPL组和10% sPL组，而Bax蛋白相对表达量则高于2.5% sPL组和10% sPL组，差异均有统计学意义( P值均<0.05)。 结论:sPL对RA-FLS的增殖、迁移、侵袭、血管生成以及炎症因子的产生具有抑制作用，对RA-FLS凋亡具有促进作用，且SPL对RA-FLS的生长抑制效果与SPL浓度有关。

目的 研究超声波、sPL(超活化血小板裂解液)注射联合治疗促进兔跟腱断裂术后康复的效果.方法 选取24只3～4月龄新西兰白兔制造跟腱断裂术后模型,随机将其分为4组:A、B、C、D,每组6只.A组为对照组,每周注射一次生理盐水0.2 mL;B组采用超声波治疗,同时每周注射生理盐水0.2 mL;C组每周注射sPL 0.2 mL;D组采用sPL和超声波联合治疗,超声波治疗的同时每周注射一次sPL0.2 mL.3个月后测定跟腱的最大断裂负荷、Ⅰ型胶原蛋白和Ⅲ型胶原蛋白含量.结果 D组与其他三组相比,修复的跟腱可承受的断裂负荷最大、拥有Ⅰ型胶原蛋白含量最高、Ⅲ型胶原蛋白含量最低(均P＜0.05).结论 sPL与超声波联合治疗能更好地促进兔跟腱断裂术后的康复,为sPL与超声波联合治疗的临床应用提供实验依据.

目的 探讨超活化血小板裂解液(super-activated platelet lysate,sPL)对成骨细胞增殖的影响及凋亡修复作用,以明确其能否有效应用于骨组织愈合.方法 在成骨细胞hFOB.1.19中分别加入不同浓度的sPL(0％、5％、10％、20％),连续7d计数,并绘制生长曲线,分析不同浓度sPL对成骨细胞的增殖作用;用转化生长因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)诱导建立成骨细胞凋亡模型,流式细胞术检测不同浓度sPL(0％、5％、10％、20％)作用36 h后,对凋亡细胞的修复作用.结果 5％和10％ sPL对成骨细胞具有较高的促增殖作用,5％ sPL的促细胞增殖效果高于10％;20％ sPL未见显著促细胞增殖作用.与0％ sPL组比较,5％和10％ sPL对凋亡的成骨细胞具有显著修复作用(P均＜0.01);而20％ sPL未见显著凋亡修复作用(P＞0.05).结论 sPL可促进成骨细胞增殖以及凋亡修复,进而可达到促进骨组织愈合的效果,sPL浓度为5％时,效果更佳.

目的 制备超活化富血小板裂解液(super-activated platelet lysate,sPL),研究其对雄激素性脱发(androgenetic alopecia,AGA)小鼠模型的毛囊再生的影响,为sPL治疗AGA的临床研究提供基础.方法 使用超滤离心从全血中分离富血小板血浆(platelet-rich plasma,PRP),用冻融方式将血小板裂解制备血小板裂解液(platelet lysate,PL).用CaCl2结合肝素激活PRP中的血小板,冻融裂解血小板的同时用温度浮动控制方法去除纤维蛋白原,获得sPL.通过ELISA分析PRP、PL及sPL中毛囊再生相关因子含量.用丙酸睾酮注射建立C57bl/6小鼠AGA模型后,用sPL进行治疗,取小鼠背部皮肤,苏木素伊红染色判断sPL对毛囊再生的作用.结果 经超滤离心及激活获得的sPL中,数种毛囊再生相关因子较PRP及PL均显著增加.AGA小鼠经sPL治疗后毛发再生明显,同时毛囊密度恢复至对照组水平(t=1.149,P=0.269 9).结论 相对于PRP与PL,sPL制备方法可获得更高的生长因子含量,且sPL对AGA小鼠具有显著的毛囊再生作用.