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AFF4在人类HEL细胞中广泛地影响RNA聚合酶Ⅱ的停滞释放
编辑人员丨2023/9/16
在转录延伸过程中,P-TEFb激酶(由激酶CDK9 和Cyclin T1 组成的二聚体)是释放停滞的Pol Ⅱ这一步的关键调节因子.在人类细胞中,它可参与形成三个更大的复合体,即超级延伸复合体(super elongation complex,SEC)、BRD4/P-TEFb 和 7SK snRNP,其活性在前两者中不被抑制,而在后者中被抑制.除 P-TEFb 外,SEC还含有AFF1 或 4、AF9 或ENL、ELL1、2 或 3,EAF1 或 2 等无酶活亚基,这些亚基被认为可通过P-TEFb影响转录延伸.本课题组前期的研究和其他实验室的研究工作均已表明AFF1、AF9 和ENL亚基均可调控转录启始,但尚不清楚 AFF4 是否具有相似的功能.在调控基因表达的选择性方面,近期有研究表明 BRD4/P-TEFb在人类结直肠腺癌细胞DLD-1 中主要负责除热激基因以外的其他基因的停滞释放,而SEC负责热激基因的停滞释放.为了深入理解AFF4 的功能,本研究利用RNA干扰技术在人类红系白血病细胞HEL中敲低了AFF4,发现RNA聚合酶Ⅱ(Pol Ⅱ)的羧基端重复区(C-terminal domain,CTD)内第二个丝氨酸(Serine 2,Ser-2)的磷酸化水平降低.利用RNA-seq和CUT&Tag确定了AFF4 的直接靶基因,利用ChIP-seq和PRO-seq发现AFF4 对转录启始的影响不明确、对Pol Ⅱ的停滞释放的调控不局限于热激基因,利用ChIP-qPCR发现AFF4 缺失降低了P-TEFb的染色质结合.上述研究结果表明,AFF4 对Pol Ⅱ的停滞释放的调控可能具有一定的细胞类型特异性,即在一些细胞内仅调控热激基因的停滞释放,而在另一些细胞中调控的对象却不仅限于热激基因.
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编辑人员丨2023/9/16
