目的 探讨二仙汤治疗迟发性抑郁症(LOD)的效果及可能作用机制.方法 40只雄性7～8周龄Wistar大鼠分为正常组和青年抑郁组各20只.60只20月龄雄性Wistar大鼠分为衰老组、迟发抑郁组、二仙汤组各20只.青年抑郁组大鼠采用慢性不可预计应激刺激(CUMS)6周建立抑郁模型,迟发抑郁组、二仙汤组衰老大鼠采用CUMS6周建立LOD模型,正常组和衰老组不进行任何干预.造模的同时进行灌胃给药,二仙汤组大鼠给予二仙汤8 g/(kg·d)灌胃,正常组、青年抑郁组、衰老组、迟发抑郁组给予4 ml/(kg·d)纯净水灌胃,各组均给药6周.采用糖水偏爱实验、强迫游泳实验评估大鼠抑郁样行为,旷场实验评价大鼠自发活动能力,T迷宫实验评估大鼠认知功能;Western Blot法检测海马组织神经元核心抗原(NeuN)、巢蛋白、双皮质素(DCX)及脉络丛组织中闭锁小带蛋白1(ZO-1)、叶酸α受体(FRα)、还原型叶酸转运体(RFC)、质子耦合叶酸转运体(PCFT)蛋白表达;采用免疫荧光法检测海马齿状回Ki-67/巢蛋白双阳性细胞数、5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)/DCX双阳性细胞数及脉络丛组织中ZO-1、FRα、RFC、PCFT蛋白表达;ELISA法检测血浆、脑脊液、海马组织中5-甲基四氢叶酸(5-MTHF)含量;采用Pearson相关分析对各组大鼠脑脊液、海马组织中5-MTHF含量与海马组织中巢蛋白、DCX、NeuN蛋白表达进行相关性分析.结果 与正常组比较,青年抑郁组及迟发抑郁组大鼠糖水偏爱度降低,旷场总路程、穿格次数减少,强迫游泳不动时间延长,海马组织NeuN、巢蛋白、DCX蛋白表达均降低,海马齿状回Ki-67/巢蛋白双阳性细胞数、BrdU/DCX双阳性细胞数减少,ZO-1、FRα蛋白表达及荧光强度减少(P＜0.05或P＜0.01);青年抑郁组大鼠第3、4天及迟发抑郁组大鼠第2～4天T迷宫正确率均明显降低,迟发抑郁组大鼠脑脊液、海马组织中5-MTHF含量明显降低(P＜0.05或P＜0.01).与青年抑郁组相比,迟发抑郁组大鼠旷场总路程、穿格次数减少,第1～4天T迷宫正确率均显著降低,海马组织NeuN、巢蛋白、DCX蛋白表达及海马齿状回Ki-67/巢蛋白双阳性细胞数、BrdU/DCX双阳性细胞数减少(P＜0.05或P＜0.01).与迟发抑郁组比较,二仙汤组大鼠糖水偏爱度及旷场总路程、穿格次数均升高,强迫游泳不动时间缩短,第3～4天T迷宫正确率明显升高,海马组织NeuN、巢蛋白、DCX蛋白表达升高,海马齿状回Ki-67/巢蛋白双阳性细胞数、BrdU/DCX双阳性细胞数增加,脑脊液、海马组织中5-MTHF含量明显升高,脉络丛中ZO-1、FRα、RFC、PCFT蛋白表达及荧光强度升高(P＜0.05或P＜0.01).相关性分析结果显示,脑脊液(r=0.466)和海马组织(r=0.522)中5-MTHF含量与海马组织中巢蛋白表达存在正相关(P＜0.05).结论 二仙汤可改善LOD模型大鼠抑郁样行为及认知障碍,其机制可能通过减轻脑组织脉络丛结构损伤,改善脉络丛叶酸转运障碍,从而促进海马神经发生.

迟发性性腺功能减退症(LOH)是一种与年龄增长密切相关的男科疾病,临床症状复杂多样,与抑郁症在临床表现上十分类似,值得临床医师关注与重视.中医药积极地干预治疗本病有利于有效改善患者的抑郁状态,呵护中老年男性身心健康;同时有利于规避睾酮补充治疗的风险、提高疗效、缩短病程,具有重大的临床意义.肾虚是本病的启动环节,肝郁是本病的演变枢纽,肝郁肾虚是本病的核心病机.中医药治疗本病可从补肾疏肝入手,从肝肾论治本病,同时宜兼顾它脏,随症治之.

通过脑脊液(cerebrospinal fluid,CSF)蛋白质组学探讨二仙汤抗迟发性抑郁症(late-onset depression,LOD)神经发生障碍的机制.66只20～21月龄自然衰老Wister大鼠,分为自然衰老(AGED)组、LOD组和二仙汤(EXD)治疗组.以自然衰老结合慢性不可预知轻度应激(chronic unpredictable mild stress,CUMS)连续造模6周制备LOD模型.造模期间EXD组给予EXD(4 g·kg-1,每日2次)灌胃,AGED组和LOD组给予生理盐水灌胃.造模结束进行糖水偏好、旷场、强迫游泳、水迷宫等行为学检测.运用免疫荧光法观察各组大鼠海马DG区Ki-67/Nestin、BrdU/DCX阳性细胞数.体外实验采用高浓度皮质酮(CORT)合并D-氨基半乳糖胺(D-gal)模拟LOD相关应激和衰老的改变,观察各组大鼠CSF对高浓度CORT合并D-gal条件下原代海马神经干细胞增殖、分化的影响.采用数据非依赖性采集(data-independent acquisition,DIA)蛋白组测序技术分析各组大鼠CSF差异蛋白,并对差异蛋白进行生物信息学分析.行为学结果显示,与AGED组相比,LOD组糖水消耗量、旷场总路程、水迷宫寻找站台次数均显著下降(P＜0.01),强迫游泳不动时间显著延长(P＜0.01),提示LOD大鼠出现快感丧失、自主活动能力下降以及认知功能障碍.与LOD组相比,EXD组行为学异常均明显改善(P＜0.01,P＜0.05).免疫荧光显示LOD大鼠海马DG区Ki-67/Nestin、BrdU/DCX阳性细胞数显著下降(P＜0.05),与LOD组比较,EXD组大鼠DG区阳性细胞数显著增多(P＜0.05).体外实验显示,CORT合并D-gal模型下,原代海马神经干细胞增殖、分化能力显著降低(P＜0.01),LOD大鼠CSF进一步恶化高浓度CORT合并D-gal模型下原代海马神经干细胞增殖、分化能力(P＜0.01),EXD组CSF可有效缓解CORT合并D-gal模型的损伤(P＜0.01).DIA蛋白组学在大鼠CSF中检测出2620个蛋白,其中AGED组与LOD组存在显著差异蛋白135个;经EXD干预后,与LOD组比较,共有176个显著差异蛋白;其中与神经发生密切相关的有GDF 11、NrCAM、NTRK2、GhR等;而同时被LOD和EXD调控的蛋白共有39个.实验结果表明,EXD具有良好的抗LOD功效,改善LOD大鼠自主活动能力、改善其认知功能以及维持其海马神经干细胞增殖分化.EXD可能通过调控CSF中与神经发生有关的蛋白如GDF11、NrCAM、NTRK2、GhR,维持海马神经发生,发挥抗LOD的作用.