[背景]沙门氏菌(Salmonella spp.)是重要的人畜共患病原菌,其毒力和耐药性的不断增强引起广泛关注.[目的]了解从通辽市一犊牛死亡病例中所分离牛源都柏林沙门氏菌的毒力及耐药性情况.[方法]以病死犊牛肺脏为材料,经细菌分离纯化及 16S rRNA基因测序,鉴定病原为沙门氏菌.采用动物试验、药敏试验和PCR方法对分离菌进行毒力、耐药性,以及毒力基因和耐药基因检测,并对其进行全基因组测序分析.[结果]分离菌具有较强毒力,对小鼠半数致死量为2.8×106 CFU/mL.分离菌为多重耐药菌,仅对多粘菌素B和噻孢霉素敏感,对强力霉素和恩诺沙星中度敏感.检测 13 种沙门氏菌常见毒力基因,检出率为 92.3%.对分离菌进行全基因组测序分析,该菌株为都柏林沙门氏菌,基因组大小为 4 965 370 bp,GC含量为 52.12%,同时携带 2 个质粒,大小分别为 79 524 bp(pTLS-1)和 45 301 bp(pTLS-2).分离菌中共携带 996 个毒力基因和24 个毒力岛;共携带 42 个耐药基因,其中 4 个为可水平转移基因,基因组中存在 9 个可移动遗传元件,包括插入序列和转座子等.[结论]分离牛源都柏林沙门氏菌菌株具有较强毒力且为多重耐药株,携带大量毒力基因及耐药基因.

目的 对一起因食用芝麻酱蘸料引起的都柏林沙门氏菌食物中毒事件进行调查分析,探讨预防控制措施.方法 开展流行病学和现场卫生学调查,依据GB 4789.4-2010《食品微生物学检验沙门氏菌检验》对病人粪便、可疑食物等标本进行实验室检测.结果 病人的主要临床症状是发热、恶心、呕吐、腹痛、腹泻,平均潜伏期12 h.63例病人有共同暴露史,从采集的14份粪便和1份剩余芝麻酱蘸料中检出相同血清型的都柏林沙门氏菌.结论 加强对餐饮单位食品卫生的监督管理,加强从业人员食品安全培训,健全各项规章制度,强化规范操作意识,是减少食物中毒的有效手段.

目的 通过筛选沙门氏菌检验用培养基的质控菌株,为GB 4789.28-2013标准的修订和企业培养基的质控提供依据.方法 使用GB 4789.28中规定的菌株及从食品中分离的9株沙门氏菌,分别为纽波特沙门氏菌、婴儿沙门氏菌、猪霍乱沙门氏菌、布里丹沙门氏菌、科特布斯沙门氏菌、亚利桑那肠沙门氏菌、都柏林沙门氏菌、阿贡纳沙门氏菌和鸭沙门氏菌,通过定量和半定量方法测试10种不同品牌的RV肉汤、亚硒酸盐胱氨酸增菌液、四硫磺酸钠亮绿培养基和亚硫酸铋琼脂、HE琼脂、木糖赖氨酸脱氧胆盐分离培养基的生长率和选择性的差异,以评价市场现有培养基的质量差异及GB 4789.28-2013中所用的质控菌株是否能满足沙门氏菌培养基的质量控制.结果 结果显示用同一株菌进行检测时,不同品牌的培养基的生长率和选择性存在差异,且猪霍乱沙门氏菌(Salmonella choleraesuis)和亚利桑那肠沙门氏菌(Salmonella arizona)对培养基的质量有更高的要求.结论 建议培养基生产企业及微生物实验室在培养基检验过程中,使用从食品中分离出的,对培养基质量要求高的质控菌株,同时质控方法应予以高度规范化,以保障检验数据稳定、可靠.

[背景]牛巴氏杆菌病是由血清型(A、B、E)多杀性巴氏杆菌(Pasteurellamultocida,Pm)引起的一种严重危害养牛业的重要传染病,病原学聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)方法是诊断并防控该病的有效手段.[目的]建立检测血清型(A、B、E)多杀性巴氏杆菌的多重PCR方法,为临床诊断牛巴氏杆菌病和病原分型提供技术支撑.[方法]参考多杀性巴氏杆菌hyaD-hyaC基因、bcbD)基因和ecbJ基因特异区域,设计3对特异性引物,以温度梯度PCR法确定适宜退火温度(Tm);采用棋盘试验优化引物浓度并初步建立多重PCR方法;采用重组质粒标准品及阳性菌株菌液确定其敏感性(最小检测量);以 8种常见牛感染病原体[溶血性曼氏杆菌(Mannheimia hemolytica)C1655、大肠埃希氏菌(Escherichia coli)C237、产单核细胞李氏杆菌(Listeria monocytogenes)C1597、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)C3053、都柏林沙门氏菌(Salmonella dublin)C79351、副结核分枝杆菌(Mycobacteriumparatuberculosis)C1625、牛传染性鼻气管炎病毒(bovine infectious rhinotracheitis virus)CAV1546 和牛支原体分离株(Mycoplasmna bovis)C65-1]核酸样本确定其特异性;制备3批诊断试剂,对敏感性和特异性样品进行批间和批内试验,确定其重复性;运用建立的方法使用3种不同型号的PCR仪检测敏感性和特异性样品,确定其适用性;通过检测临床样本及人工模拟感染样本评价临床应用效果.[结果]在Tm 为55℃时,3对引物浓度分别为0.25、0.30和0.20 μmol/L条件下建立多重PCR方法较优,可以同时检测多杀性巴氏杆菌血清A型(821 bp)、血清B型(203 bp)和血清E型(363 bp);该方法敏感性高,对重组质粒标准品pMD-A、pMD-B和pMD-E检测限分别为43.080、3.710和4.350 copies/μL,对阳性菌液最低检出限均为102 CFU细菌;其特异性强,仅对血清型(A、B、E)多杀性巴氏杆菌有特异性扩增条带,同时对其他病原体均无扩增条带;该方法重复性良好,批间与批内试验均一致;临床样本及人工模拟感染样本检测结果显示与病原分离鉴定符合率为100％.[结论]成功建立了一种可鉴定不同血清型的牛多杀性巴氏杆菌多重PCR检测方法.

目的 掌握厕所革命前中后期,即2014—2020年宜昌地区食源性疾病病原谱的变化情况,了解厕所革命对宜昌市食源性疾病病原谱的影响.方法 收集2014—2020年宜昌市食源性疾病病例基本信息,采集粪便样本进行相关病原检测.整理宜昌市2014—2020年食品微生物及其致病因子监测项目报告,获悉相关食源性致病菌在食品的分布情况.2017—2020年与肠道疾病多发的5～10月采集长江水样开展食源性疾病致病菌检测.结果 食源性疾病监测结果显示,2015—2017年诺如病毒检出率逐年升高至6.12％,2018年骤降至0.43％,差异有统计学意义(?2=60.962,P<0.05);细菌性病原菌检出率2018年显著下降,不同年份检出率差异有统计学意义(?2=106.47,P<0.05).其中沙门氏菌检出率均为最高,2015—2018年和2020年血清型主要为鼠伤寒,2014年主要血清型为都柏林,2019年主要血清型为肠炎.2017—2020年长江水中仅检出了沙门氏菌和副溶血弧菌,检出率2018年最低,不同年份检出率差异有统计学意义(?2=44.036,P<0.05).结论 厕所革命可以降低宜昌市食源性疾病病原体的检出率,降低长江水中沙门氏菌的检出率,但是对食源性疾病病原谱的构成影响不大.