利用酵母提取物(yeast extract,YE)作为模拟生物胁迫的诱导子,诱导花楸悬浮细胞(Sorbus pohuashanensis suspension cell,SPSC)产生生物胁迫作用,对胁迫下产生的三萜类次生代谢产物进行分离鉴定.采用正相硅胶、葡聚糖凝胶、中压制备液相等色谱技术对SPSC甲醇提取物进行分离纯化,并运用波谱分析技术鉴定出 26 个三萜类化合物,包括 15 个乌苏烷三萜(1～15),2 个 18,19-裂环乌苏烷三萜(16～17),4 个羽扇豆烷三萜(18～21),2 个环阿屯烷三萜(22～23),以及 3 个鲨烯型三萜(24～26).所有三萜均为首次从YE诱导SPSC中分离得到,其中化合物 22-O-acetyltripterygic acid A(1)为新化合物.对分离得到的化合物进行抗真菌、抗肿瘤和抗炎活性评估,结果表明化合物 1 对脂多糖(LPS)诱导的小鼠巨噬细胞RAW264.7 释放一氧化氮(NO)具有一定的抑制作用.

目的:通过检测复发性外阴阴道假丝酵母菌病(RVVC)不同时期IL-17 A等细胞因子的变化,探讨Th17细胞在RVVC发病过程中的作用.方法:选取致病菌为白假丝酵母菌RVVC患者33例、外阴阴道假丝酵母菌病(VVC)患者32例以及8例健康对照者,收集不同时期阴道冲洗液.采用液相悬浮芯片技术(luminex)检测IL-10、IL-17 A、IL-22、IL-23和IFN-γ等细胞因子浓度.结果:RVVC组与VVC组发作期阴道冲洗液中IL-17A浓度分别为(79.08±78.80)pg/ml和(68.67±85.67)pg/ml,明显高于对照组[(4.52±3.89)pg/ml],差异均有统计学意义(P<0.01);RVVC组与VVC组比较差异无统计学意义(P>0.05).RVVC组缓解期阴道冲洗液IL-17A浓度为(3.53±2.03)pg/ml,明显低于对照组,差异有统计学意义(P=0.013).RVVC组阴道冲洗液IFN-γ、IL-17 A及IL-23浓度在发作期明显高于缓解期,差异均有统计学意义(P<0.05);RVVC组阴道冲洗液IL-10浓度在发作期明显低于缓解期,差异有统计学意义[(1.58±1.12)pg/ml vs(2.45±0.92)pg/ml,P=0.041].VVC组阴道冲洗液IL-17A浓度在发作期明显高于缓解期,差异有统计学意义(P<0.01).结论:IL-17A在阴道黏膜防御白假丝酵母菌的免疫反应中起非常重要的作用.缓解期阴道局部IL-17 A低水平表达可能引起VVC反复发作.RVVC发作期IL-10没有参与阴道局部的免疫调节反应,可能也是VVC反复发作的原因之一.

目的 探讨游离二氧化硅(SiO2)粉尘暴露大鼠肺组织不同时间点自噬标志物微管相关蛋白1轻链3(Microtubules associated protein 1 light chain 3,LC3)和酵母自噬相关基因6(Beclin1)的变化.方法 将72只无特定病原体级(SPF)Wistar雄性大鼠随机分为溶剂对照组和SiO2模型组,模型组大鼠采用非暴露式气管滴注法一次性给予SiO2悬浮液建立矽肺模型,溶剂对照组大鼠给予等量生理盐水.造模后两组分别于1、7、14、21、28、60d处死6只大鼠,用苏木精-伊红(HE)染色和Masson染色观察两组大鼠不同时间点肺组织常规病理变化和纤维化程度;用酶联免疫吸附(ELISA)法检测肺组织匀浆中转化生长因子(TGF)-β、白细胞介素(IL)-1和肿瘤坏死因子(TNF)-α的水平;用Western blot法检测肺组织中自噬相关蛋白LC3和Beclin1的相对表达水平.结果 HE染色结果显示,模型组大鼠肺组织在第1天至第60天持续存在炎性反应,炎性评分均明显高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05);Masson染色观察结果显示,模型组大鼠肺组织从第14天开始出现少量胶原纤维增生,至第60天可见大量胶原纤维,纤维化评分明显高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05);对照组大鼠肺组织未见胶原纤维增生.ELISA法测定结果显示,模型组大鼠在染尘后各时间点肺组织匀浆中IL-1、TNF-α和TGF-β的含量均明显高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).Western blot结果显示,模型组大鼠肺组织Beclin1蛋白表达水平在第7、14、21、28和60天时呈下降趋势,均明显高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05);模型组大鼠肺组织LC3II/LC3I的比值在第1、7、14、21、28和60天时呈下降趋势,均明显高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 游离SiO2粉尘致大鼠矽肺发病过程中,自噬相关蛋白LC3和Beclin1的表达水平与矽肺的不同发展阶段有关.在大鼠染矽尘早期,肺组织以炎性变化为主;随着染矽尘大鼠纤维化程度的加重.

目的 为解决多频率方波自动测量生物电阻抗谱的问题,本文设计了一个方波激励的生物电阻抗谱自动测试系统.方法 将任意波形函数发生器、仪表放大器和采集卡以及PC组成电阻抗谱自动测试系统,利用PC中的Labview程序分别控制函数发生器和采集卡自动完成激励的产生和数据采集,并将采集到的数据自动保存在PC中,最后利用Matlab程序对数据进行快速傅里叶变换得到阻抗谱.首先对阻抗网络模型进行阻抗谱的仿真,将仿真得到的阻抗谱和理论计算得到的阻抗谱对比;再分别使用此系统和阻抗分析仪对阻抗网络模型进行阻抗测量,将测试得到的阻抗谱进行曲线拟合得到元件值,根据元件值比较测试误差.最后,使用方波激励和稳态正弦激励对酵母细胞悬浮液进行阻抗测量,根据酵母细胞悬浮液的阻抗谱计算介电谱,将得到的介电谱和参考文献中的介电谱作比较,并比较两种激励的测量时间.结果 仿真得到的阻抗谱和理论计算得到的阻抗谱一致,验证了方波激励的可行性.测试系统对阻抗网络模型的测试结果和阻抗分析仪的相比误差小于10％,验证了测试系统的正确性.使用方波激励和稳态正弦激励测试酵母细胞悬浮液的阻抗谱,转换成介电谱后,发现其变化规律和参考文献所得结果相符.在100 Hz～2 MHz的测试范围内,方波激励的测量时间为0.9 s,稳态正弦激励的测试时间为1.7 s,方波激励的测试速度快.结论 本文设计的方波激励的生物电阻抗谱自动测试系统具有自动测试生物阻抗谱的能力,由于使用方波激励,可以兼顾速度和信噪比的要求,实现了计算机控制,可根据实际情况调整激励信号的参数,具有很强的灵活性和可扩展性.

本文通过测定经20％乙腈处理的酵母菌细胞的死亡率.细胞悬浮液的电导率、OD260和OD280的变化及观察细胞形态的改变,分析乙腈对酵母细胞膜透性的影响.结果 表明,与未处理的酵母细胞相比,20％乙腈处理24 min后的细胞其死亡率、细胞悬液的电导率、OD260和OD280等随作用时间延长而显著增加.同时,还研究了乙腈处理的面包酵母对杀菌剂百菌清(chlorothalonil)敏感性的影响.在浓度为40 mg/L百菌清作用下,对照组酵母细胞死亡率为31.50％、半致死浓度为68.85 mg/L,经20％乙腈处理组酵母细胞死亡率为100％、半致死浓度为18.22 mg/L,致死率提高了2.17倍.研究结果显示,乙腈处理可造成酵母细胞膜结构损伤,显著增加细胞膜的透性,从而导致酵母细胞对百菌清的更加敏感.

目的 研究自噬在矽肺大鼠肺部炎症反应中的作用.方法 选择无特定病原体级健康雄性Wistar大鼠随机分为4组,每组10只.采用非暴露式气管滴注法,二氧化硅(SiO2)组、SiO2+3-甲基腺嘌呤(3-MA)组、SiO2+雷帕霉素(RAPA)组大鼠均一次性予质量浓度为0.05 mg/L的SiO2悬浮液(1.0 mL/只)建立矽肺染尘大鼠模型,对照组大鼠予等体积的0.9％氯化钠溶液.于SiO2染毒前2d,Si)2+3-MA组大鼠予腹腔注射剂量为2.5 mg/kg体质量的3-MA,SiO2+RAPA组大鼠予腹腔注射剂量为1.0 mg/kg体质量的RAPA,每天1次;矽肺造模后隔1 d腹腔注射1次,共注射10次.采用苏木精-伊红和Masson染色法观察各组大鼠肺组织病理变化;采用酶联免疫吸附测定法检测各组大鼠肺组织中转化生长因子-β(TGF-β)、白细胞介素-1β(IL-Iβ)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)相对表达水平;采用蛋白质印迹法检测各组大鼠肺组织中微管相关蛋白1轻链3(LC3)和酵母自噬相关基因6(Beclin1)相对表达水平.结果 肺组织病理观察结果显示,SiO2组大鼠肺组织中可见散在炎性结节,间质中可见散在炎性细胞;SiO2+3-MA组大鼠肺组织中炎症较严重且肺泡腔有黏性分泌物;SiO2+RAPA组大鼠肺组织炎症较SiO2组减轻且炎性结节变小.与对照组比较,SiO2组大鼠肺组织中TNF-α、IL-1β、TGF-β、Beclin1蛋白相对表达水平和LC3 Ⅱ/1比值均升高(P值均＜0.05).与SiO2组比较,SiO2+3-MA组大鼠肺组织中TNF-α和TGF-β相对表达水平均升高(P值均＜0.05),LC3Ⅱ/Ⅰ比值和Beclin1蛋白相对表达水平均下降(P值均＜0.05);SiO2+RAPA组大鼠肺组织中TNF-α、IL-1β和TGF-β相对表达水平均下降(P值均＜0.05),LC3Ⅱ/Ⅰ比值和Beclin1蛋白相对表达水平均升高(P值均＜0.05).与SiO2+3-MA组比较,Si02+RAPA组大鼠肺组织中TNF-α、IL-1β和TGF-β相对表达水平均下降(P值均＜0.05),LC3Ⅱ/Ⅰ比值和Beclin1蛋白相对表达水平均升高(P值均＜0.05).结论 矽肺模型大鼠肺部发生炎症反应时有自噬现象发生;自噬水平的升高对肺部炎症起到一定的抑制作用.