目的 探讨重楼皂苷Ⅰ(Polyphyllin Ⅰ,PPI)对人肝癌细胞HCCLM3增殖、迁移、侵袭的影响及其机制研究.方法 CCK8方法检测PPI对HCCLM3细胞活力抑制作用;克隆形成实验观察PPI和Sorafenib(Sora)对HCCLM3细胞增殖能力影响;细胞划痕实验验证PPI和Sora对HCCLM3细胞迁移能力影响;Transwell实验观察PPI和Sora对HCCLM3细胞侵袭能力影响;Western Blot实验检测PPI和Sora对HCCLM3肝癌细胞MMP2、MMP9蛋白以PI3K/AKT信号通路标志蛋白影响.结果 CCK8实验结果显示,与对照组比较,不同浓度的PPI对HCCLM3细胞活力有明显的抑制作用,且呈时间和剂量依赖性(P＜0.05);克隆结果表明,与空白对照组比较,PPI和Sora对HCCLM3细胞增殖能力有明显抑制作用,PPI联合Sora组抑制作用最明显(P＜0.01);细胞划痕实验与Transwell结果显示,PPI和Sora对HCCLM3细胞迁移和侵袭能力也具有抑制作用,联合组给药组效果更好(P＜0.01);Western Blot实验结果表明PPI和Sora对HCCLM3细胞转移标志蛋白有明显抑制作用,Sora联合PPI组的抑制效果更好(P＜0.01).结论 PPI可通过调控PI3K/Akt信号通路影响HCCLM3细胞的增殖、侵袭和迁移能力.

恶性肿瘤已成为威胁全球健康的重大难题之一.化疗和靶向治疗是其重要的药物治疗手段,但由于药物不良反应和耐药性严重影响患者的治疗依从性、生活质量和治疗效果.越来越多的研究表明,中草药是探索新型抗癌疗法的天然宝库,具有很高的医用价值.清热解毒法是中医治疗恶性肿瘤的基本法则之一.清热解毒类中草药重楼,其性微寒,味苦,有小毒,归足厥阴肝经,具有消肿止痛、清热解毒、凉肝定惊之功效.重楼主要适用于疔疮痈肿、咽喉肿痛、蛇虫咬伤、跌打损伤以及惊风抽搐等症.重楼皂苷Ⅰ是中草药重楼的有效活性成分之一,其化学结构为C44H70O16.大量实验表明,重楼皂苷V能通过抑制肿瘤细胞增殖、阻滞细胞周期、诱导细胞凋亡自噬、逆转肿瘤耐药、抑制肿瘤血管生成、抑制肿瘤EMT、调节肿瘤微环境等途径抑制多种恶性肿瘤细胞生长.查阅国内外关于重楼皂苷Ⅰ抗肿瘤作用及机制的相关文献,对其进行归纳总结,为重楼皂苷Ⅰ抗肿瘤作用机制深入研究及抗肿瘤新药研发提供相应参考.

目的 研究藜芦科植物腾冲重楼Paristengchongensis根茎的化学成分及抗菌活性.方法 采用HPD100大孔吸附树脂、正相硅胶、RPC18硅胶和SephadexLH-20凝胶色谱,以及半制备高效液相色谱等方法进行分离和纯化,利用NMR和MS等波谱数据对化合物的化学结构进行鉴定.对分离到的化合物用微量稀释法进行抗细菌和真菌活性评价.结果 从腾冲重楼根茎70％乙醇提取物中分离并鉴定了 16个化合物,分别为parisvanioside A(1)、kingianoside K(2)、7-氧薯蓣皂苷(3)、pariposide A(4)、parisvanioside B(5)、parisrugoside H(6)、(25R)-17α-羟基螺甾-5-烯-3β-基 O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→4)-O-[α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)]-β-D-吡喃葡萄糖苷(7)、麦冬皂苷C'(8)、纤细薯蓣皂苷(9)、重楼皂苷Ⅰ(10)、重楼皂苷Ⅱ(11)、重楼皂苷VI(12)、pennogenin 3-O-β-chacotrioside(13)、重楼皂苷 H(14)、重楼皂苷Ⅶ(15)和 β-蜕皮激素(16).化合物3、5～15对絮状表皮癣菌有较强抑制作用,50％最低抑菌浓度(50％minimun inhibitory concentration,MIC50)为0.07～93.60 μmol/L;化合物5～15对红色毛癣菌有较强抑制作用,MIC50为0.06～73.08 μmol/L;化合物3、5～8、10～15对石膏样小孢子菌有很强的抑制作用,MIC50为0.04～69.92 μmol/L.结论 化合物1～7为首次从腾冲重楼中分离得到;化合物7、12～15对白色念珠菌氟康唑耐药株抑制率可达100％.化合物11对絮状表皮癣菌抑菌效果最好,MIC50为(0.07±0.004)μmol/L;化合物11对红色毛癣菌抑菌效果最好,MIC50为(0.06±0.003)μmol/L;化合物11对石膏样小孢子菌抑菌效果最好,MIC50为(0.04±0.001)μmol/L.腾冲重楼中含有的甾体皂苷有治疗皮肤及深部真菌感染的潜力.

前列腺癌(Prostate cancer,PCa)已成为严重威胁全球中老年男性健康的疾病之一,是最常见的中老年男性恶性肿瘤之一,占男性肿瘤的十分之一.研究发现中医药在干预抗前列腺癌发生过程中起着不可忽视的作用,综述近年来关于中医药治疗前列腺癌现代机制研究进展.通过从前列腺癌的中医病因病机、相关通路机制如(磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)/蛋白激酶 AKT/雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路(Phosphatidylinositol-3-kinase/protein kinase/rapamycin target protein,PI3K/AKT/mTOR)、核转录因子-κB 信号通路(Nuclear transcription factor-κB)、Notch 信号通路、分泌型糖蛋白(Wnt)/β-链蛋白(β-catenin)信号通路(Ecretory glycoprotein/β-catenin,Wnt/β-catenin)、转化生长因子-β/Smads(Transforming growth factor-β/Smads,TGF-β/Smads)等信号通路及雄激素受体(Androgen receptors,AR))、中药有效成分[姜黄素(Curcumin)槲皮素(Quercetin)、和厚朴酚(Honokiol)、重楼皂苷Ⅰ(Polyphyllin Ⅰ)]、单味中药(龙葵、白花蛇舌草、灵芝、薏苡仁)和中药复方(TCM-1、CFF-1、周氏芪凌方、西黄丸)对前列腺癌的干预等方面归纳整理,展现出中医药治疗前列腺癌的独特优势,以期为中医药抗前列腺癌的基础研究与临床实践的进一步探索提供依据.

目的 从磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)信号通路探讨重楼皂苷Ⅰ预防给药对心肌缺血再灌注损伤(MI/IR)大鼠的干预机制.方法 将购买的72只SPF级SD大鼠按照随机数字法分为假手术组、模型组、阿司匹林组、重楼皂苷Ⅰ低、中和高剂量组,每组12只.分组后即给予相应药物干预2周,2周后构建MI/IR模型.模型构建成功24 h后先采用动物彩色多普勒超声仪检测心脏功能,后处死大鼠收集相关组织采用HE染色观察心肌病理学、TTC法检测心肌梗死面积,试剂盒检测心功能指标[乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶同工酶MB(CK-MB)和谷草转氨酶(AST),抗氧化指标丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽(GSH)],TUNNEL染色检测心肌细胞凋亡特点,Western blot检测心肌PI3K、AKT、B细胞淋巴瘤/因子2(Bcl-2)、Bcl-2相关蛋白(Bax)蛋白表达.结果 假手术组心肌纤维排列整齐、无水肿,模型组有心肌纤维断裂,重楼皂苷Ⅰ低、中、高剂量组和阿司匹林组明显改善心肌纤维断裂情况.与假手术组相比,模型组大鼠心肌梗死面积、LVEDP、LDH、CK-MB、AST和 MDA明显升高(P＜0.05),LVDP、+dp/dtmax、-dp/dtmax、SOD和GSH明显降低(P＜0.05);相较于模型组,阿司匹林组和重楼皂苷Ⅰ低、中、高剂量组干预后,心肌梗死面积、LVEDP、LDH、CK-MB、AST 和 MDA 明显降低(P＜0.05),LVDP、+dp/dtmax、-dp/dtmax、SOD和GSH则明显升高(P＜0.05).Tunnel染色可见,假手术组几乎没有心肌细胞凋亡,而模型组呈现出明显的大量的细胞凋亡;与模型组相比,阿司匹林组和重楼皂苷Ⅰ低、中、高剂量组凋亡情况明显好转.此外,与假手术组相比,模型组大鼠心肌PI3K、AKT和Bcl-2蛋白表达均明显降低,Bax明显升高(均P＜0.05);相较于模型组,重楼皂苷Ⅰ低、中、高剂量组以及阿司匹林组PI3K、AKT和Bcl-2蛋白表达均明显升高,Bax蛋白表达明显降低(均P＜0.05).结论 重楼皂苷Ⅰ对心肌缺血再灌注损伤有一定的预防作用,其作用机理可能与其能够调节PI3K/AKT信号通路有关.

目的 建立一测多评法(quantitative analysis of multi-components by a single marker,QAMS)与 HPLC 指纹图谱及化学计量分析相结合的方法对滇重楼及其近缘种的质量进行评价.方法 建立滇重楼及其近缘种的指纹图谱并进行相似度分析、聚类分析(cluster analysis,CA)以及主成分分析(principal component analysis,PCA).以重楼皂苷Ⅶ为内标,建立重楼皂苷Ⅱ、重楼皂苷Ⅲ、重楼皂苷Ⅵ、重楼皂苷Ⅰ、重楼皂苷H、重楼皂苷D、伪原薯蓣皂苷的相对校正因子,并考察QAMS的可行性.色谱条件:采用Agilent ZORBAX SB C18色谱柱(4.6 mm × 250.0 mm,5 μm);乙腈(A)和水(B)为流动相进行梯度洗脱;流速0.8 mL/min;柱温30℃;检测波长203 nm;进样量5 μL.结果 建立了不同种重楼样品的指纹图谱,相似度分析显示不同种重楼样品的相似度介于0.646～0.913,表明不同种重楼间的化学成分及含量差异性较大;以重楼皂苷Ⅶ为内标,所建立的滇重楼QAMS含量测定方法,与外标法(external standard method,ESM)得到的结果进行比较无显著差异,确定了 QAMS在含量测定中的可行性,将QAMS应用于滇重楼近缘种的含量测定,只有长柱重楼的全部样品(CZCL01～04)和TCCL03符合《中华人民共和国药典》的质控标准;进一步以重楼样品中的8个皂苷类成分的峰面积作为变量进行聚类分析和主成分分析,聚类分析结果显示滇重楼及其近缘种样品可以聚为4类,长柱重楼、大理重楼和腾冲重楼均可自成一类,其余种重楼无法进行区分.主成分分析中46批重楼样品大体可以分为5类,大理重楼、长柱重楼、腾冲重楼各为一类,大部分滇重楼为一类,毛重楼、矮重楼、独龙重楼样品在主成分分析中无分类趋势.结论 QAMS与指纹图谱及化学计量分析相结合的方法可以完成对滇重楼及其近缘种中8种皂苷类成分的同时快速定量.并对其质量进行评价.实验建立的分析方法准确可行,可以在保护中药资源、节省时间的前提下对滇重楼及其近缘种样品的质量进行综合评价.

目的 探究重楼皂苷Ⅰ凝结细胞膜胆固醇影响肿瘤细胞对化疗药物敏感性的作用.方法 采用不同摩尔比的重楼皂苷Ⅰ与胆固醇进行体外结合实验,并培养HepG2 细胞,给予不同浓度重楼皂苷Ⅰ,检测细胞内总胆固醇含量、Filipin Ⅲ标记细胞内胆固醇,透射电镜观察细胞膜形态学变化,免疫荧光染色标记细胞膜脂筏及ABCA1,Western bolt法检测ABCA1 蛋白表达,并通过激光共聚焦与细胞流式仪检测阿霉素的吸收作用.最后,通过CCK-8 实验明确重楼皂苷Ⅰ对阿霉素的增敏作用.结果 重楼皂苷Ⅰ在体外可与胆固醇结合形成凝胶固态物;可降低HepG2 细胞总胆固醇含量,改变细胞膜形态,降低细胞膜脂筏含量并抑制外排蛋白ABCA1 表达,从而增加化疗药物阿霉素吸收提高敏感性.结论 重楼皂苷Ⅰ可凝结细胞膜胆固醇,改变细胞膜通透性使化疗药物吸收和敏感性增加.

重楼是清热解毒传统中药.重楼皂苷是重楼最主要的抗肿瘤活性成分,包括50多种化合物,其中具有抗肿瘤作用的成分为重楼皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅱ、Ⅶ等,对于治疗多种癌症效果显著,如肝癌、结肠癌、脑瘤、大肠癌、食管癌、肺癌、鼻咽癌等.这些成分主要是异螺甾烷醇型甾体皂苷类成分,以重楼皂苷Ⅰ含量最多,其次有重楼皂苷Ⅱ、薯蓣皂苷、重楼皂苷A、纤细薯蓣皂苷、重楼皂苷Ⅵ、重楼皂苷Ⅶ、重楼皂苷H、重楼皂苷E等.近年来,重楼皂苷抗肿瘤作用逐渐被发现并应用到临床中,但重楼皂苷不良反应也有报道,如重楼皂苷Ⅰ对肝脏的毒性损伤等.本文对重楼中的皂苷类成分进行分类并综述异螺甾烷醇型皂苷抗肿瘤作用机制的最新研究进展,以总结重楼皂苷抗肿瘤作用的活性成分及作用机制,为进一步研究重楼皂苷抗肿瘤作用及安全用药提供参考.

目的 基于Notch1/Hes1 通路探讨重楼皂苷Ⅰ对前列腺癌PC-3 细胞迁移、侵袭的影响及作用机制.方法 体外培养前列腺癌PC-3 细胞,设置5 组:空白组常规培养,顺铂组加入顺铂(终浓度为2.5 μg/mL)培养,重楼皂苷Ⅰ低、中、高剂量组分别加入重楼皂苷Ⅰ(终浓度分别为0.25 μg/mL、0.5 μg/mL、1.0 μg/mL)培养,培养48h后收集细胞.细胞划痕实验检测细胞迁移能力,细胞侵袭实验检测细胞侵袭能力,实时荧光定量PCR法检测细胞中Notch1、Hes1 mRNA的表达,Western blot法检测细胞中Notch1、Hes1 蛋白的表达.结果 与空白组比较,各药物组的细胞迁移距离均明显缩短(P均<0.05),侵袭细胞数均明显减少(P均<0.05);与顺铂组和重楼皂苷Ⅰ低剂量组比较,重楼皂苷Ⅰ中、高剂量组的细胞迁移距离均更短(P均<0.05),侵袭细胞数均更少(P均<0.05),且重楼皂苷Ⅰ高剂量组细胞迁移距离明显短于重楼皂苷Ⅰ中剂量组(P<0.05),侵袭细胞数明显少于重楼皂苷Ⅰ中剂量组(P<0.05).各药物组Notch1 和Hes1 mRNA及蛋白相对表达量均明显低于空白组(P均<0.05),重楼皂苷Ⅰ高剂量组均明显低于顺铂组、重楼皂苷Ⅰ低剂量组和重楼皂苷Ⅰ中剂量组(P均<0.05).结论 重楼皂苷Ⅰ具有抑制前列腺癌PC-3 细胞迁移和侵袭的作用,机制与其下调Notch 1 及下游靶基因蛋白Hes1 的表达有关.

目的 基于模式生物斑马鱼研究重楼皂苷Ⅰ的发育毒性、抗血管新生活性,并利用网络药理学探究重楼皂苷Ⅰ抗血管新生的作用机制.方法 将受精后6 h(6 h post fertilization,6hpf)的斑马鱼胚胎暴露于不同浓度的重楼皂苷Ⅰ中96 h,在实验终点确认重楼皂苷Ⅰ对斑马鱼胚胎的致死曲线,计算20％致死浓度(20％lethal concentration,LC20).在实验终点,以斑马鱼自主抽动次数、96hpf心率、斑马鱼肝脏面积、静脉窦-动脉球间距、总胆固醇(totalcholesterol,T-CHO)、三酰甘油(triglyceride,TG)、低密度脂蛋白胆固醇(low-density lipoprotein cholesterol,LDL-C)含量等指标,结合吖啶橙、油红O染色观察综合评价重楼皂苷Ⅰ的发育毒性及其相关靶器官毒性.安全剂量条件下,以斑马鱼肝脏面积和静脉窦-动脉球间距评价重楼皂苷Ⅰ对相关靶器官的影响,同时以节间血管数评价重楼皂苷Ⅰ对斑马鱼节间血管生长的影响.基于网络药理学预测重楼皂苷Ⅰ抗血管新生的作用机制并通过qRT-PCR技术进行验证.结果 重楼皂苷Ⅰ对斑马鱼胚胎的致死曲线为y=270 x-23.62,LC20为0.16 μg/mL;在亚致死浓度暴露条件下的实验终点,与对照组比较,0.16 μg/mL重楼皂苷Ⅰ能够诱导斑马鱼幼鱼出现卵黄囊吸收延迟,脊柱弯曲,尾巴畸变等明显的毒性特征,且T-CHO、TG、LDL-C含量明显升高(P＜0.05、0.01);吖啶橙染色及油红O染色表明0.16 μg/mL重楼皂苷Ⅰ能引起斑马鱼肝脏细胞凋亡和脂肪变性.在安全剂量条件下,与对照组比较,0.06、0.09 μg/mL重楼皂苷Ⅰ对主要脏器没有明显影响,但可以抑制节间血管数(P＜0.01).网络药理学预测发现重楼皂苷Ⅰ可通过调节血管内皮生长因子A(vascular endothelial growth factor A,VEGFA)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)、类固醇受体共激活因子(steroid receptor coactivator,SRC)、表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)等关键靶点,调控EGFR酪氨酸激酶抑制剂耐药性等相关信号通路,进而发挥抗血管新生的作用,qRT-PCR实验结果验证了以上靶点.结论 重楼皂苷Ⅰ过高剂量使用会造成斑马鱼胚胎发育毒性,而在安全剂量条件下,重楼皂苷Ⅰ通过调节EGFR酪氨酸激酶抑制剂耐药性等相关通路发挥明显的抗血管新生活性,为重楼皂苷Ⅰ的临床用药安全及开发利用提供了思路,同时也为毒性中药的"有效性-安全性"综合评价提供了参考.