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注射用重组白细胞抑制因子和水蛭肽嵌合蛋白处方的筛选及优化
编辑人员丨2023/9/16
目的 对注射用重组白细胞抑制因子和水蛭肽嵌合蛋白(human recombinant neutrophil inhibitory factor and hiru-log hybrid,TNHH)的处方及工艺进行筛选和优化,并考察其稳定性.方法 以单因素试验结果为依据,pH范围、甘露醇用量、聚维酮K30用量为自变量,高分子蛋白含量为响应值,采用CCF响应曲面设计试验,分析各自变量及其交互作用对注射用重组白细胞抑制因子和水蛭肽嵌合蛋白中高分子蛋白含量的影响,筛选出最优处方.为了方便操作,对最优处方调整后制备中试规模3批样品,分别置于40 ℃、相对湿度(relative humidity,RH)75％条件下2、4周,2～8 ℃条件下 3、6个月,取样,检测外观、pH、反相高效液相色谱(reversed phase-high performance liquid chromatography,RP-HPLC)纯度和体积排阻高效液相色谱(size exclusion chromatography-high performance liquid chromatography,SEC-HPLC)纯度,验证该处方和工艺的稳定性.结果 筛选出的最优处方为:pH 4.9826,甘露醇用量7.9864％,聚维酮K30用量1.9027％,最终调整为pH 5.0,甘露醇用量8.0％,聚维酮K30用量2.0％.采用优化处方和工艺制备的注射用重组白细胞抑制因子和水蛭肽嵌合蛋白制剂质量稳定,符合临床用药要求.结论 优选的注射用重组白细胞抑制因子和水蛭肽嵌合蛋白制剂处方工艺合理,适合工业化生产.
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编辑人员丨2023/9/16
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重组白细胞抑制因子和水蛭肽嵌合蛋白工程菌的高密度发酵
编辑人员丨2023/8/5
重组白细胞抑制因子和水蛭肽嵌合蛋白(TNHH)是治疗用生物制品Ⅰ类新药,具有多种功效,可用于治疗脑卒中.本文旨在优化TNHH工程菌发酵工艺,以实现该工程菌的高密度发酵和目的蛋白的高效表达.笔者采用摇瓶试验和发酵罐发酵,从培养基碳、氮源配比正交试验入手,对工程菌生长和目的蛋白表达影响较大的单因子条件进行重点考察,如温度、pH、诱导策略、诱导剂和抗生素替代及补料流加方式.通过优化,6批50 L发酵工艺稳定,菌体密度(OD600)均能达79以上,目的蛋白表达量均在30％以上,质粒丢失率均低于10％.优化后的发酵工艺稳定,产量提高258％,质粒丢失率保持在10％以内,为TNHH项目进一步大规模生产奠定了基础.
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编辑人员丨2023/8/5
