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GLP-1-IgG4-Fc融合蛋白的表达与鉴定
编辑人员丨2023/8/6
将合成的人胰高血糖素样肽-1(glucagon-like peptide-1,GLP-1)突变体基因与IgG4抗体的Fc部分进行融合获得GLP-1-IgG4-Fc片段,获得的基因片段与pXC17.4载体进行连接,用电转化方法将线性化质粒稳定转染CHO-K1细胞,通过ClonePix 2筛选出高表达细胞株,产量达1.5g/L.收集培养上清并经Protein A和Source 30Q纯化,得到的GLP-1-IgG4-Fc融合蛋白,SDS-PAGE纯度高于95％,高效液相色谱(high performance liquid chromatography,HPLC)纯度和毛细管区域凝胶电泳(capillary zone electrophoresis,CZE)纯度均不低于80％,尺寸排阻层析(size-exclusionchromatography,SEC)纯度高于99％.经质谱和肽图谱测定,分子量与理论值一致,肽图谱序列与对照品高度一致.生物学活性分析表明,GLP-1-IgG4-Fc融合蛋白具有促进表达有GLP-1受体的HEK293细胞分泌环磷酸腺苷(cyclic adenosine monophosphate,cAMP)的活性,并且该活性与对照品高度相似.
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编辑人员丨2023/8/6
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液质联用对重组胰高血糖素样肽-1-Fc融合蛋白中的制品相关蛋白进行定性定量分析
编辑人员丨2023/8/6
目的:对重组胰高血糖素样肽-1-Fc融合蛋白(rGLP-1-Fc)的制品相关蛋白进行定性及定量分析.方法:利用液质联用法,对rGLP-1-Fc原液中制品相关蛋白的修饰类型进行鉴定;通过胰蛋白酶酶切液质肽图的方法,对修饰位点进行鉴定;采用反相超高效液相色谱法,测定3批原液中制品相关蛋白的比例.结果:该蛋白原液中主要存在3种制品相关蛋白;液质联用检测结果显示:1种为氧化及糖化的修饰产物,另外2种为一条二硫键解链导致的变异体;液质肽图分析发现氧化及糖化发生在第28位赖氨酸残基;对3批原液进行了检测,3种制品相关蛋白的平均含量分别为(2.37±0.04)％、(9.07±0.20)％和(4.03±0.07)％.结论:利用液质联用技术对rGLP-1-Fc原液中的制品相关蛋白进行了初步的定性、定量分析,测定结果可为同类产品的制品相关蛋白分析提供技术支持.
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编辑人员丨2023/8/6
