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管式磁微粒非洲猪瘟病毒pp62蛋白化学发光抗体检测方法的建立
编辑人员丨2024/4/6
[背景]非洲猪瘟(African swine fever,ASF)作为高致病性传染病,给我国生猪养殖业造成了严重的经济损失,因此建立快捷、灵敏的诊断方法至关重要.[目的]建立一种管式非洲猪瘟病毒pp62 蛋白化学发光抗体检测方法.[方法]以重组pp62 蛋白作为包被抗原,羧基磁珠(carboxylic magnetic beads)作为固相载体,碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,AP)标记的兔抗猪IgG作为酶标二抗,通过对反应条件进行优化,采用非洲猪瘟国家参考品作为溯源血清绘制出标准曲线,建立基于ASFV pp62 蛋白的化学发光抗体检测方法.[结果]用建立的化学发光方法检测 277 份临床样品血清,通过受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线分析确定阴性、阳性临界值,并确定判定标准:浓度值>140.02 U时为抗体阳性,浓度值<140.02 U时为抗体阴性.此方法对 6 种不同的病原血清抗体进行检测均无交叉反应,且批内和批间变异系数均在 10%以内,与商品化非洲猪瘟抗体检测试剂盒的符合率达 96.7%.[结论]本研究建立的管式非洲猪瘟病毒化学发光抗体检测方法具有良好的特异性、敏感性和重复性,可为非洲猪瘟早期监测及试剂盒研发提供参考.
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编辑人员丨2024/4/6
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非洲猪瘟病毒pS273R蛋白酶的可溶性表达与胞外活性鉴定
编辑人员丨2023/8/5
pS273R是ASFV编码的涉及多聚蛋白切割的蛋白酶,也是ASFV核心壳层的组成成分.利用分子伴侣在大肠杆菌表达非洲猪瘟pS273R蛋白酶,IPTG诱导可表达可溶性pS273R重组蛋白,分子量约31 kD.经Western Blot鉴定,表达的蛋白可与ASF阳性血清发生特异性反应,能够酶切杆状病毒表达的pp62,具有胞外活性.这些结果为研究ASFV组装机制和病毒复制抑制药物的开发提供了重要的生物材料.
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编辑人员丨2023/8/5
