目前,动物疫苗佐剂主要以铝佐剂和油乳佐剂为主,存在免疫效果差、副作用明显等问题,亟须安全有效的新型佐剂替代.随着纳米颗粒在佐剂应用领域研究的深入,其良好的免疫增强作用、生物相容性、纳米尺寸效应、抗原负载能力、抗原缓释效应和组织靶向性等优势引起了研究人员的极大关注,有望作为新型动物疫苗佐剂用于动物疾病防治.迄今为止,针对如猪繁殖与呼吸障碍综合征、猪流行性腹泻、非洲猪瘟、牛病毒性腹泻、口蹄疫、禽流感和新城疫等重要动物传染病纳米疫苗的研究取得了重大进展.综述总结了国内外动物疫苗纳米颗粒佐剂的应用及作用机制,分析了影响纳米颗粒佐剂免疫增强效果的理化因素,以期为新型动物疫苗佐剂研制及开发提供参考.

非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)拥有多种逃逸宿主免疫应答的策略,造成病毒难以被宿主清除.cGAS-STING信号通路介导的天然免疫在抗ASFV感染中发挥了重要作用,然而病毒编码的多个蛋白靶向该通路中的不同分子以拮抗宿主的I型干扰素应答.利用基因编辑技术敲除这些病毒基因后,ASFV对宿主的致病性降低,成为基因缺失疫苗的研制潜在靶点.本文对目前已知参与调控宿主cGAS-STING信号通路的病毒蛋白进行总结,旨在阐明这些蛋白免疫逃逸cGAS-STING信号通路的分子机制,加深对ASFV免疫逃逸策略的理解,以期为ASFV致病机制研究与疫苗创制提供参考.

[背景]非洲猪瘟(African swine fever,ASF)作为高致病性传染病,给我国生猪养殖业造成了严重的经济损失,因此建立快捷、灵敏的诊断方法至关重要.[目的]建立一种管式非洲猪瘟病毒pp62 蛋白化学发光抗体检测方法.[方法]以重组pp62 蛋白作为包被抗原,羧基磁珠(carboxylic magnetic beads)作为固相载体,碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,AP)标记的兔抗猪IgG作为酶标二抗,通过对反应条件进行优化,采用非洲猪瘟国家参考品作为溯源血清绘制出标准曲线,建立基于ASFV pp62 蛋白的化学发光抗体检测方法.[结果]用建立的化学发光方法检测 277 份临床样品血清,通过受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线分析确定阴性、阳性临界值,并确定判定标准:浓度值>140.02 U时为抗体阳性,浓度值<140.02 U时为抗体阴性.此方法对 6 种不同的病原血清抗体进行检测均无交叉反应,且批内和批间变异系数均在 10%以内,与商品化非洲猪瘟抗体检测试剂盒的符合率达 96.7%.[结论]本研究建立的管式非洲猪瘟病毒化学发光抗体检测方法具有良好的特异性、敏感性和重复性,可为非洲猪瘟早期监测及试剂盒研发提供参考.

本研究旨在探究非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)I226R 蛋白(I226R protein,pI226R)抑制 cGAS-STING信号通路的作用机制.利用双荧光素酶报告系统和实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR,qPCR)证明pI226R显著抑制cGAS-STING通路介导的I型干扰素及干扰素刺激相关基因的产生.免疫共沉淀及激光共聚焦显微镜试验发现pI226R与cGAS蛋白相互作用.免疫印迹分析证明 pI226R 通过自噬-溶酶体途径促进 cGAS 蛋白的降解.同时,pI226R阻碍了cGAS与E3 泛素连接酶三基序蛋白 56(tripartite motif protein 56,TRIM56)的结合,导致cGAS的单泛素化减弱,从而抑制了cGAS的活化和cGAS-STING通路的激活.总之,本研究证明ASFV pI226R通过拮抗cGAS进而抑制宿主的抗病毒天然免疫反应,进一步增加了对研究ASFV免疫逃逸机制的理解,为疫苗的研发提供了理论基础.

非洲猪瘟(African swine fever,ASF)是由非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)感染猪而引起的一种急性、烈性传染病.2018年,我国发生的ASF疫情对养猪业造成了严重经济损失.目前尚无有效药物和疫苗用于治疗和预防ASF,主要通过临床诊断和扑杀感染动物来控制疫情传播.建立快速、精准和高效的诊断方法对于疫病防控至关重要.综述当前国内外ASF诊断方法的研究进展,重点阐述诊断靶标的选择以及病原学、血清学检测方法的研究现状,为ASF新型诊断方法的研发提供参考.

[目的]非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)能导致猪群高死亡率,从而造成严重的经济损失.因此,建立严密、高效的防控系统,包括灵敏、准确的诊断方法以及高效的预报预警机制等,以避免ASF传入我国.本文旨在建立一种新型而高灵敏度的ASFV微滴数字PCR (Droplet digital PCR,ddPCR)检测方法.[方法]针对ASFV K205R基因设计一对特异性引物和TaqMan探针,通过反应条件优化,建立了ASFV实时荧光定量PCR (qPCR)和ddPCR检测方法;并对两种方法的线性关系、灵敏性、特异性和重复性进行了评估,利用建立的ASFV检测方法对163份国内和进境的组织样本及血清样本进行检测,血清样本经商品化ASFVELISA试剂盒复检,评估不同方法检测结果的符合率. [结果]建立的ASFV qPCR和ddPCR检测方法线性关系较好(R2≥0.998),ddPCR的最低检测限度可达到0.36拷贝,在20 μL反应体系中约为10拷贝/反应,检测灵敏度是qPCR的10倍.ASFV ddPCR检测方法具有很高的特异性和重复性,不与其他猪常见病毒发生交叉反应.[结论]该方法灵敏度高、特异性强,可作为一种有效的分子生物学方法来诊断ASFV,为防止该病传入我国以及ASFV的实时监测提供新的技术储备,同时促进ddPCR技术在我国的发展和应用.

非洲猪瘟(African swine fever,ASF)由非洲猪瘟病毒(ASFV)引起,是家猪和野猪的一种高度接触性、致死性传染病,可表现为最急性、急性、亚急性和慢性四种形式.猪感染后以发热、高病毒血症和出血性病变为特征.有的毒株可引起高发病率和高死亡率.自2007年ASF传入格鲁吉亚以来,该病在高加索地区(包括俄罗斯)逐步蔓延,造成多地大量家猪和野猪病死,经济损失惨重.2017年3月,ASF突然在远东地区伊尔库茨克州出现,疫点距中国北方最大陆路口岸满洲里仅约1 000km,使得传入中国的风险空前提高.为此,本文对该病10年间在俄罗斯的流行状况和研究情况进行总结,以期为我国对该病的防控提供参考.

非洲猪瘟是世界动物卫生组织( OIE)强制声明的一种具有高度传染性的病毒性疾病. 缺乏可用的疫苗使这种疾病很难控制,因此,非洲猪瘟病毒( AS-FV)成为养猪业的一大主要威胁. 灭活疫苗并不会对ASFV提供坚实有力的保护. 相反,减毒活病毒( LAV) ,无论是自然分离的还是通过基因操作获得的,都证明了具有对同源ASFV病毒株的可靠保护力,尽管对异种病毒的保护力很低或没有保护力.

核酸检测技术在非洲猪瘟的诊断和监测中应用普遍,是国际兽医组织和我国指定的检测技术.非洲猪瘟病毒(African swine fever,ASFV) VP72基因是其核酸检测的通用靶基因,参照GenBank中AFSV Georgia 2007毒株VP72基因序列,体外合成VP72全基因片段,克隆于pMD20-T载体,经工艺研究,研制了ASFV核酸能力验证样品,均匀性和稳定性检验结果表明,样品均匀、稳定,满足中国合格评定国家认可委员会对能力验证样品的要求.为评价我国各级兽医实验室对非洲猪瘟的核酸检测能力,组织实施了能力验证计划《非洲猪瘟病毒核酸检测》(CNCA-17-A03).将能力验证样品编号后下发给参试实验室,共有20个省、市的30家实验室参试,结果显示所有实验室均获得满意结果.同时,能力验证计划中也发现存在缺乏荧光PCR国家标准,核酸标准样品供应不足等问题.建议及时修订完善国家标准,并尽快研制非洲猪瘟(AFS)核酸有证标准样品.

蜱能够传播多种病毒,已知有6个病毒科的病毒能通过蜱虫吸血传播,分别是黄病毒科、布尼亚病毒科、正粘病毒科、弹状病毒科、呼肠孤病毒科和非洲猪瘟病毒科.除非洲猪瘟病毒科外,其余病毒均为核糖核酸(RNA)病毒.黄病毒科和布尼亚病毒科病毒可在人类引起脑炎和出血热,因此其意义尤为重要.森林脑炎病毒、波瓦生病毒和克里米亚-刚果热病毒等蜱传病毒引起的人畜共患疾病,近年来在世界上多个地区重新流行.新型蜱传病毒及相关病例不断被发现,例如我国发现的发热伴血小板减少综合征病毒(SFTSV)以及国外发现的Heartland和波本(Bourbon)病毒等,引起了医学界的广泛重视.随着人类对自然资源的开发,与自然界蜱的接触机会日益增加,导致蜱传病毒性疾病的发病率上升.为了做好及时应对这种潜在公共健康威胁的准备,本文对蜱及其携带的重要病毒特点进行了综述.