目的:观察在体人参皂苷Rb1预处理对慢性低氧(CH)肺动脉高压大鼠肺动脉平滑肌细胞钙库操纵性钙内流(SOCE)的影响.方法:将30只雄性SD大鼠随机分为正常对照组(control组)、CH肺动脉高压模型组(CH组)和Rb1(30 mg/kg)组,每组10只.检测各组右心室收缩压、右心室质量指数和肺动脉血管环张力.体外培养大鼠肺动脉平滑肌细胞,采用细胞动态荧光检测游离Ca2+浓度.分别采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和western blotting检测基质相互作用分子2(STIM2)和钙释放激活钙调节因子 2(Orai2)基因和蛋白表达.结果:与CH组比较,Rb1组大鼠右心室收缩压和右心室质量指数均明显降低(P＜0.01),环匹阿尼酸(CPA)诱发的肺动脉收缩张力和钙内流量明显减少(P＜0.01),STIM2和Orai2 mRNA和蛋白相对表达量明显降低(P＜0.05).结论:Rb1可明显改善CH肺动脉高压大鼠的肺动脉压,其作用机制可能与减弱肺动脉SOCE功能和STIM2和Orai2表达有关.

目的 探讨细胞外热休克蛋白90α(eHsp90α)对肝癌细胞转移的影响及机制.方法 Western blot检测细胞培养基上清中eHsp90α的水平和细胞中基质相互作用分子1(STIM1)蛋白表达,Confocal检测钙库操作性钙离子内流(SOCE)活性,免疫荧光双染检测STIM1和ORAI1的相互作用水平,Transwell和划痕实验检测细胞转移能力.结果 肝癌细胞系中eHsp90α较正常肝细胞系LO-2显著增加;高度转移能力的MHCC87H和HCCLM3细胞中eHsp90α水平、STIM1蛋白表达和SOCE活性较低转移能力的HepG2、HL-7702和SNU-449显著升高.hrHsp90α可以显著增加HepG2的转移能力、STIM1蛋白变化和SOCE活性.敲低STIM1蛋白表达或抑制SOCE活性,可以抑制MHCC87H的转移能力和hrHsp90α诱导的HepG2转移能力增加.结论 eHsp90α可促进肝癌细胞的转移,其机制是通过诱导STIM1蛋白表达,进而增加SOCE活性.

目的 探究杜鹃花总黄酮(TFR)对急性脑缺血/再灌注损伤大鼠STIM-Orai调控的G蛋白偶联钙库操作性Ca2+内流(SOCE)通路的影响.方法 将SD大鼠随机分为假手术(Sham)组、模型(MCAO)组、TFR组、TFR+2-氨基乙基联苯基硼酸酯(2-APB)组、2-APB组,每组各8只.ELISA检测大鼠血清中IL-1、IL-6、TNF-α的活性;HE染色检测大鼠缺血脑组织的病理变化;TTC染色观察大鼠脑组织梗死情况;Western blot和RT-qPCR分别检测脑组织STIM1、STIM2、Orai1、caspase-3、PKB的蛋白及mRNA表达水平.结果 TFR组大鼠神经功能评分相较于MCAO组明显降低,脑组织病理损伤明显改善,梗死率明显降低,血清中IL-1、IL-6、TNF-α的活性明显降低,脑组织中STIM1、STIM2、Orai1、caspase-3蛋白及mRNA表达明显下调,PKB明显上调,而加入SOCE通道抑制剂后,以上作用进一步加强.结论 TFR可减轻MCAO大鼠脑损伤,机制可能与其抑制脑组织SOCE通路,降低炎症介质活性,减少Ca2+超载和细胞凋亡等有关.

探究杜鹃花总黄酮(total flavonoids of Rhododendron simsii,TFR)减轻大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤(cerebral ischemia-reperfusion injury,CIRI)的保护作用及其与钙离子传感器基质相互作用分子(stromal interaction molecule,STIM)和钙释放激活钙通道调节分子(calcium release-activated calcium modulator,Orai)调控的钙库操作性钙离子内流(store-operated calcium entry,SOCE)通路之间的关系.大鼠随机分为假手术(sham)组、模型(MCAO)组、TFR(60 mg·kg-1)组、TFR(60 mg·kg-1)+SOCE通路阻断剂 2-氨基乙基联苯基硼酸酯(2-aminoethoxydiphenyl borate,2-APB)(2.5 mg·kg-1)组、2-APB(2.5 mg·kg-1)组.sham 组、MCAO组大鼠给予生理盐水,用药组给予TFR(60 mg·kg-1),连续灌胃14 d直至取材,SOCE通道阻断剂2-APB(2.5 mg·kg-1)术后给予腹腔注射.ELISA法检测大鼠血清中白细胞介素-1(interleukin-1,IL-1)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)的活性;TTC染色检测大鼠的脑组织梗死情况;HE染色检测大鼠缺血脑组织的病理状况;Western blot和RT-qPCR技术分别检测脑组织STIM1、STIM2、Orai1、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(cysteinyl aspartate specific proteinase 3,caspase-3)、蛋白激酶B(protein kinase B,PKB)的蛋白及mRNA表达水平;免疫荧光检测大鼠脑神经元的生长情况.结果显示,相较于MCAO组TFR组大鼠神经功能评分明显降低,脑组织病理损伤显著改善,梗死面积明显减少,血清中IL-1、IL-6、TNF-α的活性显著降低,脑组织中STIM1、STIM2、Orai1、PKB蛋白及mRNA表达显著上调,caspase-3表达显著下调,在荧光显微镜下可观察到双标阳性细胞增多;而加入2-APB后,以上作用明显减弱.综上结果表明,TFR可能通过上调SOCE通道相关信号分子的基因表达,诱导缺血区周边的神经发生,改善缺血区周边的神经元生存状态,抑制炎症因子活性,从而发挥对抗局灶性脑缺血再灌注损伤的作用.