目的 探究敲减钙离子/钙调蛋白依赖性激酶Ⅳ(CaMKⅣ)基因对炎性培养条件下C2C12细胞免疫分子表达的影响.方法 采用慢病毒基因干扰技术敲减C2C12细胞的CaMKⅣ基因,以2％马血清将C2C12细胞分化成肌管,以干扰素-γ(IFN-γ)刺激C2C12细胞,采用Real-time PCR和Western blotting检测CaMKⅣ的表达,采用Western blotting和免疫荧光检测免疫分子主要组织相容性复合体(MHC) class Ⅰ(H-2Kb)、MHC classⅡ(H2-Ea)、Toll样受体3(TLR3)的表达,采用Real-time检测肌细胞分泌型促炎性细胞因子白细胞介素(IL)-1β、IL-6、肿瘤坏死因子(TNF)-α、巨噬细胞炎性蛋白(MIP)-1α和单核细胞趋化因子(MCP)-1的基因表达.结果 IFN-γ可诱导成肌干细胞以及分化肌管表达或上调表达免疫分子MHC-Ⅰ、MHC-Ⅱ、TLR3,同时上调C2C12细胞促炎性细胞因子IL-1β、IL-6、TNF-α、MIP-1α和MCP-1的基因表达量;敲减CaMKⅣ基因导致上述上调趋势被抑制.结论 敲减CaMKⅣ基因可有效抑制IFN-γ诱导的免疫分子的表达,可能提示CaMKⅣ参与调节肌细胞的免疫学特性.

目的:研究黄芪甲苷(ASⅣ)对微小RNA-1(miRNA-1)过表达诱导大鼠心力衰竭(HF)的保护作用,探讨其可能的作用机制.方法:将32只SD大鼠随机分为正常对照组、miRNA-1 mimics阴性病毒对照(miRNA-1 mimics NC)组、miRNA-1 mimics组和ASⅣ+miRNA-1组,每组8只.通过左心室壁注射miRNA-1慢病毒建立大鼠HF模型.超声心动图检测各组大鼠左心室射血分数(EF)和左心室短轴缩短率(FS),实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测各组大鼠心肌组织中miRNA-1表达水平.将H9C2心肌细胞分为正常对照组、miRNA-1 mimics阴性病毒对照(miRNA-1 mimics NC)组、miRNA-1 mimics组和ASⅣ+miRNA-1 mimics组.采用miRNA-1慢病毒感染H9C2心肌细胞,RT-qPCR法检测H9C2心肌细胞中miRNA-1表达水平,MTT法测定各组大鼠H9C2心肌细胞存活率并筛选ASⅣ的最适浓度,钙测试盒检测各组大鼠心肌H9C2细胞中钙离子(Ca2+)水平,RT-qPCR法检测各组大鼠心肌H9C2细胞中钙离子/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)和兰尼碱受体2(RyR2)mRNA表达水平,Western blotting法检测各组大鼠心肌H9C2细胞中CaMKⅡ和RyR2蛋白表达水平.结果:与正常对照组和miRNA-1 mimics NC组比较,miRNA-1 mimics组大鼠心肌组织中miRNA-1表达水平明显升高(P<0.01),EF和FS明显降低(P<0.01);与miRNA-1 mimics组比较,ASⅣ+miRNA-1 mimics组大鼠心肌组织中miRNA-1表达水平明显降低(P<0.01),EF和FS明显升高(P<0.01).与正常对照组和miRNA-1 mimics NC组比较,miRNA-1 mimics组大鼠H9C2心肌细胞中miRNA-1表达水平和Ca2+水平明显升高(P<0.01),CaMKⅡmRNA和蛋白表达水平明显升高(P<0.01),RyR2 mRNA和蛋白表达水平明显降低(P<0.01);与miRNA-1 mimics组比较,ASⅣ+miRNA-1 mimics组大鼠H9C2心肌细胞中miRNA-1表达水平、Ca2+水平和CaMKⅡmRNA和蛋白表达水平明显降低(P<0.01),RyR2 mRNA和蛋白表达水平均明显升高(P<0.01).结论:ASⅣ可能是通过下调miRNA-1的表达,参与心肌细胞中Ca2+水平的调控,进而改善HF,起到心脏保护作用.