目的:探讨雷帕霉素靶蛋白（mTOR）在镧致子代大鼠大脑皮质神经细胞损伤中的作用及对仔鼠大脑发育和学习记忆的影响。方法:选择成年雌、雄性Wistar大鼠各32只，按体重采用随机数字表法分为4组，每组16只，雌雄各半。雌鼠分别饮用不同含量的氯化镧溶液[0.0（对照）、2.5、5.0、10.0 g/L]，而雄鼠正常饮水。将雌鼠和雄鼠按照1∶1方式入笼进行交配，雌性大鼠自妊娠期开始染镧，其仔鼠染镧至断乳后4周。对4组仔鼠进行Morris水迷宫实验，通过空间探索观察镧对仔鼠学习记忆的影响；取仔鼠大脑皮层，尼氏染色后镜下观察皮质尼氏体数量变化。采用实时荧光定量PCR法测定仔鼠大脑皮层神经细胞mTOR mRNA表达水平；采用蛋白免疫印迹（Western blot）法检测仔鼠皮质神经细胞磷酸化mTOR（p-mTOR）蛋白含量。结果:与对照组[（121.75 ± 11.20）g、（1.43 ± 0.10）%、（0.86 ± 0.08）%]比较，2.5、5.0、10.0 g/L染镧组仔鼠体重明显下降[（110.00 ± 11.59）、（98.88 ± 7.95）、（85.63 ± 7.25）g， P均< 0.05]；脑组织系数、皮质系数明显升高[（1.56 ± 0.18）%、（1.66 ± 0.14）%、（1.89 ± 0.16）%，（0.94 ± 0.08）%、（1.01 ± 0.07）%、（1.08 ± 0.09）%， P均< 0.05]。5.0、10.0 g/L染镧组脑重[（1.63 ± 0.05）、（1.61 ± 0.03）g]明显低于对照组和2.5 g/L染镧组[（1.73 ± 0.06）、（1.70 ± 0.06）g， P均< 0.05]。与对照组（53.25 ± 9.93）比较，各染镧组仔鼠大脑皮质神经细胞尼氏体数量（36.13 ± 3.98、27.50 ± 5.21、13.63 ± 5.93）明显下降（ P均< 0.05）。空间探索实验结果显示，与对照组[（5.75 ± 1.98）次、（10.69 ± 2.96）s、（3.75 ± 1.28）次]比较，10.0 g/L染镧组仔鼠穿过目标象限次数[（3.63 ± 1.41）次]、在目标象限停留时间[（5.12 ± 2.09）s]明显降低（ P均< 0.05），5.0、10.0 g/L染镧组仔鼠穿过平台次数[（1.88 ± 0.84）、（1.13 ± 1.12）次]明显降低（ P均< 0.05）。皮质组织mTOR mRNA（1.00 ± 0.28、0.74 ± 0.19、0.58 ± 0.13、0.45 ± 0.29）和p-mTOR蛋白表达水平（0.69 ± 0.07、0.33 ± 0.06、0.30 ± 0.04、0.17 ± 0.03）组间比较差异有统计学意义（ F = 8.33、139.12， P均< 0.05）。 结论:镧暴露可损伤皮质神经细胞，影响仔鼠大脑发育。镧通过降低仔鼠大脑mTOR mRNA和p-mTOR蛋白表达水平以及空间探索观察能力，致仔鼠学习记忆能力下降。

抗dsDNA抗体是系统性红斑狼疮的诊断标准之一[1].在系统性红斑狼疮中,抗dsDNA抗体阳性率为60% ~90%,浓度随着疾病的活动和缓解而升高和降低.抗dsDNA抗体浓度的检测对于系统性红斑狼疮的诊断和预后判断有重要意义.目前检测抗 dsDNA 抗体的方法有间接免疫荧光法(IIF)、酶联免疫吸附试验方法(ELISA)及放射免疫法(Farr).近几年,时间分辨荧光免疫(time-resolved fluoroim-munoassay,TRFIA)被广泛应用于多种抗原抗体的定量检测[2-3].时间分辨荧光免疫技术利用镧系元素螯合物的荧光寿命长,Stokes位移大,荧光强度高等独特的荧光特性,在背景荧光已经降到很低时再开始检测特异的阳性信号,确保检测信号特异性的同时,应用解离-增强原理进一步增加了该检测的灵敏度,检测下限可达5×10-14mol/L.

目的 观察氯化镧(LaCl3)对星形胶质细胞兴奋性的影响,探讨其神经毒作用机制.方法 雌性Wistar大鼠40只,随机分为5组,对照组饮用蒸馏水,染镧组分别饮用含有不同浓度氯化镧(0.125％、0.250％、0.500％和1.000％)的蒸馏水溶液,从雌鼠妊娠起到仔鼠断乳后1个月结束.采用Fura-2荧光探针法检测仔鼠大脑海马神经细胞内Ca2+浓度;酶联免疫分析(ELISA)法测定1,4,5-三磷酸肌醇(IP3)含量;实时定量PCR法测定促代谢性谷氨酸受体5(mGluR5)、磷脂酶C(PLC)和缝隙连接蛋白(Cx43) mRNA转录水平;Western blot法测定mGluR5、PLC和Cx43蛋白表达水平.结果 与对照组比较,随氯化镧染毒剂量增加,染镧组仔鼠海马神经细胞内Ca2+浓度与IP3含量趋势性升高,呈剂量效应关系(P＜ 0.05);与对照组比较,各剂量染镧组大鼠仔鼠海马神经元内mGluR5、PLC和Cx43 mRNA表达上调,mGluR5、PLC和Cx43蛋白表达水平显著上调,呈剂量效应关系(P＜0.05).结论 氯化镧可致大鼠仔鼠脑海马星形胶质细胞过度兴奋,诱发兴奋性毒性,进而造成神经元损伤.

稀土污染已成为制约农业发展的一种重要因素,为探讨外源过氧化氢(H2O2)缓解裸燕麦镧(La)胁迫伤害的光合生理机制,以‘白燕7号’裸燕麦幼苗为材料,采用砂培方法,研究了5 mmol/L H2O2喷施预处理对1.20 mmol/L La3+胁迫下裸燕麦幼苗生长、叶片叶绿素荧光参数和碳同化关键酶活性的影响.结果 表明:La胁迫下,H2O2预处理的裸燕麦幼苗根长、株高和生长量的降幅及叶片叶黄素循环脱环氧化状态(A+Z)/(V+A+Z)显著下降,PSⅡ最大光化学效率(Fv/Fm)、实际光化学效率(ΦPSⅡ)、光化学猝灭系数(qP)和吸收光能用于光化学反应的份额(P)显著提高,PSⅡ非光化学猝灭系数(NPQ)、调节性能量耗散Y(NPQ)、非调节性能量耗散Y(NO)、吸收光能用于天线热耗散的份额(D)、PSⅡ反应中心非光化学耗散的份额(Ex)和双光系统间激发能分配不平衡偏离系数(β/α-1)明显降低,同时1,5-二磷酸核酮糖羧化酶(Rubisco)、1,7-二磷酸景天庚酮糖酯酶(SBPase)和1,6-二磷酸果糖醛缩酶(FBAase)活性显著提高,但转酮醇酶(TKase)活性无显著变化.表明外源H2O2能够通过提高PSⅡ光化学效率和碳同化关键酶活性而非依赖叶黄素循环的热耗散来减轻La胁迫导致的光抑制,从而缓解La胁迫幼苗生长的受抑程度,增强裸燕麦对La胁迫的适应性.

稀土元素也称镧系元素,因其独特的发光性质和配位性质,其发光复合物被广泛研究于生物技术领域.其中稀土铽(Ⅲ)离子复合物因具有优异的光谱特性,关于其研究呈现出快速的发展趋势.主要从其发光特性的角度出发,探讨了其发光机理,并对铽(Ⅲ)离子与不同有机化合物结合形成的发光铽配合物以及铽(Ⅲ)离子及其配合物与不同纳米材料形成的复合物进行了分类综述.此外,还详细地阐述了铽离子及其复合物在荧光探针、生物传感器、药物递送、细胞成像、癌症治疗等相关领域的应用.最后,对其今后发展趋势和潜在的研究价值进行了展望.

基于镧系元素Eu微球标记技术建立了一种猪瘟病毒抗体检测的免疫层析方法.通过对反应体系中包被浓度、复溶浓度以及反应时间等因素进行优化,确定最适的反应条件,建立检测方法,然后通过从敏感性、特异性、重复性、临床评价等方面对其进行性能评价.对反应体系进行优化,最终确定包被浓度为0.1 mg/mL,复溶浓度为6倍稀释,检测时间为15 min.通过对试纸条的性能评价可以得出,猪瘟病毒抗体荧光检测试纸条的敏感性为猪瘟阳性血清国家参考品倍比稀释至1:128倍仍可以检测到;对常见的猪繁殖与呼吸综合征、猪I型疱疹病毒、猪口蹄疫、猪圆环病毒2型、猪流行性腹泻、牛病毒性腹泻病毒、羊边界病毒等抗体阳性血清无交叉反应;批内和批内变异系数均小于10％;经临床评价,与商品化的猪瘟病毒抗体ELISA检测试剂盒相比阳性符合率为90％,阴性符合率为100％,总符合率为97.7％;与荧光抗体中和试验(FVNT)的阴性符合率为100％,阳性符合率为93％,总符合率为98.5％.综合评定认为本研究建立的猪瘟病毒抗体纳米荧光检测方法,符合各项性能参数,可以快速、经济、方便地对猪个体及群体进行猪瘟病毒抗体检测评估,可广泛应用于猪场管理中.

目的 利用镧系荧光技术建立定量检测A型肉毒毒素方法,并验证该方法的检测效果.方法 分别用A型肉毒毒素单克隆抗体和鸡IgY抗体标记镧系荧光纳米微球,在硝酸纤维素膜上包被A型肉毒毒素多克隆抗体作为检测线,包被山羊抗鸡IgY的IgG抗体作为质控线,建立A型肉毒毒素检测方法,分析方法的准确度、特异性、灵敏度和可重复性.结果 建立的A型肉毒毒素镧系荧光法可在20 min内完成检测,灵敏度为5 IU/ml,与黄曲霉素B1、呕吐毒素、T2毒素、相思子毒素和蓖麻毒素无交叉反应,批内重复性和批间重复性变异系数均小于15％.结论 镧系荧光法的建立为A型肉毒毒素快速、高效检测提供了可靠保障.

目的 利用时间分辨荧光技术建立一种可快速、准确地对蓖麻毒素、A型肉毒毒素及产气荚膜梭菌ε毒素进行定量检测的方法.方法 首先合成了一种可见光激发的镧系荧光微球,通过比较不同粒径的铕离子荧光微球,筛选出最佳粒径的微球偶联标记效价最高的捕获抗体,分别与相应检测抗体平行组合,确定最优的配伍组合条件建立检测方法.其次,对该法的敏感性、精密性、定量能力和特异性进行评价.结果 所建立的时间分辨荧光免疫层析法(TRFIC)可在20 min内完成对3种生物毒素的定性/定量检测.3种毒素的最低检出限均可达0.5 ng/ml,定量范围为0.5～50 ng/ml,3种毒素间及与黄曲霉毒素B1、T-2毒素均无交叉反应,批内重复性和批间重复性变异系数均小于15％.结论 该研究建立了一种基于可见光激发的TRFIC,在生物毒素的检测中获得了较高的最低检测限,与配套的小型便携式检测仪器一起使用,具有检测快速、可远程传输结果的优势,未来在生物反恐、生物武器核查等领域具有较高的应用价值和应用前景.

目的 建立解离-增强镧系荧光免疫分析(dissociation enhanced lanthanide fluorescent immunoassay,DELFIA)检测129位丝氨酸磷酸化α-突触核蛋白的方法及初步应用.方法 使用体外蛋白重组技术纯化得到人源α-syn蛋白单体(α-syn),用Polo样激酶催化α-syn获得磷酸化α-syn单体(phosphorylatedα-syn monomer,p-α-syn),用4-氧代壬烯醛制备α-syn聚集体(aggregates ofα-syn,OW)及磷酸化α-syn聚集体(aggregates of p-α-syn,OP).使用Western blotting法和间接ELISA方法验证本实验室前期制备的识别α-syn蛋白N端的多克隆抗体SN16和识别129位丝氨酸磷酸化α-syn蛋白的单克隆抗体C140S.使用SN16作为捕获抗体,C140S作为检测抗体的双抗夹心DELFIA法建立检测OP的标准曲线,并检测Thy1-α-SYN转基因小鼠血浆内OP的变化.结果 考马斯亮蓝染色和Western blotting法检测结果显示体外纯化的人源α-syn蛋白单体(17000)纯度高,并通过催化获得了p-α-syn、OW和OP纯蛋白,均可用作建立标准曲线的标准抗原.Western blotting和酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)结果显示SN16对α-syn、p-α-syn、OW、OP这4种形式的蛋白均可识别,C140S可以识别p-α-syn和OP,说明SN16和C140S可以用作双抗夹心法的配对抗体.间接DELFIA检测结果显示C140S对OP的识别效率更好.双抗夹心DELFIA检测结果显示,SN16-C140S作为配对抗体检测标准抗原的范围为:0.625～20 ng/mL,并建立了检测OP的标准曲线.Wt及Tg组小鼠血浆中OP在12月龄均较6月龄有所增加(P<0.001),Tg组6月龄小鼠血浆中OP显著高于同月龄Wt组(P<0.001),Tg组12月龄小鼠血浆OP较Wt组有增高的趋势,但差异无统计学意义(P>0.05).结论 本文建立的SN16-C140S配对的双抗夹心DELFIA体系可以检测Thy1-α-SYN转基因小鼠血浆中聚集的磷酸化α-syn变化情况.

时间分辨荧光免疫分析法以Eu3 +等镧系元素为示踪剂，具有简便、快速、标记物稳定、非放射性、分析灵敏度高和特异性强等优点。本文就其在传染病学中应用的研究概况作一简述。