目的 土鳖虫为伤科要药,临床多以雌虫干燥体入药,本文旨在对比雌雄干燥体对外伤血瘀证的作用差异,为土鳖虫的临床用药提供实验依据.方法 将50 只雄性Wistar大鼠随机分为 5 组,每组 10 只.除正常组外,其余各组大鼠均用重物坠落的方法制备外伤血瘀证模型.采用治疗型给药原则,雌虫组、雄虫组、雌雄虫组大鼠每天灌胃给予雌虫水煎液(1g生药/kg)、雄虫水煎液(1g生药/kg)、雌雄虫混合水煎液(1g生药/kg),正常组和模型组大鼠给予等量纯净水(10 mL/kg).连续干预5d后,比较各组大鼠造模前后瘀肿处腿径,采用硝酸还原法(比色法)和放射免疫法检测各组大鼠血清中一氧化氮(nitricoxide,NO)、内皮素(endothelin,ET)-1、血栓素(thromboxane,TX)B2 和 6-酮-前列腺素(6-keto-protaglandin,6-K-PG)F1α的水平.结果 与正常组比较,模型组大鼠瘀肿处腿径增加,血清NO和6-K-PGFlα水平下降,血清ET-1和TXB2 水平升高,差异均有统计学意义(P<0.05).干预后各治疗组大鼠瘀肿处腿径缩小,血清NO、ET-1、TXB2、6-K-PGFlα水平显著回调(P<0.05).雌虫组、雄虫组和雌雄虫组之间比较,各指标水平差异无统计学意义(P>0.05).结论 土鳖虫雌虫和雄虫对外伤血瘀证均有较好的疗效,且二者的疗效未见明显差异.

目的 探讨大黄蛰虫丸(熟大黄、土鳖虫、水蛭,等)对小鼠酒精性肝纤维化损伤的保护作用及机制.方法 以C57BL/6雄性小鼠为研究对象,构建酒精性纤维化损伤模型,用大黄蛰虫丸进行干预.检测血清中谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、白介素6(IL-6)、白介素10 (IL-10)、干扰素γ(IFN-γ)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平,取肝组织做Ⅰ型胶原蛋白(COL-1)荧光染色、TUNEL染色和切割半胱天冬酶-3(CC3)表达的测定.结果 与模型组比较,大黄蛰虫丸组小鼠血清中ALT、AST、IL-6、IFN-γ、TNF-α水平均下降,IL-10水平升高.肝脏COL-1水平下降,肝细胞凋亡减少和CC3表达降低.结论 大黄蛰虫丸通过调节炎症因子的水平,减少COL-1的沉淀,抑制肝细胞的凋亡,从而对小鼠酒精性肝纤维化损伤产生保护作用.

目的:对雄性土鳖虫不同分子量物质进行活性测定,得到最强活性片段.方法:采用不同截留孔径的超滤、纳滤;DA201-c树脂、葡聚糖G25对样品进行分子量分离,得到不同分子量组分,并采用体外抗凝实验、溶栓实验、平板实验等测定其活性.结果:采用超滤、纳滤得到小于1000 Da、1000～3000 Da、大于3000 Da组分,并通过实验测定得到1000～3000 Da的物质活性最强,再通过DA201-C树脂对活性组分进行极性分离,得到三个洗脱组分:25％乙醇洗脱组分、50％乙醇洗脱组分、75％乙醇洗脱组分.并通过抗凝、溶栓试验得到50％乙醇洗脱组分活性最强.再将50％乙醇洗脱组分经过G25进行分离,得到三个峰位,分别记为FIV1、FIV2、FIV3.经抗凝、溶栓实验测得FIV2活性强.在经过高效液相得出FIV2组分的分子量集中于1000～ 1500 Da.结论:通过超滤、树脂、尺寸排阻色谱分离得到的活性组分,可以进一步进行分离,为以后的肽段测序奠定基础.

目的 探讨土鳖虫调控黏结合蛋白聚糖3(SDC3)对胆碱缺乏(CDAA)诱导的非酒精性脂肪性肝炎的作用及其机制.方法 18只雄性C57BL/6小鼠随机分为胆碱充足(CSAA)组、CDAA组和胆碱缺乏加土鳖虫(CDAA+T)组.造模第12周开始,CDAA+T组小鼠给予0.108 g/kg土鳖虫(相当于成人用量10倍量)灌胃,CSAA、CDAA组以等体积生理盐水灌胃,18周末取血清和肝组织,检测小鼠肝功能、TC和TG,观测肝组织病理形态学.实时定量PCR检测转化生长因子(TGF)β1、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原(Col1α1)、SDC3 mRNA表达;检测SDC3在人和小鼠原代肝细胞、肝星状细胞(HSC)、内皮细胞和Kupffer细胞中的表达,应用Si-RNA沉默SDC3,检测SDC3在HSC活化中的作用.蛋白免疫印迹法检测SDC3蛋白表达.计量资料多组间比较采用单因素方差分析,组内进一步两两比较采用SNK或LSD-t检验.结果 与CSAA组相比,CDAA组肝功能(ALT、AST)、血清和肝脏TC、TG水平显著升高(P值均<0.01),CDAA+T组小鼠血清ALT、AST、TC、TG水平较CDAA组均显著下降(P值均<0.05).HE染色显示CDAA组脂肪变明显,炎症细胞浸润增多,CDAA+T组炎症细胞浸润减轻;天狼星红染色显示CDAA组胶原增生显著增加,CDAA+T组胶原增生则减少;油红染色中CDAA组脂肪沉积明显,而CDAA+T组脂肪沉积减少.与CDAA组相比,CDAA+T组肝组织TGFβ、SDC3、α-SMA、COL1α1的mRNA表达和SDC3、α-SMA蛋白表达水平显著降低.免疫组化结果显示:SDC3在CSAA组中表达非常低,CDAA组中SDC3表达显著升高,主要在间质细胞,土鳖虫干预后表达显著降低(P值均<0.05).PCR结果显示:人和小鼠肝脏各类型细胞中SDC3在HSC细胞表达最高(P值均<0.001).体外培养LX2细胞,土鳖虫处理能显著降低TGFβ诱导的α-SMA、Col1α1上调,基因沉默SDC3后,土鳖虫不能抑制α-SMA、Col1α1升高(P值均<0.05).结论 土鳖虫显著改善CDAA诱导的非酒精性脂肪性肝炎,其机制可能通过调控HSC中SDC3表达实现的.