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利用Pseudonocardia sp.微生物转化制备骨化醇类化合物
编辑人员丨2023/8/6
[背景]近年来骨化醇类化合物(活性维生素D及其类似物)在肿瘤治疗、免疫调节中的作用逐渐被发现,药用价值显著,但目前化学合成法制备困难,因此高效制备骨化醇类化合物成为研究热点. [目的]利用假诺卡氏菌(Pseudonocardia sp.)转化骨化醇类底物分子并提高转化率.[方法]从化学合成方法常用的原料及中间体中筛选能被有效转化的底物分子,利用单因素及正交试验对转化条件进行优化.[结果]筛选到阿法骨化醇(Alfacalcidol,1α-(OH)VD3)、艾地骨化醇中间体(Eldecalcitol intermediate,AD-M07)、帕立骨化醇中间体(Paricalcitolintermediate,PC-M07)3种底物分子,分别被转化为骨化三醇(Calcitriol,1α,25(OH)2VD3)、艾地骨化醇中间体(Eldecalcitol intermediate,AD-M08)、帕立骨化醇(Paricalcitol,PC).确定最优转化条件:蛋白胨20.0 g/L,葡萄糖15.0 g/L,部分甲基化的β-环糊精(PMCD) 0.5％(质量体积比),转化温度25-30℃C,接种量5％-10％(体积比),转化时间72、72、96 h,底物浓度1.2、0.6、0.6 mg/mL,初始pH 6.0-8.0.在此条件下3种底物的最高转化率分别达到85％、96％、75％.[结论]通过转化条件的优化3种产物的转化率大幅提高,为更加快速高效地利用微生物转化法制备骨化醇类化合物提供参考.
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编辑人员丨2023/8/6
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具有羟基化酶体系活性的重组大肠杆菌的构建
编辑人员丨2023/8/6
VD3羟化酶(VD3 Hydroxylase,VDH)是一种P450单加氧酶,属于CYP107家族,能够催化维生素D3的25位羟基化.铁氧化还原蛋白(Ferredoxin,FDX)和铁氧化还原蛋白还原酶(Ferredoxin reductase,FDR)是两个电子传递链蛋白,参与羟化反应中电子的传递.构建具有羟基化酶体系活性的重组大肠杆菌,为骨化醇类化合物的高效转化提供参考.分别构建重组质粒pETDuet-1-fdr-fdx及pACYCDuet-1-vdh,将两个相容性质粒同时转入大肠杆菌BI21(DE3)中.采用IPTG对重组大肠杆菌进行诱导,使其表达目的蛋白,利用SDS-PAGE检测其蛋白大小及可溶性.采用液体传代的方法研究质粒稳定性.酶切鉴定和测序证明重组质粒pETDuet-1-fdr-fdx及pACYC-Duet-1-vdh构建成功.SDS-PAGE结果显示目的蛋白大小与预期一致.重组大肠杆菌可以将阿法骨化醇和艾地骨化醇中间体(AD-M07)分别转化成骨化三醇和艾地骨化醇中间体(AD-M08),转化率分别为36.10％和22.87％,转化时间为12 h,比自养假诺卡氏菌缩短600％.重组大肠杆菌经传代50次,质粒稳定性达到92％以上,说明该重组大肠杆菌菌株稳定性较好.实验成功构建了具有羟基化酶体系活性的重组大肠杆菌,为高效转化阿法骨化醇和艾地骨化醇中间体(AD-M07)奠定了基础.
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编辑人员丨2023/8/6
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子宫肌瘤与维生素D关系的研究进展
编辑人员丨2023/8/5
子宫肌瘤是妇科常见的良性肿瘤,严重影响女性的生活质量.目前临床治疗子宫肌瘤的思路是根据个体差异制定不同的保守治疗方案或手术治疗方案,但这些治疗方案都存在弊端.多年来,医学界一直在寻找更佳的治疗子宫肌瘤的方案,维生素D与子宫肌瘤之间的关系也因此被发现.作为一种类固醇类化合物,维生素D在人体各器官组织中起到重要作用.已证实的与维生素D有关的妇产科疾病包括不孕症、多囊卵巢综合征和早产等.近十年的研究证实,人体内维生素D水平降低是子宫肌瘤发生、发展的危险因素之一,目前也有研究发现补充维生素D及其类似物可以起到治疗子宫肌瘤的作用.
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编辑人员丨2023/8/5
