-
去泛素化酶ABRO1对李斯特菌感染单核巨噬细胞IL-1β释放的影响及其机制
编辑人员丨2024/4/27
目的 观察去泛素化酶Abraxas兄弟蛋白(ABRO1)对李斯特菌(LM)感染的小鼠单核巨噬细胞J774A.1白细胞介素(IL)-1β释放的影响,并探讨相关机制.方法 培养J774A.1细胞,分别感染有李斯特菌溶血素O(LLO)的野生型LM菌株(野生型组)、敲除LLO的hly基因缺失(Δhly)LM菌株(基因缺失组)及Δhly株回补hly基因的LM菌株(回补株组),采用Western blotting法检测ABRO1蛋白,ELISA法检测细胞培养液上清中的IL-1β.将J774A.1细胞分为NI组(未感染LM菌株)、WT组(感染WT LM菌株)与Δhly组(感染Δhly LM菌株),各组分别转染NC siRNA、ABRO1 siRNA,采用ELISA法检测细胞培养液上清中的IL-1β,采用Western blotting法检测炎症小体相关分子Caspase-1、p20(Caspase-1活化形式)、IL-1β、p17.结果 随着感染时间延长,野生型组、回补株组ABRO1表达、IL-1β水平逐渐增高,在感染120 min达到最高、均高于基因缺失组(P均<0.05);基因缺失组不同时点ABRO1表达、IL-1β水平无明显变化.WT组转染ABRO1 siRNA的细胞培养液上清中IL-1β水平及p20、p17表达低于转染NC siRNA的细胞(P均<0.05);WT组转染NC siRNA的细胞培养液上清中IL-1β水平及p20、p17表达高于NI组(P均<0.05);Δhly组转染NC siRNA的细胞培养液上清中IL-1β水平及p20、p17表达低于WT组(P均<0.05).结论 李斯特菌感染的J774A.1细胞中ABRO1表达增高,下调ABRO1表达后,J774A.1细胞中IL-1β释放减少;LLO可能通过激活炎症小体从而促进LM感染诱导的IL-1β释放.
...不再出现此类内容
编辑人员丨2024/4/27
-
髓系特异性Abro1基因敲除小鼠构建和表型初步分析
编辑人员丨2023/8/5
目的:构建髓系特异性Abro1(Abraxas brother 1)基因敲除小鼠,并初步分析其对小鼠造血系统及LPS诱导败血症的影响.方法:采用CRISPR/Cas9基因编辑技术和Cre/LoxP重组系统构建Abro1flox/+小鼠,将Abro1flox/+雌雄小鼠自交,子代得到Abro1flox/flox基因型小鼠.Abro1flox/flox与Lyz2-Cre+小鼠交配,子代得到Abro1flox/+/Lyz2-Cre+小鼠,再将其与Abro1flox/flox交配,最终得到的Abro1flox/flox/Lyz2-Cre+小鼠为髓系特异性Abro1基因敲除小鼠,即MKO小鼠;Abro1flox/flox/Lyz2-Cre?小鼠作为野生型小鼠,即WT小鼠.提取WT和MKO小鼠尾基因组DNA,PCR扩增后琼脂糖凝胶电泳鉴定其基因型.提取WT和MKO小鼠免疫细胞蛋白,Western blot检测ABRO1蛋白表达.流式细胞术分析小鼠骨髓和外周血免疫细胞组成,检测MKO小鼠对造血系统的影响.LPS处理WT和MKO小鼠3 h,检测血清中相关生化指标变化以及炎症因子分泌情况.结果:PCR和Western blot结果显示髓系特异性Abro1基因敲除小鼠构建成功.流式细胞术结果显示WT和MKO小鼠骨髓和外周血中髓系细胞(CD11b+、CD11b+Ly6G+、CD11b+Ly6C+)和淋巴细胞组成(CD3+、B220+)无差异.LPS诱导败血症实验中,MKO小鼠相关生化指标和炎症因子水平均低于WT小鼠,表明MKO小鼠可抵抗LPS诱导的败血症.结论:成功构建ABRO1 MKO敲除小鼠,发现MKO小鼠造血系统正常,但可抵抗LPS诱导的败血症,ABRO1 MKO小鼠的建立为揭示ABRO1在免疫细胞亚群中的差异性调控机制提供了良好的动物模型.
...不再出现此类内容
编辑人员丨2023/8/5
