目的:探讨ANO10基因突变所致的常染色体隐性脊髓小脑共济失调10型（SCAR10）1例患者的临床表型及基因突变特点。方法:应用全外显子测序技术对中日友好医院神经科2018—2020年收集的30个已排除Friedreich共济失调及继发性共济失调的拟诊为隐性遗传共济失调家系先证者进行全外显子基因检测，结合一代测序对患者及家系成员进行突变位点验证，应用软件对突变位点进行致病性分析，对收集的患者进行详细的神经科体检及辅助检查。结果:发现1例ANO10基因突变所致的40岁男性SCAR10患者。该患者临床表现为进行性走路不稳、构音障碍并伴有轻度认知功能减退，外周血辅酶Q 10水平减低（0.76 μg/ml），头颅磁共振平扫可见小脑明显萎缩。全外显子测序发现该患者ANO10基因存在复合杂合突变：c.1219-2A>C、c.1163-2A>G，均为新突变，一代测序家系验证结果显示2个突变分别来自其表型正常的父母，生物信息学分析结果显示2个剪切区突变均有致病性。 结论:通过全外显子测序发现了1例ANO10基因复合杂合突变所致的SCAR10患者，该病在中国罕见，常以进行性小脑共济失调为主要表现，多伴有认知功能减退，影像学检查可见明显的小脑萎缩。

目的 构建基于钙激活氯离子通道蛋白1(ANO1)的Piezo1调节剂高通量筛选模型.方法 RT-PCR和Western印迹法分别检测Fischer大鼠甲状腺上皮(FRT)细胞Piezo1 mRNA和蛋白表达.构建共表达增强型绿色荧光蛋白标记的ANO1(ANO1-EGFP)和黄色荧光蛋白双突变体(YFP-H148Q/I152L)的FRT细胞株(简称FRT模型细胞),倒置荧光显微镜检测ANO1-EGFP和YFP-H148Q/I152L在FRT模型细胞中的表达,加入ANO1激活剂离子霉素10μmol·L-1,应用荧光淬灭动力学实验检测并计算FRT模型细胞相对荧光强度变化值.加入Piezo1调节剂Jedi1(200μmol·L-1),Jedi2(150μmol·L-1),Yoda1(20μmol·L-1)和Gd3+(20μmol·L-1),应用荧光淬灭动力学实验检测并计算FRT模型细胞相对荧光强度变化值.加入Piezo1激活剂Jedi1,Jedi2和Yoda1,按0.2,1,5,10,25,50,75,100,200,300,400,500,600,700,800,900和1000μmol·L-1设置浓度梯度,应用荧光淬灭动力学实验检测并计算FRT模型细胞相对荧光强度变化值并绘制浓度依赖曲线.向FRT细胞中加入Yoda1,按同样的方法设置浓度梯度,通过Fura-2/AM荧光探针检测细胞内的钙信号随Yoda1浓度的变化,分析细胞内Ca2+浓度与FRT模型细胞相对荧光强度变化值之间的关系.计算模型Z′因子及信噪比.结果 RT-PCR、DNA测序比对和Western印迹结果表明,FRT细胞内源性表达Piezo1.ANO1-EGFP和YFP-H148Q/I152L表达清晰,位置正确,并且ANO1-EGFP被离子霉素激活后模型荧光淬灭,证实转染基因表达的蛋白具有生物学活性,FRT模型细胞构建成功.FRT模型细胞加入Jedi1,Jedi2和Yoda1荧光均淬灭,加入Gd3+后再加入Yoda1荧光不淬灭,证实模型可以用于筛选Piezo1通道调节剂;在FRT模型细胞中离子霉素的EC50为(7.76±0.53)μmol·L-1,Yoda1的EC50为(17.27±1.21)μmol·L-1,Jedi1的EC50为(200.60±4.46)μmol·L-1,Jedi2的EC50为(158.10±4.65)μmol·L-1.FRT模型细胞相对荧光强度变化值与细胞内Ca2+浓度呈正相关,模型能敏感地反应细胞内钙信号变化.模型Z′因子为0.82,信噪比为13.29:1,可用于Piezo1通道调节剂高通量筛选.结论 成功构建了可快速、准确、便捷筛选Piezo1通道激活剂和抑制剂的高通量筛选模型.

患者男,31岁,因“双手不自主抖动10年余,言语不清及记忆力下降、行走不稳2年余,加重伴视物成双3个月”于2019年7月10日就诊于首都医科大学宣武医院.10余年前无明显诱因出现双手不自主抖动,于持物时出现,安静时消失,程度较轻不影响日常生活.2年前出现言语不清及记忆力下降,言语不清表现为音量较低,吐字不清,记忆力下降表现以近记忆力为主,自述常常不能回忆起当天发生的事情,伴行走不稳,多次就诊于河北省沧州中西医结合医院,诊断“可疑小脑萎缩”,未予治疗,上述症状持续进展.2019年4月出现视物成双,向左视时显著.既往体健.足月出生,分娩过程中无缺氧事件,精神运动发育无异常,父母体健.弟弟体健.父母为近亲结婚(姑表兄妹),余无特殊.家族中无类似患者.