目的:探讨Alisertib耐药的分子机制并寻找Alisertib耐药的潜在靶点。方法:用Alisertib连续处理结肠癌细胞系建立耐药细胞株并命名为HCT－8－7T细胞，将HCT－8－7T细胞及人结肠癌细胞系HCT－8接种至免疫缺陷小鼠体内，观察小鼠其他器官转移瘤的情况。采用细胞克隆实验及Transwell迁移实验检测细胞的增殖及迁移能力，采用Seahorse分析仪检测细胞糖酵解及谷氨酰胺代谢能力的差异，Western blot和实时荧光定量聚合酶链反应检测糖酵解及上皮－间质转化(EMT)标志物相关蛋白表达水平及mRNA水平。结果:接种HCT－8－7T细胞的小鼠肝脏、肺脏、肾、卵巢等转移灶数量多于接种HCT－8细胞的小鼠(均 P<0.05)。HCT－8－7T细胞腺嘌呤核苷三磷酸水平[(0.10±0.01)mmol/L]、糖酵解水平[(81.77±8.21)mpH/min]及糖酵解能力[(55.50±3.48)mpH/min]均高于HCT－8细胞[分别为(0.04±0.01)mmol/L、(27.77±2.55)mpH/min和(14.00±1.19)mpH/min，均 P<0.05]。HCT－8－7T细胞中p53蛋白表达水平及mRNA表达水平低于HCT－8细胞(均 P<0.05)。HCT－8－7T细胞中miR－125b表达水平(2.21±0.12)高于HCT－8细胞(1.00±0.00， P<0.001)。在HCT－8－7T细胞中，过表达p53导致细胞克隆数[(162.00±24.00)个]及细胞迁移率[(18.53±5.67)%]低于空白对照组[分别为(274.70±40.50)个和(100.00±29.06)%，均 P<0.05]。miR－125b mimic组HCT－8－7T细胞糖酵解水平[(25.28±9.51)mpH/min]低于空白对照组[(54.38±12.70)mpH/min， P<0.05]。与空白对照组HCT－8－7T细胞比较，miR－125b mimic组HCT－8－7T细胞中p53和β－catenin蛋白水平升高，PFK1和HK1蛋白水平降低(均 P<0.05)。 结论:miR－125b沉默p53是导致Alisertib耐药的机制之一，靶向miR－125b是克服Alisertib耐药的潜在可用之策。

背景 与目的Aurora-A(AURKA)在乳腺癌中过表达,并且与乳腺癌患者的不良预后相关.最近,选择性Aurora-A抑制剂alisertib(MLN8237)被证实在多种癌症的单药治疗中表现出令人鼓舞的抗肿瘤活性,但III期临床试验却报道了失败的治疗结果,MLN8237未能明显延长患者的生存时间.因此,发现能够增强MLN8237活性的潜在分子,可为获得更好的治疗效果提供合理的联合用药方案.方法 本研究中,我们在乳腺癌细胞中用MLN8237对507个激酶进行了系统的合成致死性CRISPR/Cas9筛选,鉴定出了一组与MLN8237具有合成致死活性相互作用、可作为药物靶标的激酶.随后,我们用竞争性生长分析、克隆形成实验、细胞活性分析、凋亡分析和异种移植瘤小鼠模型,评价了Haspin(GSG2)缺失或抑制与MLN8237的协同治疗效果.在机制研究方面,用免疫荧光法检测了微管状态及Aurora-B和有丝分裂着丝粒相关驱动蛋白(mitotic centromere-associated kinesin,MCAK)的定位.结果 我们发现,Haspin缺失或抑制可轻微抑制癌细胞生长,却明显增强了MLN8237的细胞杀伤活性.机制研究表明,Aurora-A抑制剂与Haspin抑制剂共同给药,阻碍了Aurora-B与MCAK被招募到着丝粒,这与过度的微管解聚作用、动粒-微管(kinetochore-microtubule,KT-MT)连接失败及严重的有丝分裂灾难相关.我们进一步发现,MLN8237与Haspin抑制剂CHR-6494联合给药,在降低乳腺癌细胞的活力方面发挥了协同作用,并显著抑制了体外和体内实验中的肿瘤生长.结论 以上结果表明,Haspin可作为一个合成致死靶点,CHR-6494可作为一种潜在的联合用药,改善MLN8237对乳腺癌的疗效.