目的:探讨miR－513a－3p靶向鼠双微体基因2(MDM2)对胃癌细胞的增殖、迁移和侵袭的影响及其作用机制。方法:采用脂质体法将miR－NC、miR－513a－3p、anti－miR－NC、anti－miR－513a－3p、si－NC、si－MDM2、miR－513a－3p＋pcDNA3.1和miR－513a－3p＋pcDNA3.1－MDM2转染至BGC－823细胞中，采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT－PCR)检测miR－513a－3p的表达水平，采用Western blot检测cyclin D1、MMP－2、p21、E－cadherin和MDM2蛋白的表达水平，四甲基偶氮唑蓝法检测各组胃癌细胞BGC－823的活性，Transwell法检测各组胃癌细胞BGC－823的迁移和侵袭能力，双荧光素酶报告基因检测实验检测miR－513a－3p与MDM2的靶向关系。结果:胃癌细胞BGC－823、MGC－803中miR－513a－3p的表达水平分别为0.21±0.02和0.34±0.03，与胃上皮细胞GES－1(0.76±0.08)比较，差异均有统计学意义(均 P<0.05)。培养24、48和72 h后，miR－NC组细胞的吸光度( A)值分别为0.57±0.05、1.03±0.10和1.43±0.14，miR－513a－3p组细胞的 A值分别为0.36±0.03、0.48±0.05和0.63±0.06，差异均有统计学意义(均 P<0.05)；miR－NC组细胞的迁移和侵袭数分别为(130±11.80)个和(117±10.60)个，miR－513a－3p组细胞分别为(58±5.64)个和(50±5.13)个，差异均有统计学意义(均 P<0.05)。培养24、48和72 h后，si－NC组细胞的 A值分别为0.53±0.05、0.95±0.10和1.36±0.14，si－MDM2组细胞的 A值分别为0.39±0.04、0.57±0.06和0.80±0.08；si－NC组细胞的迁移和侵袭数分别为(141±12.02)个和(109±10.60)个，si－MDM2组的迁移和侵袭数分别为(66±6.67)个和(61±6.18)个，差异均有统计学意义(均 P<0.05)。培养24、48和72 h后，miR－513a－3p＋pcDNA3.1组细胞的 A值分别为0.34±0.03、0.46±0.05和0.61±0.06，miR－513a－3p＋pcDNA3.1－MDM2组细胞的 A值分别为0.48±0.05、0.82±0.08和1.17±0.12，差异均有统计学意义(均 P<0.05)；miR－513a－3p＋pcDNA3.1组细胞的迁移和侵袭数分别为(56±5.71)个和(51±5.16)个，miR－513a－3p＋pcDNA3.1－MDM2组分别为(113±10.28)个和(104±10.02)个，差异均有统计学意义(均 P<0.05)。 结论:miR－513a－3p可抑制胃癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力，其机制可能与靶向调控MDM2的表达有关，可为胃癌的预防和治疗提供新靶点。

目的:探讨miR－141－3p对胃癌细胞增殖和迁移及核转录因子κB(NF－κB)信号通路的影响。方法:培养人胃癌细胞株BGC－823，采用脂质体转染技术将miR－141－3p模拟物(miR－141－3p mimics)转染至BGC－823细胞构建miR－141－3p过表达的BGC－823细胞株。实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT－PCR)检测转染效果，噻唑蓝比色法检测miR－141－3p对BGC－823细胞增殖的影响，Transwell实验检测miR－141－3p对BGC－823细胞迁移的影响，Western blot法检测NF－κB信号通路相关NF－κB p65、p－IKK－α和p－IKB－α蛋白的表达情况。结果:与对照组和阴性对照组比较，miR－141－3p组BGC－823细胞中miR－141－3p的表达水平为2.39±0.27，高于对照组(1.00±0.09)和阴性对照组(1.01±0.10)，差异均有统计学意义(均 P<0.05)；过表达miR－141－3p后，miR－141－3p组的迁移细胞数为(47.64±5.65)个，低于对照组[(106.22±12.14)个]和阴性对照组[(110.40±12.26)个]，差异均有统计学意义(均 P<0.05)；BGC－823细胞中NF－κB p65、p－IKK－α和p－IKB－α蛋白的表达水平下调( P<0.05)。 结论:miR－141－3p可抑制人胃癌BGC－823细胞的增殖和迁移，其作用机制可能与抑制NF－κB信号通路的激活有关。

目的 研究miRNA?96?5p在胃癌细胞和组织中的表达水平以及对胃癌细胞增殖、侵袭的影响和分子机制.方法 收集2015年6月至2017年1月手术切除的胃癌标本53例,采用实时荧光定量PCR法检测胃癌组织和癌旁组织中miRNA?96?5p的表达水平,采用免疫组化法检测叉头框蛋白Q1(FoxQ1)蛋白的表达,分析miRNA?96?5p的表达与胃癌患者临床病理特征和FoxQ1蛋白表达的相关性.采用实时荧光定量PCR法检测miRNA?96?5p在胃癌细胞和正常胃黏膜上皮细胞中的表达.以miRNA?96?5p模拟物转染人胃癌BGC?823细胞,采用细胞计数盒8( CCK?8)法检测BGC?823细胞的增殖,采用Transwell小室法检测BGC?823细胞的侵袭,采用Western blot法检测FoxQ1、E?cadherin和Vimentin蛋白的表达.采用双荧光素酶活性实验验证miRNA?96?5p对FoxQ1的靶向作用.结果胃癌组织中miRNA?96?5p的中位表达水平为1.05,明显低于癌旁组织( 3.23,P＜0.05).胃癌组织中FoxQ1蛋白的阳性表达率(71.7%)明显高于癌旁组织( 28.3%,P＜0.05).相关性分析显示,FoxQ1蛋白在胃癌组织中的表达与miRNA?96?5p的表达呈负相关( r＝－0.613,P＝0.006). miRNA?96?5p在胃癌BGC?823细胞中的表达水平为0.96±0.08,低于正常胃黏膜上皮细胞GES?1( 2.84±0.15,P＜0.05).与空白对照组和miRNA模拟物对照组BGC?823细胞比较, miRNA?96?5p模拟物组BGC?823细胞的增殖和侵袭能力均受到明显抑制(均P＜0.05),且miRNA?96?5p模拟物组BGC?823细胞中FoxQ1和Vimentin蛋白的表达水平降低,E?cadherin蛋白的表达水平增高.双荧光素酶报告基因检测结果显示,FoxQ1是miRNA?96?5p的靶基因.结论 miRNA?96?5p在胃癌组织和细胞中表达下调,miRNA?96?5p通过调控FoxQ1基因的表达影响胃癌细胞的增殖、侵袭和上皮间质转化.

目的 分析MAGEA6在胃癌中的表达及其意义和对胃癌细胞生物学作用的影响.方法 收集2009年12月－2010年6月医院样本库中经手术切除的90例胃癌组织芯片样本,利用免疫组化检测胃癌组织芯片中MAGEA6的表达情况,分析MAGEA6表达与胃癌临床病理特征的关系, Kaplan-Meier在线分析MAGEA6表达与胃癌预后的关系.体外培养BGC-823胃癌细胞系,设置si-MAGEA6组(转染si-MAGEA6)与si-Ctrl组(转染空载体对照).采用CCK-8法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡情况, Western blotting检测MAGEA6、凋亡相关蛋白[B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)]、自噬相关蛋白[微管相关蛋白轻链3-Ⅱ(LC3-Ⅱ)、p62蛋白(p62)、自噬相关基因5(Atg-5)蛋白、酵母ATG6同源物(Beclin 1)]、Akt/mTOR信号通路相关蛋白[蛋白激酶B(Akt)、磷酸化蛋白激酶B (p-Akt)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(p-mTOR)]的表达,扫描电镜和激光共聚焦显微镜观察自噬小体形成情况和自噬流的变化.结果 MAGEA6在胃癌组织中的免疫组化评分高于癌旁组织[(3.77±1.50)分vs. (2.58±1.11)分,P<0.05].MAGEA6高表达与年龄、TNM分期有关(P<0.05).si-MAGEA6组胃癌细胞活力低于si-Ctrl组( P<0.05),细胞凋亡率高于si-Ctrl组(14.97%±0.86% vs . 4.63%±0.55%, P<0.05).si-MAGEA6组MAGEA6、Bcl-2、p62、p-Akt和p-mTOR表达水平低于si-Ctrl组,Bax、Atg-5、Beclin 1表达水平以及LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ高于si-Ctrl组(P<0.05).si-MAGEA6组胃癌细胞胞质内自噬小体明显增多,且自噬小体与溶酶体形成自噬溶酶体.结论 MAGEA6在胃癌组织中呈高表达,沉默MAGEA6的表达可抑制胃癌细胞增殖.MAGEA6可能是胃癌有效的生物标志物及潜在的治疗靶点.