目的:探讨Birinapant抗肝癌的作用及分子机制.方法:人肝癌细胞QGY-7701经终浓度为0、1、5、25和125 nmol/L的Birinapant作用24、48和72 h,各设3个复孔,检测细胞增殖活性,分析细胞凋亡率,观察细胞核型和线粒体膜电位变化,分析基因转录与表达水平,评价药物细胞毒性;同时,将4周龄雄性BALB/C小鼠随机分成5组,每组20只,腹股沟注射肝癌细胞QGY-7701,两天后各组皮下分别注射Birinapant(0、1、5、25和125μg/kg),隔天注射一次,首次注射Birinapant后18 d,每组脱颈处死10只小鼠,取瘤组织称重,并记录各组剩余10只小鼠的存活期,观察Birinapant对荷瘤小鼠肝癌生长及生存期的影响.结果:与对照组(NC)比较,Birinapant处理组的细胞增殖显著受抑制、细胞凋亡率显著增加(P<0.01),出现细胞线粒体膜电位降低及核型改变,同时细胞内Ciap-1(cellular inhibitor of apoptosis protein 1)、Ciap-2(cellular inhibitor of apoptosis protein 2)、ras、raf、mek、erk基因的表达显著下调(P<0.01),caspase-3和caspase-9基因的表达水平显著上调(P<0.01);与模型对照组(MG)比较,Biri-napant处理组的荷瘤小鼠瘤组织生长速度显著减小且生存期延长(P<0.01).结论:Birinapant通过抑制Ciap-1、Ciap-2和Ras-Raf-MEK-ERK通路蛋白的表达,激活线粒体介导的内源性凋亡,对肝癌有一定的抑制作用.

目的:探讨SMAC类似物Birinapant预处理对大鼠肝脏缺血再灌注损伤(I/RI)的保护作用及分子机制.方法:将大鼠分为空白对照组(Blank)、对照组(Control)和Birinapant预处理组(Birinapant).Blank组不做任何处理,Control组腹腔注射30 mg/kg体重的生理盐水,1 h后构建大鼠肝脏I/RI模型,Birinapant组腹腔注射30 mg/kg体重的Birinapant,1 h后构建大鼠肝脏I/RI模型.各组在模型建立4 h后取下肝脏组织,HE染色检测各组肝脏大体形态及炎症反应;收集大鼠外周血,ELISA检测血清中TNF-α、IL-6及IL-1β炎症因子水平;提取肝脏库普弗细胞(KCs),免疫荧光检测KCs中cIAP1和TRAF3的表达;Western blot检测cIAP1和TRAF3与MAPK信号通路密切相关的JNK、p-JNK、p38及p-p38的蛋白表达.结果:与Control组相比,Birinapant预处理可以显著抑制肝脏I/RI诱导的肝组织损伤和炎症反应;Birinapant预处理也可显著降低血清中TNF-α、IL-6及IL-1β炎症因子水平;Birinapant预处理可抑制KCs中cIAP1的表达进而抑制TRAF3的降解;Birinapant预处理可抑制KCs中p-JNK和p-p38的表达进而抑制MAPK信号通路的激活.结论:预处理Birinapant可以通过抑制cIAP1的表达抑制TRAF3的降解,进而通过抑制MAPK信号通路的激活,发挥对肝脏I/RI的保护作用.

目的:探讨SMAC类似物Birinapant对小鼠非酒精性脂肪性肝炎(NASH)形成的影响及分子机制.方法:将C57BL/6小鼠分为对照组,MCD组及Birinapant组.对照组普食喂养,MCD组用MCD饲料喂养,Birinapant组在MCD喂养的同时,每隔2周腹腔注射一次Birinapant(25 mg/μg),4周后处死,取肝组织、外周血,测量小鼠及肝组织大小和质量;检测小鼠肝组织病理改变;检测小鼠血清肝功能ALT和AST水平;提取肝脏Kupffer细胞(KCs),Western blot检测KCs中cIAP1、TRAF3、p-p65和p65的蛋白表达.结果:与对照组相比,MCD组小鼠及肝组织大小和质量显著降低,肝组织结构紊乱,肝细胞空泡样改变伴大量炎症细胞浸润,血清ALT和AST水平显著增高,KCs中cIAP1和p-p65的水平显著增高,TRAF3的表达受抑制.与MCD组相比,Birinapant组小鼠及肝脏体积和质量显著高于MCD组,肝组织结构纹理相对正常,肝细胞空泡样改变显著减少,浸润的炎症细胞显著减少,肝功能异常显著改善, KCs中cIAP1和p-p65的水平显著降低,TRAF3的表达显著增高.结论:SMAC类似物Birinapant可能通过抑制KCs cIAP1的表达和TRAF3的降解,通过抑制p-p65的活化,抑制炎症因子的表达,进而缓解MCD介导的小鼠NASH形成.