目的:评价博舒替尼对内毒素血症小鼠急性肺损伤的影响。方法:清洁级健康雄性C57BL/6小鼠60只，8~12周龄，体重20~25 g，采用随机数字表法分为4组( n＝15)：对照组(C组)、博舒替尼组(B组)、内毒素血症组(LPS组)和博舒替尼+内毒素血症组(B+LPS组)。采用腹腔注射LPS 10 mg/kg的方法制备内毒素性急性肺损伤模型。B+LPS组于造模前0.5 h、B组于相应时点，尾静脉注射博舒替尼5 mg/kg。于造模后24 h时，处死小鼠，观察肺组织病理学结果，并行肺损伤评分，计算肺系数(LI)、肺湿重/干重(W/D)比值；行伊文思蓝染色，检测肺组织伊文思蓝含量；采用Western blot法检测血管内皮钙黏蛋白(VE-cadherin)、血管细胞粘附分子1(VCAM-1)、血管内皮钙黏蛋白(VE-cadherin)、磷酸化核转录因子κB p65(p-NF-κB p65)和磷酸化核因子κB抑制蛋白α(pIκB-α)的表达，采用RT-PCR法检测IL-1β、IL-6、TNF-α的mRNA表达。 结果:与C组比较，LPS组LI、肺W/D比值、肺组织伊文思蓝含量和肺损伤评分升高，肺组织IL-1β mRNA、TNF-α mRNA、IL-6 mRNA、VCAM-1、p-NF-κB p65和pIKB-α表达上调，VE-cadherin表达下调( P<0.05)，B组上述指标比较差异无统计学意义( P>0.05)。与LPS组比较，B+LPS组LI、肺W/D比值、肺组织伊文思蓝含量和肺损伤评分降低，肺组织IL-1β mRNA、TNF-α mRNA、IL-6 mRNA、VCAM-1、p-NF-κB p65和pIKB-α表达下调，VE-cadherin表达上调( P<0.05)。 结论:博舒替尼可减轻内毒素血症小鼠急性肺损伤。

目的 通过蛋白激酶抑制方法研究伴集落刺激因子-1受体(CSF1R)突变的急性髓系白血病细胞系GDM-1的增殖机制.方法 按照处理方式不同将GDM-1细胞分为实验组和对照组,将10种不同的蛋白激酶抑制剂作用于实验组,对照组仅做DMSO处理;CCK8法检测细胞增殖抑制情况;Western blot检测蛋白激酶抑制剂作用于GDM-1后,关键激酶的磷酸化水平的改变;细胞因子M-CSF单独或与蛋白激酶抑制剂共同作用于GDM-1细胞,采用CCK8法进行检测细胞增殖水平.结果 蛋白激酶抑制分析显示明显抑制GDM-1细胞增殖的药物有dasatinib(IC50=0.01μmol/L)、bosutinib(IC50=0.07μmol/L)、linifanib(IC50=0.13μmol/L)及sorafenib(IC50=0.12μmol/L).Western blot显示,与对照组相比,linifanib作用于GDM-1后,SRC、ERK磷酸化水平明显降低(P<0.01).在低浓度FBS培养时,细胞因子M-CSF能够刺激伴CSF1R突变型细胞系GDM-1的增殖,其增殖水平为对照组的11.3倍;M-CSF联合bosutinib作用于GDM-1,细胞增殖明显被抑制(P<0.001),而M-CSF联合HG6-64-1作用于GDM-1,与仅用M-CSF组相比细胞增殖不受影响.结论 GDM-1细胞中CSF1R-Y571D突变使CSF1R活性增高,并主要通过激活Src及MAPK信号通路来促进细胞增殖.

作为一种新型的双重Src/Abl激酶抑制剂,博舒替尼(bosutinib,SKI-606)能够显著抑制食管癌细胞的增殖并促进其凋亡.本文通过检测博舒替尼作用于人食管癌细胞Eca-109后磷酸化蛋白质组的变化,研究了博舒替尼在食管癌中可能的作用靶点及机制.结果显示:在2 741个磷酸化蛋白质上共鉴定到11 335条磷酸化肽段、7 940个磷酸化位点,差异磷酸化肽段为182个,其中上调55个,下调127个;除了抑制Src、Abl外,博舒替尼还显著影响JUN、核糖体蛋白S6、CD44、SFRS蛋白激酶2等蛋白质的磷酸化,而这些差异磷酸化蛋白质主要参与mRNA代谢、细胞骨架组织、锌离子转运等重要生物学过程.KEGG信号通路富集显示,差异磷酸化蛋白质主要涉及转录、翻译、核糖体相关的信号通路.上述结果提示,博舒替尼可能通过影响mRNA代谢、细胞骨架组织及锌离子转运等生物过程中关键蛋白质的磷酸化发挥抑制食管癌的作用,而JUN和核糖体蛋白S6可能是食管癌中博舒替尼的潜在作用靶点.

目的 基于双相动力学分析靶向药物联合应用对肝癌细胞SNU-387增殖的影响,并探讨其作用机制.方法 MTT法检测肝癌细胞SNU-387对11种酪氨酸激酶抑制剂(AZD6244、AZD6482、BGJ-398、BMS-754807、bosutinib、crizotinib、dasatinib、gefitinib、imatinib、sunitinib、HG6-64-1)的敏感性;分别采用单靶点动力学公式和双相动力学公式分析肝癌细胞SNU-387与BMS-754807、dasatinib和HG6-64-1的相互作用,计算拟合曲线的残差平方和(the sums of squared residues,SSR);Western blot法检测BMS-754807、dasatinib和HG6-64-1对SNU-387细胞关键信号通路的影响;MTT法检测BMS-754807、dasatinib和HG6-64-1联合应用对SNU-387细胞增殖的影响,计算减量指数(dose reduction index,DRI).结果 SNU-387细胞对BMS-754807、HG6-64-1及1μmol/L的dasatinib比较敏感.与单靶点动力学公式比较,双相动力学公式可更好地分析肝癌细胞SNU-387与酪氨酸激酶抑制剂的相互作用.BMS-754807、dasatinib和HG6-64-1联合应用时F1相靶点不重合,对SNU-387细胞增殖具有显著协同抑制作用.结论 BMS-754807、dasatinib和HG6-64-1通过同时抑制不同靶点协同抑制肝癌细胞SNU-387的增殖,三者联合应用有望成为一种治疗肝癌的潜在药物组合.

目的:探究盐诱导激酶2(SIK2)对大鼠心肌能量代谢的影响及其机制.方法:通过结扎冠脉左前降支建立大鼠急性心梗模型,实验分为假手术组(Sham)、缺血再灌注组(I/R)、SIK2抑制组(I/R+Bosutinib)(10 mg/kg处理24 h).心脏超声检测各组大鼠心脏结构和功能;HE染色观察大鼠心肌细胞病理学变化;ELISA检测各组大鼠心肌组织中腺苷三磷酸(ATP)、乳酸(LA)的含量;蛋白印迹法(WB)检测各组大鼠心肌组织中SIK2、p-DRP1(Ser616)、DRP1、p-AKT、AKT、p-mTOR、mTOR蛋白表达水平.结果:与Sham组相比,I/R组心肌细胞病理损伤加重且SIK2蛋白表达增加(P＜0.05);与I/R组相比,I/R+Bosutinib组SIK2表达降低且心肌病理损伤减轻.与Sham组相比,I/R组LVEF、FS降低(P＜0.05);与I/R组相比,I/R+Bosutinib组LVEF、FS增高(P＜0.05),各组IVS、LVPW无明显差异(P＞0.05).与Sham组相比,I/R组ATP含量减少,LA含量增加(P＜0.05),与I/R组相比,I/R+Bosutinib组ATP含量增加,LA含量减少(P＜0.05).与Sham组相比,I/R组p-DRP1(Ser616)表达增多,p-AKT、p-mTOR蛋白表达减少(P＜0.05);与I/R组相比,I/R+Bosutinib组p-DRP1(Ser616)蛋白表达减少,p-AKT、p-mTOR蛋白表达增多(P＜0.05);各组mTOR、AKT、DRP1蛋白无明显差异(P＞0.05).结论:SIK2可能通过AKT/mTOR信号通路及促进线粒体裂变抑制能量代谢,抑制SIK2可提高心肌能量代谢水平进而减轻心肌缺血/再灌注损伤.

目的:探索博舒替尼(Bosutinib)对大鼠脑缺血/再灌注损伤早期的干预作用.方法:40只SD大鼠随机分成4组(随机数字法),每组10只,设sham组(对照组):只分离颈部血管,不做其他处理;MCAO(模型组):采用改良线栓法制作大鼠脑缺血/再灌注损伤模型,缺血2 h后再灌注24 h;DMSO组(溶剂组):实验前1 d尾静脉注射溶剂DMSO(0.752 ml/kg),脑缺血2 h再灌24 h;Bosutinib组(干预组);实验前1 d予以尾静脉注射现配的Bosu-tinib(4 mg/kg),脑缺血2 h再灌24 h.缺血/再灌注24 h后,进行神经功能评分;用TTC染色后计算脑梗死面积;Western blot法检测SIK2蛋白表达水平;ELISA检测脑组织中细胞因子TNF-α、IL-6含量.结果:神经功能评分,与sham组比较,MCAO及DMSO组的评分显著升高(P<0.05);与MCAO及DMSO两组比较,Bosutinib组的评分显著下降(P<0.05).脑梗死体积,与sham组对比,MCAO及DMSO组梗死体积百分比均显著增大(P<0.01);与MCAO及DMSO两组相比较,Bosutinib组脑梗死体积百分比显著减少(P<0.01).SIK2的蛋白表达,与sham组比较,MCAO及DMSO组的SIK2蛋白表达无显著变化(P>0.05);与MCAO及DMSO比较,Bosutinib组SIK2蛋白表达显著下降(P<0.05).炎症因子变化,与sham组对比,MCAO组及DMSO组的IL-6、TNF-α含量均显著升高(P<0.05);与MCAO组及DMSO组比较,Bosutinib组IL-6、TNF-α含量均显著下降(P<0.05).结论:Bosutinib可减少脑缺血/再灌注引起的损伤,其可能机制与抑制SIK2蛋白及炎症因子的表达有关.