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Tis108对天麻GA含量及其失活关键酶GeCYP714A1基因表达的影响
编辑人员丨4天前
为探究独脚金内酯抑制剂Tis108对天麻生长的影响,该研究采用10 μmol·L-1的Tis108溶液处理白麻块茎,对块茎的内源激素赤霉素(GA)含量进行测定,通过RT-PCR技术克隆GA失活关键酶GeCYP714A1基因,借助ExPASy、SWISS-MODEL、MEGA 等软件对该基因进行生物信息学分析,并测定其在天麻不同组织部位的表达水平.结果显示,Tis108处理后天麻块茎的GA含量显著升高,GA失活关键酶GeCYP714A1的转录水平显著降低.GeCYP714A 1基因的编码区全长1 173 bp,编码390个氨基酸,蛋白的相对分子质量为44.85 kDa,理论等电点为9.83,不稳定系数为49.20,脂肪系数为89.03,总平均亲水指数平均值为-0.235,属于碱性亲水性不稳定蛋白;且GeCYP714A1蛋白定位于线粒体,无信号肽,不具有跨膜结构.系统进化树分析显示,GeCYP714A1与铁皮石斛DcCYP714C2(PKU78454.1)蛋白亲缘关系最近,序列一致性达67.25％.利用qRT-PCR技术分析天麻GeCYP714A1基因的表达模式,结果显示在天麻块茎中GeCYP714A1转录水平最高,其次是茎和花序.该研究表明Tis108可抑制天麻块茎中GA失活酶GeCYP714A1的转录水平,提高GA的积累量,影响天麻块茎生长,为进一步揭示独脚金内酯调控天麻GA信号和块茎发育奠定基础.
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编辑人员丨4天前
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栽培远志qRT-PCR内参基因筛选与P450s基因的时空表达分析
编辑人员丨2023/8/6
目的 筛选适用于不同生长年限和不同部位的栽培远志实时荧光定量PCR分析(quantitative real time PCR,qRT-PCR)的稳定内参基因,为远志体内各个基因表达分析提供合适内参基因.并对4个细胞色素P450单加氧酶(cytochrome P450 monooxygenase,P450s)基因在上述远志样品中的差异表达进行分析,明确4个P450s基因在栽培远志中的时空表达分布.方法 通过qRT-PCR获取Tubulinl、Tubulin 2、Elongation l、Elongation2、Actin1、Actin 2、GAPDH和cdc-42 8个候选内参基因在上述远志样品中的熔解曲线与Ct值;利用软件geNorm和NormFinder对候选内参基因的表达稳定性进行评价;通过qRT-PCR分析4个P450s基因CYP709B2、CYP71AP39、CYP88A85、CYP714E38在上述远志样品中的相对表达情况.结果 geNorm分析结果表明,在远志(1～3年生)根、茎、叶、花中稳定表达的为Tubulin2与Elongation1;NormFinder结果显示,Elongation1是最稳定的内参.CYP709B2、CYP71AP39基因在远志茎、叶(1～3年生)中的mRNA表达量最高,在根与花中的表达量则较少.而CYP88A85、CYP714E38基因则在远志根(1～3年生)中的mRNA表达水平较高.结论 Elongation 1适合作为栽培远志体内基因表达分析的内参基因.栽培远志中的P450s基因在远志根、茎、叶、花中的表达趋势不一致.
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编辑人员丨2023/8/6
