目的:探讨HER2免疫组织化学（IHC）检测结果为0乳腺癌患者HER2 mRNA的表达特征，初步分析以HER2基因表达水平分层乳腺癌HER2超低表达和HER2无表达（IHC无染色）的可行性。方法:收集北京协和医院2020年1月至2023年3月手术的甲醛固定石蜡包埋的浸润性乳腺癌组织标本41例，包括21例HER2 IHC 1+和20例HER2 IHC 0（HER2超低表达12例，HER2无表达8例）。采用数字PCR方法，以荧光FAM（HER2）/VIC（内参基因）比值计算HER2 mRNA水平。结果:HER2 IHC 1+、HER2超低表达及HER2无表达的HER2 mRNA表达分别为0.30~1.78（平均0.90，中位0.82）、0.55~1.51（平均0.93，中位0.90）及0.22~0.78（平均0.41，中位0.36）。每组HER2 mRNA表达的平均值和中位值，HER2 IHC 1+和HER2超低表达之间差异无统计学意义（ P=0.757）；HER2 IHC 1+与HER2无表达及HER2超低表达与HER2无表达之间差异有统计学意义（分别 P=0.002， P=0.001）。 结论:根据HER2 mRNA水平，HER2无表达与HER2弱表达（HER2 1+和HER2超低表达）属于两组不同的肿瘤；而HER2 1+和HER2超低表达可能是同一组肿瘤。有必要进一步验证以HER2 mRNA精细分层HER2弱表达的能力及确定阈值。

目的:探讨在间叶性软骨肉瘤的甲醛固定石蜡包埋组织中检测HEY1-NCOA2融合基因对间叶性软骨肉瘤的诊断价值。方法:收集间叶性软骨肉瘤6例，尤文肉瘤、滑膜肉瘤、孤立性纤维性肿瘤/血管外皮瘤各5例作为对照，用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）法检测各组病例中有无HEY1-NCOA2融合基因并以PGK基因为内参检测RNA的质量。结果:6例中有4例成功提取到总RNA，其中3例检测出HEY1-NCOA2融合基因，阳性比例为3/4，对照组均未检测出HEY1-NCOA2融合基因。结论:HEY1-NCOA2融合基因在间叶性软骨肉瘤中有较高的检出比例。

目的:探索使用病理石蜡样本检测新型冠状病毒的方法。方法:采用荧光定量PCR技术，使用新型冠状病毒核酸扩增试剂盒，检测临床确诊患者的肺组织病理石蜡样本1例，无病毒感染肺组织石蜡样本2例和正常人群咽拭子样本2例。建立检测体系，判读检测结果。结果:经过荧光定量PCR反应和信号采集，所有5例样本RNA内参HEX信号扩增曲线均有升起；临床确诊患者手术石蜡样本RNA FAM信号（N基因）扩增曲线升起（Ct值35.48），ROX信号（ORF1ab基因）曲线未升起。重复试验FAM信号扩增曲线升起（Ct值36.00），ROX信号曲线未升起。结合2次检测结果，该例患者病理石蜡样本新型冠状病毒阳性。同时作为对照的2例无感染病理石蜡组织样本和2例正常人群咽拭子样本病毒核酸检测均为阴性。结论:病理石蜡样本提取的总RNA可以满足新型冠状病毒检测的质量要求；根据新型冠状病毒检测指南建议设计和生产病毒核酸检测试剂盒可以满足病理石蜡样本检测的需要；使用所建荧光定量PCR检测体系，病理石蜡样本可以用于进行新型冠状病毒的核酸检测。

目的:对2018-2020年昆明地区腹泻患者中艰难梭菌感染特征进行分析，为后续监测和防治提供数据支持。方法:收集2018-2020年云南省4家哨点医院腹泻患者粪便标本共388份，使用实时荧光定量PCR方法进行艰难梭菌粪便毒素基因检测，对结果阳性的粪便标本进行菌株的分离，用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱鉴定菌株。提取分离菌株的基因组DNA进行多位点序列分型（MLST）。分析毒素阳性和菌株分离阳性与患者的临床特征以及艰难梭菌阳性与其他病原共感染的情况。结果:388份粪便标本中，艰难梭菌内参 tpi基因阳性标本47份，总阳性率为12.11%。其中，非产毒艰难梭菌4份（8.51%），产毒艰难梭菌43份（91.49%）。47份阳性标本分离得到18株艰难梭菌，阳性标本的分离率为38.30%。其中 tcdA、 tcdB、 tcdC、 tcdR和 tcdE基因均为阳性的菌株14株。18株艰难梭菌的二元毒素均为阴性。所有分离菌株的MLST结果共形成10种序列型（ST），其中ST37型5株（27.78%）；ST129、ST3、ST54和ST2型各2株；ST35、ST532、ST48、ST27和ST39型各1株。粪便毒素基因阳性（ tcdB+）结果与患者年龄、就诊前发热差异有统计学意义；菌株分离阳性仅与患者年龄差异有统计学意义。同时，部分腹泻患者存在艰难梭菌与其他腹泻病毒共感染的情况。 结论:昆明地区腹泻患者中艰难梭菌的感染多为产毒株，MLST结果具有高度的离散特征，应加强开展艰难梭菌的监测和预防。

目的:建立儿童干扰素刺激基因（ISG）表达检测方法，确立参考值范围，初步探讨其临床应用价值。方法:纳入2017年11月至2021年9月就诊于北京协和医院儿科的Ⅰ型干扰素病患者作为疾病组，同时纳入健康儿童作为对照组。疾病组共纳入18例患儿，其中男性8例，女性10例，共采集血液样本25份，首次检测的中位年龄为8.5岁。对照组共纳入28名健康儿童，年龄1~18岁，中位年龄10.5岁，其中男性15名，女性13名。分别提取疾病组和对照组外周血总RNA并逆转录为互补DNA（cDNA）。以β肌动蛋白基因（β-Actin）和鸟氨酸脱羧酶抗酶基因（OAZ）为内参，采用实时荧光定量聚合酶链反应（qPCR）检测干扰素诱导的四肽重复蛋白1基因（IFIT1）、干扰素α诱导蛋白27基因（IFI27）、干扰素诱导蛋白44样基因（IFI44L）、干扰素刺激基因15（ISG15）、唾液酸结合的免疫球蛋白样凝集素1基因（SIGLEC1）、含有S-腺苷甲硫氨酸结构域2基因（RSAD2）的相对表达量，以6个ISG的中值为干扰素评分（IS）。去除正常对照中表达明显异常的样本，将其他样本的cDNA混合作为参照，重新检测各样本并计算IS，将大于对照 xˉ+2 s的IS结果判断为异常。用独立样本 t检验或Mann-Whitney U检验比较组内和组间IS的差异。 结果:对照组IS均值为1.046，标准差0.755，IS截断值为2.556。18例Ⅰ型干扰素病患者组IS异常的有15例（15/18），IS均值为27.010。与对照组相比，干扰素疾病患者组IS明显升高（ t=4.247， P=0.000 1）。该检测方法的准确度为91.30%（42/46），精密度为7.47%（0.084/1.124），敏感度为15/18，特异度为96.43%（27/28）。 结论:本研究通过ISG表达的检测并计算IS，为临床筛查以及动态监测Ⅰ型干扰素疾病变化提供了新的可靠的手段。

目的:探讨胸腺增龄性萎缩与胸腺上皮细胞(thymus epithelial cells，TECs)内参与胸腺发育KGF、Foxp3、Foxn1和IL-6等基因表达的相关性。方法:将18只无特定病原体( specific pathogen free，SPF)小鼠按月龄分组，每组6只。无菌取胸腺，应用实时定量聚合酶链式反应(real-time quantitative PCR，RT-PCR)检测TECs细胞中KGF、Foxp3、Foxn1和IL-6等基因的表达。结果:小鼠TECs细胞中KGF、Foxp3、Foxn1和IL-6基因表达在随着年龄增加而变化，3、10、16月龄的小鼠KGF表达量分别为(0.90±0.06), (0.58±0.07)和(0.18±0.07)，差异具有统计学意义( P值分别为0.030，0.020，<0.001)；Foxp3表达量分别为(0.93±0.10)，(0.60±0.08)和(0.20±0.06)，差异具有统计学意义( P值分别为0.020，0.020，<0.001)；Foxn1表达量分别为(0.92±0.09), (0.63±0.09)和(0.16±0.08)，差异具有统计学意义( P值分别为0.020，0.010，<0.001)；IL-6表达量分别为(0.33±0.11), (0.46±0.06)，(0.88±0.09)，差异具有统计学意义( P值分别为0.052，0.001，<0.001)。同时，胸腺质量的增龄性减少与TECs细胞KGF、Foxp3、Foxn1和IL-6等表达相关性结果显示，小鼠TECs细胞KGF、Foxp3和Foxn1在mRNA水平表达与胸腺增龄性萎缩(胸腺质量)情况呈正相关(KGF： r＝0.941， R2＝0.886， P<0.001。Foxp3： r＝0.939， R2＝0.881， P<0.001。Foxn1： r＝0.918， R2＝0.842， P<0.001)，而IL-6的mRNA表达与胸腺增龄性萎缩(胸腺质量)情况呈负相关( r＝－0.866， R2＝0.749， P<0.001)。 结论:胸腺基质微环境增龄性变化和胸腺发育关键基因表达增龄性改变是导致小鼠胸腺增龄性萎缩的主要原因，提示KGF、Foxp3和Foxn1等基因的时序性表达调节胸腺增龄性萎缩的进程。

目的:探讨CC趋化因子受体2(CCR2)在瓣膜间质细胞成骨转化中的作用及其机制。方法:2020年6月东南大学附属中大医院实验室通过胶原酶消化法改良后实施体外分离大鼠瓣膜间质细胞后进行培养、鉴定，并以随机抽签法将细胞分成试验组及对照组。对照组细胞培养基中加入2 ml的RPMI 1640完全培养液，试验组细胞培养基中则加入RPMI 1640完全培养液以及1.0 ng/ml的MCP-1。比较两组细胞中CCR2蛋白表达水平，碱性磷酸酶(ALP)、骨形态发生蛋白(BMP)-2蛋白与内参灰度比值，ALP、BMP-2基因与内参灰度比值，采用Pearson法进行相关性的分析。结果:试验组细胞中CCR2蛋白表达水平高于对照组(1.549±0.392比0.742±0.257， t＝5.444， P<0.05)。试验组ALP蛋白与内参灰度比值明显高于对照组(0.732±0.052比0.189±0.029， t＝28.840， P<0.05)。试验组BMP-2蛋白与内参灰度比值明显高于对照组(0.891±0.058比0.401±0.033， t＝23.220， P<0.05)。试验组ALP基因与内参灰度比值明显高于对照组(0.248±0.006比0.104±0.003， t＝67.882， P<0.05)。试验组BMP-2基因与内参灰度比值明显高于对照组(0.518±0.048比0.198±0.039， t＝16.362， P<0.05)。CCR2蛋白表达量与ALP蛋白和内参灰度比值( r＝0.513， P<0.05)、BMP-2蛋白和内参灰度比值( r＝0.513， P<0.05)、ALP基因和内参灰度比值( r＝0.602， P<0.05)、BMP-2基因和内参灰度比值( r＝0.616， P<0.05)均呈正相关关系。 结论:CCR2可促进瓣膜间质细胞向成骨样细胞转化。

目的:探讨原发性肝内胆管结石(PHL)患者肝切除术后黏蛋白5B的表达及其临床意义。方法:收集2014年1月至2019年1月在温州医科大学附属第三医院行肝切除的48例肝内胆管结石患者(PHL组)和16例非结石性良性肝病对照患者(对照组)的胆管黏膜、胆管壁、胆汁及静脉血。对两组患者术前胆汁及血清指标进行对比。免疫组化染色法检查胆管壁黏蛋白1与黏蛋白5B的表达，HE常规染色病理检查胆管壁。以黏蛋白1为阳性对照，以β-actin为内参基因，实时-PCR检查胆管黏膜黏蛋白1与黏蛋白5B的信使RNA表达水平。采用Pearson相关性分析对PHL组组内变量进行相关性分析。结果:PHL组患者术前血清脂类指标均较对照组高，而胆汁总胆汁酸浓度[(181.5±18.2) mmol/L比(192.1±22.5) mmol/L]、胆汁酸摩尔百分比[(80.7±1.6)%比(89.7±1.0)%]较对照组低，差异均具有统计学意义( P<0.05)。PHL组黏蛋白1信使RNA的表达较对照组高，但差异无统计学意义( P>0.05)。PHL组黏蛋白5B信使RNA的表达较对照组明显高[(0.94±0.12)比(0.73±0.24)]，差异具有统计学意义( P<0.05)；胆管黏蛋白5B信使RNA的表达增强与胆汁中的总胆汁酸水平呈负相关( r＝-0.4， P<0.05)。 结论:黏蛋白5B表达增强与PHL关系密切，可能与促进了胆管黏膜上皮对胆汁酸的吸收，使黏蛋白大量分泌进入胆汁，导致致石胆汁形成有关。

目的:应用高通量二维PCR技术（2D-PCR），建立一种单管一步法检测和鉴定宫颈细胞中16种高危型人乳头瘤病毒（HR-HPV）亚型（HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、66、68、73、82）、 p53（rs1042522）和 RB1（rs3092905）基因型的方法。 方法:根据16种不同亚型HR-HPV、 p53及 RB1基因DNA序列设计特异性引物，同时将待测靶基因 p53及 RB1基因作为评判标本取样及PCR扩增成功与否的内参基因。在3个荧光检测通道中，采用相应标签标记不同亚型HR-HPV、 p53及 RB1的上游引物，并构建完善的2D-PCR检测体系。应用该方法检测804份来源于常州市第一人民医院2022年12月至2023年8月妇科门诊的宫颈刷样本，将检测结果与PCR-反向点杂交法、流式荧光杂交法、单重实时荧光定量PCR法分别进行一致性比较；同时采用Sanger测序法检测 p53和 RB1的基因型。采用 Kappa检验评价2D-PCR法和其他方法间的一致性。 结果:2D-PCR可通过FAM、HEX和Alexa Fluor568通道的特征性熔解谷对16种HR-HPV型别和 p53、 RB1的基因型进行准确区分和鉴定。2D-PCR法与PCR-反向点杂交法具有较高的一致性（ Kappa=0.699），与流式荧光杂交法具有更高的一致性（ Kappa=0.793），和单重荧光定量PCR法的一致性 Kappa=0.880（95% CI 0.862~0.907）。以Sanger测序法为金标准，2D-PCR法检测 p53、 RB1基因型的准确度为100%。 p53 rs1042522 位点3种基因型（G/G型、G/C型和C/C型）的分布频率为32.09%（258/804）、49.88%（401/804）和18.03%（145/804）， RB1 rs3092905位点检出基因型均为A/A型。 结论:成功开发了一种2D-PCR方法，用于高危型HR-HPV型别鉴定与宫颈癌相关肿瘤抑制基因 p53和 RB1的基因分型。

目的:探讨常规内参基因U6和Cel-miR-39用于结核性脑膜炎患者脑脊液微小核糖核酸（miRNA）定量检测的可行性，并初步用于脑脊液miRNA定量检测分析。方法:本研究选取首都医科大学附属北京胸科医院常规脑脊液检测后保存的标本，根据最终诊断依据纳入结核性脑膜炎患者36例、病毒性脑膜炎患者34例。提取其脑脊液标本miRNA，采用TaqMan探针法检测miRNA的表达水平。采用GeNorm、NormFinder和Bestkeeper软件分析内参基因miRNA的稳定性，采用2 -ΔCt方法计算靶标miRNA的相对表达量。标本重复检测的一致性分析采用Pearson检验。靶标基因在两组间的表达差异比较采用 t检验。 结果:70份脑脊液标本中，U6检测的循环阈值（Ct）为（30.40±3.30）个循环，表达丰度较低，Cel-miR-39检测的C t值为（21.49±0.70）个循环，表达丰度适中。内参和靶标基因miRNA在重复样本检测中一致性均较好（ r>0.931, P<0.001）。根据3种软件分析结果，Cel-miR-39在70份脑脊液标本中表达稳定性更高，更适合作为脑脊液miRNA检测的内参基因。以Cel-miR-39为内参，靶标基因miR-126-3p（1.13±0.41比3.34±0.82, t=2.452, P=0.016）、miR-130a-3p（0.56±0.10比2.59±0.70, t=2.960, P=0.004）和miR-151a-3p（0.64±0.25比2.11±0.33, t=3.536, P=0.001）在结核性脑膜炎组脑脊液中的相对表达量均显著低于病毒性脑膜炎组。 结论:Cel-miR-39可作为结核性脑膜炎患者脑脊液中miRNA定量检测的标准内参，脑脊液中miR-126-3p、miR-130a-3p和miR-151a-3p的相对表达量在结核性脑膜炎患者和病毒性脑膜炎患者之间存在差异。